糞菌移植治療炎癥性腸病的臨床效果觀察

許建勇

炎癥性腸病是一類特定的腸道慢性疾病,主要包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎,可導(dǎo)致胃腸道病變,并可累及口腔、肛門部位,癥狀包括腹痛、腹瀉、發(fā)熱和體重減輕,嚴(yán)重者可能導(dǎo)致血性腹瀉、血便、貧血,患者罹患腸癌的風(fēng)險更大,需盡早干預(yù)治療?？肆_恩病、潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病原因并不明確,目前相關(guān)理論涉及自體免疫性疾病、遺傳學(xué)、腸道菌群改變、環(huán)境因素等。糞菌移植是將健康人糞便中菌群分離、移植到患者胃腸道內(nèi)的特殊治療方式,近年來該療法逐漸成熟,受到了基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)的高度關(guān)注。糞菌移植可重建和糾正異常的腸道菌群,有助于治療腸道疾病,并可改善腸道外疾病和相關(guān)全身疾病。我國利用人體新鮮糞便或者發(fā)酵糞水治病的歷史悠久,近年來糞菌移植療法逐漸成熟,用于腸易激綜合征、代謝性疾病、自身免疫性疾病和肥胖癥等疾病臨床治療的報道逐漸增多,為炎癥性腸病的治療提供了新的途徑,同時也為臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展提供了新的思路,腸道菌群移植作為治療腸道菌群相關(guān)疾病的新型醫(yī)療技術(shù),將會帶來超越常規(guī)治療所能達(dá)到的效果,并且有望解決患者癥狀無法緩解的問題［1］。此外,大量研究表明,人類腸道菌群與多種疾病密切相關(guān),經(jīng)腸道菌群移植治療后,可能會緩解患者的其他疾病癥狀,對于醫(yī)院的臨床醫(yī)學(xué)研究有著重要意義［2］。為進(jìn)一步探明腸道菌群移植對炎癥性腸病治療的臨床價值,本研究選擇本院2018 年1 月～2022 年6 月治療的42 例炎癥性腸病患者作為研究對象,對比分析了腸道菌群移植對炎癥性腸病的臨床療效和安全性,旨在探明治療炎癥性腸病的可靠方法,給臨床研究提供一條全新的思路?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2018 年1 月～2022 年6 月治療的42 例炎癥性腸病患者作為研究對象,隨機(jī)分為非移植組和糞菌移植組,每組21 例。糞菌移植組男女比例為13∶8；平均年齡(48.89±15.23)歲；平均病程(15.23±5.36)年；克羅恩病9 例,潰瘍性結(jié)腸炎12 例。非移植組男女比例為14∶7；平均年齡(48.78± 15.24)歲；平均病程(15.36±5.40)年；克羅恩病10 例,潰瘍性結(jié)腸炎11 例。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)院倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 年齡>18 歲,性別不限；符合炎癥性腸病診斷標(biāo)準(zhǔn)；經(jīng)腸道菌群16S rDNA 測序(中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)先進(jìn)技術(shù)研究院-卓源健康人體微生物組研究聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室)顯示,腸道菌群多樣性下降；經(jīng)口服藥物或生物反饋療法等綜合治療3 個月仍無效；無嚴(yán)重心功能不全、嚴(yán)重肺功能障礙,肝腎功能基本正常；患者接受上一次治療后至少2 周；預(yù)期生存時間 >12 個月；能合作觀察不良事件和療效；本人或其法定代理人簽署書面知情同意書；既往無腸道手術(shù)的病史；凝血功能正常。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 不符合炎癥性腸病診斷標(biāo)準(zhǔn)；患者對這項(xiàng)技術(shù)有任何疑慮或者存在其他風(fēng)險史；患者處于疾病末期或者可能在研究中死亡；入組前已參加其他任何菌群治療；乙型肝炎、結(jié)核、梅毒及人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體陽性或任何傳染性疾病急性期；心功能Ⅲ級及以上,轉(zhuǎn)氨酶升高超過正常上限的2 倍,腎功能不全；發(fā)熱體溫>38℃或臨床上有明顯的可影響本方案的活動性感染；嚴(yán)重貧血(血紅蛋白<60 g/L)、粒細(xì)胞減少、凝血酶原時間(PT)延長>1.5 s；有嚴(yán)重免疫缺陷；有明顯的心腦血管異常；有心律失常病史或判斷患有增加室性心律失常風(fēng)險的心臟??；入組后發(fā)現(xiàn)不符合治療方案；入組后發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重軀體疾?。灰缽男暂^差,不配合臨床治療方案；主動要求退出治療；有不能耐受的不良事件等。

