CATA結(jié)合蛋白-6、堿性成纖維細胞生長因子基因在垂體瘤組織中的表達及與臨床病理特征關(guān)系

馮樂霄，李 晶

(1.咸陽市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 咸陽 712000;2.咸陽市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，陜西 咸陽 712000)

垂體瘤為顱內(nèi)常見良性腫瘤，其發(fā)生率約占全部顱內(nèi)腫瘤的10.00%。目前臨床上對于該病發(fā)病機制尚未完全闡明，認為它的發(fā)生可能與激素分泌失常、腫瘤相關(guān)基因表達變化等因素有關(guān)[1]。針對垂體瘤分析，發(fā)現(xiàn)隨瘤體組織的增大，極易引起局部壓迫和激素分泌異常，并伴有頭痛、惡心、嘔吐、視力減退等一系列臨床表現(xiàn)[2]。因此盡早診治顯得十分重要。近年來，隨著臨床對垂體瘤發(fā)生機制的研究，發(fā)現(xiàn)CATA結(jié)合蛋白-6(GATA-binding protein-6，GATA-6)和堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)在該類患者的中呈異常表達，且其表達水平會隨著垂體瘤侵襲性生長而發(fā)生改變[3]。本研究選取82例垂體瘤患者作為研究對象，旨在探討GATA-6和bFGF在垂體瘤組織中的表達及與臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2019年5月至2021年于本院實施手術(shù)治療的82例垂體瘤患者作為研究對象，收集手術(shù)切除的瘤組織與瘤旁正常組織，其中瘤組織設(shè)立為垂體瘤組，瘤旁正常組織設(shè)立為瘤旁正常組。病例納入標準：①經(jīng)臨床確診為垂體瘤，經(jīng)切除術(shù)治療；②首次發(fā)?。虎壅J知功能正常；④臨床資料完整。排除標準：①患有其他部及組織器官的良惡性腫瘤；②凝血功能障礙；③妊娠或哺乳階段。

1.2 研究方法

1.2.1 GATA-6、bFGF mRNA表達水平檢測：將手術(shù)切除的瘤組織與瘤旁正常組織儲存于液氮中，采用Trizol法從100 mg瘤組織與瘤旁正常組織中提取總RNA，經(jīng)L9紫外分光光度計檢測其純度合格后，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(System Bio-sciences公司生產(chǎn))將總RNA反轉(zhuǎn)為cDNA，再采用SYBR-Green熒光定量PCR檢測試劑盒(美國賽默飛世爾科技有限公司)檢測GATA-6 mRNA、bFGF mRNA表達,引物序列見表1。反應(yīng)條件：GATA-6：95 ℃、5 min，95 ℃、15 s，95 ℃、45 s，72 ℃、30 s，共進行30個循環(huán)，最后在72 ℃下延伸7 min；bFGF：94 ℃、4 min，94 ℃、50 s，55 ℃、50 s，72 ℃、60 s，共進行35個循環(huán)，最后在72 ℃下延伸10 min；采用閾值循環(huán)(Ct)的值確定GATA-6 mRNA、bFGF mRNA表達，以GAPDH基因作為內(nèi)參照，使用2-ΔΔCt方法計算相對表達量。

表1 GATA-6、bFGF引物序列

1.2.2 調(diào)查內(nèi)容及其方法：設(shè)計統(tǒng)一的病例調(diào)查表，由專業(yè)醫(yī)師收集垂體瘤患者的臨床資料，包括年齡、性別、激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為等。Hardy-Wilson分級：1級：垂體腫瘤直徑<10 mm，并位于鞍內(nèi)；2級：垂體瘤直徑達到10 mm，向鞍上擴展，充填鞍上池；3級：垂體瘤向鞍上擴展10～20 mm，影響第三腦室；4級：垂體瘤向鞍上擴展20～30 mm，充填第三腦室前部；5級：垂體瘤擴展>30 mm，到達側(cè)腦室室間孔區(qū)域。生物學(xué)行為：侵蝕性腺瘤與非侵蝕性腺瘤；其中侵蝕性垂體瘤是指瘤體生長突破包膜，侵犯硬腦膜視神經(jīng)骨質(zhì)等結(jié)構(gòu)組織，其組織形態(tài)學(xué)為良性，但生物學(xué)為惡性。

2 結(jié) 果

2.1 垂體瘤組與瘤旁正常組GATA-6、bFGF mRNA表達水平比較 垂體瘤組的GATA-6、bFGF mRNA表達水平高于瘤旁正常組(均P<0.05)，見表2。

表2 垂體瘤組與瘤旁正常組GATA-6、bFGF mRNA表達水平比較

2.2 GATA-6、bFGF mRNA水平表達與垂體瘤組患者臨床臨床病理特征的關(guān)系 垂體瘤組患者的激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為等不同臨床特征的GATA-6、bFGF mRNA水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表3。

表3 GATA-6、bFGF mRNA表達水平與垂體瘤組患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 不同臨床病理特征GATA-6 mRNA水平分層回歸分析 將“激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為”作為自變量，將“GATA-6 mRNA”作為因變量進行分層回歸分析，得出激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)并不會對GATA-6 mRNA產(chǎn)生影響關(guān)系(均P>0.05)；生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為會對GATA-6 mRNA產(chǎn)生顯著的負向影響關(guān)系(均P<0.05)。見表4。

表4 不同臨床病理特征GATA-6 mRNA水平分層回歸分析

2.4 不同臨床病理特征bFGF mRNA水平分層回歸分析 將“激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為”作為自變量，將“bFGF mRNA”作為因變量進行分層回歸分析，得出垂體瘤形態(tài)、生長類型并不會對bFGF mRNA產(chǎn)生影響關(guān)系(均P>0.05)；激素分泌功能、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為會對bFGF mRNA產(chǎn)生顯著的負向影響關(guān)系(均P<0.05)。見表5。

表5 不同臨床病理特征bFGF mRNA水平分層回歸分析

3 討 論

垂體瘤為中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見良性腫瘤，可表現(xiàn)出包繞頸內(nèi)動脈、破壞鞍底、入侵海綿竇等行為[4]。經(jīng)流行病學(xué)[5]調(diào)查，其發(fā)病率約為10%～20%，僅次于神經(jīng)表皮性腫瘤和腦膜瘤。目前臨床針對該病常采用手術(shù)方法治療，譬如神經(jīng)內(nèi)鏡引導(dǎo)經(jīng)鼻蝶入路切除術(shù)，通過摘除腫瘤組織，保護垂體并維持其正常功能[6]。但經(jīng)臨床實踐發(fā)現(xiàn)手術(shù)難以完全切除，術(shù)后易復(fù)發(fā)，可能與垂體瘤可表現(xiàn)出惡性腫瘤的某些生物學(xué)特性有關(guān)，呈侵襲性生長[7]；然而這些生物學(xué)特征與垂體瘤侵襲性生長之間的關(guān)系尚未完全闡明。GATA-6是一種致癌基因，位于染色體18q11.1～q11.2，具備調(diào)控595個氨基酸作用[8]。有研究[9]指出，其在腫瘤的發(fā)生、增殖、侵襲中具有重要作用。譬如結(jié)直腸癌，可通過抑制15-脂氧合酶H表達，促使癌細胞增殖；而在垂體瘤患者中，可能是通過誘導(dǎo)垂體腺瘤組織生長，使瘤體向鞍上、第三腦室及側(cè)腦室室間孔等區(qū)域擴展，通過腫瘤占位引起局部壓迫癥狀及激素分泌異常[10-11]。bFGF屬腫瘤血管新生和活化的標志物。據(jù)臨床研究[12-13]發(fā)現(xiàn)，其在血管形成和促進組織再生中具有重要作用。針對bFGF作用機制分析，可能與以下幾點有關(guān)：①通過刺激血管內(nèi)皮細胞增生，促進內(nèi)皮細胞產(chǎn)生大量的蛋白酶及內(nèi)皮遷移，進而形成新生毛細血管[14]；②通過促進垂體表皮和內(nèi)皮細胞再生，加速兩者分裂，并誘導(dǎo)其脫離基膜及刺激內(nèi)皮細胞向腫瘤組織趨化，形成管狀結(jié)構(gòu)[15-16]；③通過促進垂體腺瘤轉(zhuǎn)化基因表達，刺激細胞增殖及其分化[17-18]。在本研究結(jié)果中可見，垂體瘤組的GATA-6、bFGF mRNA表達顯著高于瘤旁正常組，表明其參與了垂體瘤的發(fā)生發(fā)展。

針對垂體瘤患者的病理特征分析，發(fā)現(xiàn)GATA-6、bFGF mRNA表達會隨著病理特征而發(fā)生改變，即功能性垂體瘤者GATA-6、bFGF mRNA表達高于無功能性垂體瘤者，大腺瘤者高于微腺瘤者，浸潤型者高于擴張型者，Hardy-Wilson 4～5級者高于2～3級及1級者，侵襲性垂體腺瘤者高于非侵襲性垂體腺瘤者，以上結(jié)果均說明GATA-6、bFGF mRNA表達升高可能與垂體瘤侵襲性生長有關(guān)[19-20]。

本文為了進一步論證GATA-6、bFGF mRNA表達與上述病理特征的關(guān)系，將激素分泌功能、垂體瘤形態(tài)、生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為納入分層回歸模型，結(jié)果顯示，生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為會對GATA6 mRNA產(chǎn)生負向影響關(guān)系；激素分泌功能、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為會對bFGF mRNA產(chǎn)生負向影響關(guān)系。由此可見，生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為是影響GATA-6 mRNA表達的重要因子，而激素分泌功能、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為是bFGF mRNA表達的重要因子。同時，這一結(jié)果也提示，GATA-6、bFGF mRNA參與了垂體瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲性生長，因此認為檢測GATA-6、bFGF mRNA表達有望作為診治垂體瘤的重要指標。

綜上所述，GATA-6、bFGF mRNA在垂體瘤組織中呈異常表達，且其表達水平會受生長類型、Hardy-Wilson分級、生物學(xué)行為、激素分泌功能等臨床病理特征的影響。