1.3 方法

1.3.1 非移植組 非移植組口服美沙拉嗪腸溶片聯(lián)合雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊治療。美沙拉嗪腸溶片(商品名：惠迪,葵花藥業(yè)集團(tuán)佳木斯鹿靈制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字H19980148,規(guī)格：0.25 g),口服,1.0 g/次,3 次/d；雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊 (商品名：培菲康,上海上藥信誼藥廠有限公司,國藥準(zhǔn)字S10950032,規(guī)格：0.21 g),口服,2～4 粒/次,3 次/d。持續(xù)治療30 d。同時,根據(jù)患者病情,給予補(bǔ)液,糾正水電解質(zhì)紊亂、營養(yǎng)支持等對癥治療。

1.3.2 糞菌移植組 糞菌移植組在非移植組基礎(chǔ)上增加糞菌移植治療,具體措施如下。

1.3.2.1 治療方案 健康腸道菌群制劑：規(guī)格：40 ml/瓶；儲存條件：-80℃(12 個月)；運(yùn)輸條件：健康腸道菌群制劑置于干冰保藏箱中運(yùn)輸。3 次菌群移植為1 個療程,每次移植菌群制劑的量為120 ml。采用灌腸治療方式治療,每次間隔5～7 d。標(biāo)準(zhǔn)化腸道菌群制劑制備技術(shù)路線見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)化腸道菌群制劑制備技術(shù)路線

1.3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)化糞菌制備 本方案所用的標(biāo)準(zhǔn)化糞菌制備技術(shù)參照美國糞菌移植工作組發(fā)布的、中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會微生態(tài)學(xué)分會兒科微生態(tài)學(xué)組、歐洲糞菌移植工作組、食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)、生物制品審評與研究中心(CBER)等機(jī)構(gòu)與組織聯(lián)合發(fā)布的糞菌移植指南文件(78FR 12763)制定的糞菌制備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(版號：V5.2020),在中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)先進(jìn)技術(shù)研究院-卓源健康人體微生物組研究聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室(生物安全二級實(shí)驗(yàn)室)按照糞菌制備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(版號：V5.2020)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化糞菌制備完成。參與標(biāo)準(zhǔn)化糞菌制備的人員和質(zhì)控人員均受過專業(yè)的微生物分離及檢測訓(xùn)練,并具備微生物學(xué)或醫(yī)學(xué)等相關(guān)學(xué)科學(xué)歷背景。標(biāo)準(zhǔn)化菌群制劑復(fù)蘇流程如下：本制劑為-80℃條件下存儲,使用前需進(jìn)行梯度解凍復(fù)蘇：①-80℃,儲藏庫中存儲的腸道菌群制劑；②-20℃,移植前1 d從-80℃中取出放置于-20℃冰箱中至少4 h；③4℃,移植前一晚從-20℃中取出置于4℃冷藏冰箱中解凍 (8 h)；④25℃(室溫),移植前1 h 從4℃冷藏冰箱中取出置于室溫復(fù)蘇；⑤腸道菌群制劑溫度與室溫基本一致后,實(shí)施腸道菌群移植。

1.3.2.3 糞菌移植 患者取左側(cè)臥位,先進(jìn)行生理鹽水清潔灌腸,隨后將導(dǎo)尿管插入肛門(深度15 cm),注射器吸取120 ml 腸道菌群制劑注入,注射完成后,指導(dǎo)患者仰臥休息30 min,每次治療間隔5～7 d,3 次菌群移植為1 個療程。

1.4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較兩組患者治療前后Mayo 評分、CMDI 評分、QOL 評分及不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.4.1 Mayo 評分 Mayo 量表包括排便次數(shù)評分(0～ 3 分)、便血評分(0～3 分)、內(nèi)鏡檢查評分(0～3 分)、醫(yī)師總體評分(0～3 分),總評分0～12 分,評分與患者病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性［3］。

1.4.2 CMDI 評分 CMDI 評分范圍為0～10 分：0 分為結(jié)腸黏膜完全正常,無病變；1～2 分表示存在粘連,或僅有1 處潰瘍,腸壁無充血、增厚；3～5 分表示存在1 處以上潰瘍伴炎癥,但潰瘍和炎癥沿結(jié)腸縱軸 >1 cm；6～10 分表示潰瘍伴炎癥≥2 處,潰瘍和炎癥沿結(jié)腸縱軸損傷>2 cm。評分越高,則結(jié)腸黏膜損傷越嚴(yán)重［4］。

1.4.3 QOL 評分 QOL 量表包括食欲、精神、睡眠、疲乏、疼痛、同事的理解與配合、家庭的理解與配合、對治療的態(tài)度、疾病認(rèn)知、治療副作用、日常生活、復(fù)查等指標(biāo),評分0～100 分,分?jǐn)?shù)越高則生活質(zhì)量越高［5］。

1.4.4 不良反應(yīng)發(fā)生情況 兩組患者治療期間,觀察患者生命體征、體格檢查、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)、心電圖等變化,統(tǒng)計兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況,包括腹痛、腹脹、惡心嘔吐、腹瀉、頭痛頭暈、其他。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后Mayo 評分比較 治療前,兩組患者排便次數(shù)評分、便血評分、內(nèi)鏡檢查評分、醫(yī)師總體評分及總分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后,糞菌移植組患者排便次數(shù)評分、便血評分、內(nèi)鏡檢查評分、醫(yī)師總體評分及總分均顯著低于非移植組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者治療前后Mayo 評分比較(,分)

表1 兩組患者治療前后Mayo 評分比較(,分)

注：與非移植組治療后比較,aP<0.05

2.2 兩組患者治療前后CMDI 評分比較 治療前,兩組患者CMDI 評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后,糞菌移植組患者CMDI 評分顯著低于非移植組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者治療前后CMDI 評分比較(,分)

表2 兩組患者治療前后CMDI 評分比較(,分)

注：與非移植組治療后比較,aP<0.05

2.3 兩組患者治療前后QOL 評分比較 治療前,兩組患者QOL 評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后,糞菌移植組QOL 評分顯著高于非移植組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者治療前后QOL 評分比較(,分)

表3 兩組患者治療前后QOL 評分比較(,分)

注：與非移植組治療后比較,aP<0.05

2.4 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 糞菌移植組患者不良反應(yīng)發(fā)生率為28.57%(6/21),與非移植組的23.81%(5/21)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。兩組不良反應(yīng)癥狀較輕,可耐受,癥狀逐漸消退。

表4 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況比較［n(%)］

3 討論

近年來,炎癥性腸病的發(fā)病率逐年上升,患者發(fā)生結(jié)腸癌的風(fēng)險高于正常人,需積極提升其防控水平。炎癥性腸病的表現(xiàn)形式存在不同特征,但是也存在一些共同的癥狀,如腹痛、嘔吐、腹瀉、血便或體重減輕等,同時也存在關(guān)節(jié)炎、壞疽性膿皮病、原發(fā)性硬化性膽管炎、口腔復(fù)發(fā)性潰瘍等并發(fā)癥［6,7］。通常根據(jù)臨床表現(xiàn),結(jié)合血液檢查、糞便檢查、結(jié)腸鏡和活體組織切片等來診斷［8］。目前,炎癥性腸病沒有確切有效的治療方法,常用氨基水楊酸制劑、免疫抑制劑、類固醇藥物控制病情的突發(fā),但是臨床效果因人而異,臨床療效欠佳,亟待探索更為安全、有效的治療方案［9］。

炎癥性腸病與腸道菌群的失調(diào)密切相關(guān),炎癥性腸病患者與健康人群腸道菌群比較,在多樣性差別和特定物種豐度方面存在較大差異［10］。微生物對炎癥性腸病患者腸道炎癥環(huán)境的響應(yīng),同時預(yù)示腸道菌群物種組成改變對研究菌群失調(diào)的意義重大。同時,腸道菌群的代謝產(chǎn)物也可通過多種方式影響宿主,腸道菌群可以起到抑制病原菌,增強(qiáng)免疫耐受,開啟上皮修復(fù),確保免疫細(xì)胞亞群平衡的作用［11］?？傊?腸道菌群在炎癥性腸病中扮演很多角色,可保護(hù)宿主減輕炎癥,同時可直接引起炎癥。炎癥性腸病對腸道菌群豐度較高部位的影響較大,糞菌移植可重建健康菌群狀態(tài),改善腸道內(nèi)環(huán)境,可有效緩解腸黏膜損傷及炎性癥狀［12］。目前,糞菌移植被認(rèn)為是糾正腸道菌群失調(diào)的有效手段,其在治療艱難梭菌感染方面取得了成功,使得該療法被應(yīng)用于炎癥性腸病的臨床治療中。

腸道菌群移植作為治療腸道菌群相關(guān)疾病的新型醫(yī)療技術(shù),將會帶來超越常規(guī)治療的效果,特別是在臨床治療腸道菌群紊亂相關(guān)腸道疾病(艱難梭菌感染、炎性腸病、功能性便秘、腸易激綜合征)方面有著重要的臨床應(yīng)用價值,這種新型的治療方式受到基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)的關(guān)注［13,14］。我國小部分大型醫(yī)院已注冊開展糞菌治療和研究,成功報道逐漸增多,本項(xiàng)目在理論上可行。本院多年堅(jiān)持炎癥性腸病方面的研究,由知名微生物學(xué)教授、醫(yī)學(xué)專家等組成的專家團(tuán)隊(duì)作為技術(shù)支持,參與指導(dǎo)整個制備及質(zhì)控過程,相關(guān)理論基礎(chǔ)、技術(shù)都很成熟,在糞菌移植治療方面上可相互配合,順利完成研究任務(wù)。本臨床方案所用腸道菌群制劑的制備在中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)生物安全Ⅱ級實(shí)驗(yàn)室(BSL-2 實(shí)驗(yàn)室)進(jìn)行腸道菌群制劑標(biāo)準(zhǔn)化制備,整個制備過程在厭氧工作站和生物安全柜中完成。參與腸道菌群制劑制備的人員和質(zhì)控人員、選擇相關(guān)臨床指標(biāo)檢測,制定了糞菌移植方案,選配腸道菌群制劑,做好腸道準(zhǔn)備,實(shí)現(xiàn)腸道菌群制劑復(fù)蘇,并完成腸道菌群移植。本研究對糞菌移植患者隨訪及療效觀察發(fā)現(xiàn),治療后,糞菌移植組患者排便次數(shù)評分、便血評分、內(nèi)鏡檢查評分、醫(yī)師總體評分及總分分別為(1.22±0.43)、(1.18±0.32)、(1.12±0.32)、(1.16±0.42)、(4.89±1.02)分,均顯著低于非移植組的(1.84±0.52)、(1.72±0.46)、(1.76±0.42)、(1.90±0.39)、(7.98±1.32)分,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后,糞菌移植組患者CMDI 評分為(3.82±1.02)分,顯著低于非移植組的(5.36±1.13)分,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)?？芍獞?yīng)用糞菌移植新技術(shù),可有效改善患者炎癥反應(yīng)、腸黏膜損害,提示通過糞菌移植,可以改變目前炎癥性腸病患者的痛苦,腸道菌群移植作為治療腸道菌群相關(guān)疾病的新型醫(yī)療技術(shù),有望解決患者炎癥性腸病癥狀無法緩解的問題。此外,糞菌移植相關(guān)臨床研究表明,人類腸道菌群與多種疾病密切相關(guān)。經(jīng)腸道菌群移植治療后,可能會緩解患者的其他疾病癥狀,減少疾病對患者帶來的生活學(xué)習(xí)等不便,很大程度上減少患者的時間成本與經(jīng)濟(jì)損失［15-20］。本次研究也發(fā)現(xiàn),治療后,糞菌移植組QOL 評分為(88.89±8.01)分,顯著高于非移植組的(75.23±5.69)分,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。糞菌移植組患者不良反應(yīng)發(fā)生率為28.57%(6/21),與非移植組的23.81%(5/21)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。提示腸道菌群移植后,患者生活質(zhì)量顯著提高,有助于改善患者預(yù)后,促進(jìn)患者恢復(fù)正常生活與工作,有利于患者回歸社會,臨床應(yīng)用安全可靠,可知糞菌移植治療炎癥性腸病可以獲得良好的社會效應(yīng)與較大的經(jīng)濟(jì)效益。

綜上所述,炎癥性腸病與腸道菌群的失調(diào)密切相關(guān),糞菌移植作為醫(yī)療新技術(shù)在臨床上得以廣泛推廣,其在治療腸道菌群組成結(jié)構(gòu)紊亂相關(guān)性疾病方面,有著優(yōu)于傳統(tǒng)治療方式的臨床療效與安全性。糞菌移植治療可有效改善炎癥性腸病患者病情,促進(jìn)腸黏膜病灶修復(fù),提高預(yù)后生活質(zhì)量,安全可靠,臨床應(yīng)用價值較高,值得推廣借鑒。