LncRNA PVT1 調(diào)控 miR-1207-5p/FMNL2 對(duì) HL-60細(xì)胞凋亡及化療敏感性的影響*

郭毅剛，宋 斌，胡 平，張榮耀，陳 旭，易 瓊，萬楚成

（湖北省十堰市太和醫(yī)院·湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北 十堰 442000）

急性髓性白血病是一種惡性克隆性疾病，占白血病患病人數(shù)的60%［1］。腫瘤發(fā)展過程中，基因改變導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化為癌前細(xì)胞群，最終形成具有侵襲和轉(zhuǎn)移能力的腫瘤［2］。臨床主要采用化學(xué)治療，但耐藥影響療效［3］。有效、靈敏的治療靶點(diǎn)在急性髓性白血病的治療過程中顯得尤為重要［4］。微小RNA（miR）是一種小型非編碼RNA，參與細(xì)胞分化、遷移、凋亡等一系列過程，并可能與腫瘤患者的臨床病理特征或預(yù)后有關(guān)［5-6］。其表達(dá)受多種因素影響，包括長(zhǎng)鏈非編碼RNA（LncRNAs）。LncRNAs 是一類長(zhǎng)度超過200 個(gè)核苷酸的非蛋白質(zhì)編碼轉(zhuǎn)錄物，通過與miRNAs、mRNAs、蛋白質(zhì)的相互作用發(fā)揮病理功能，長(zhǎng)鏈非編碼RNA 漿細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)化遷移基因1（LncRNA PVT1）異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［7］。同源形成素樣蛋白2（FMNL2）與多種癌癥轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可與miRNA或LncRNAs相互作用，參與腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移［8］。目前，關(guān)于LncRNA PVT1對(duì)miR - 1207 - 5p/ FMNL2 的調(diào)控作用尚未見報(bào)道。為此，本研究中探討了LncRNA PVT1和miR-1207-5p對(duì)HL - 60 細(xì)胞增殖、侵襲、遷移及凋亡的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與細(xì)胞

儀器：BSC - 1100ⅡB2 - X 型生物安全柜，BKQ -B75 型高壓蒸汽滅菌鍋，博科300L 型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，均購(gòu)自中國(guó)博科公司；5320R 型4 ℃離心機(jī)（德國(guó)徠卡公司）；伯樂Mini - PRO TEAN 型電泳儀（美國(guó)伯樂公司）；EVOS M7000 型倒置顯微鏡（意大利賽默飛公司）；LAS 4000型成像系統(tǒng)，Bio-Rad 微孔板閱讀器，均購(gòu)自美國(guó)GE Healthcare 公司；BD FACSCanto Ⅱ型流式細(xì)胞儀（美國(guó)賽默飛世爾科技公司）。

試藥：RPMI 1640 培養(yǎng)基（批號(hào)為315484），胎牛血清（FBS，批號(hào)為310549），胰蛋白酶（批號(hào)為315497），柔紅霉素（批號(hào)為948712），均購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司；Amplite 螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（美國(guó)AATBioquest 公司，貨號(hào) AAT - 12519）；Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑盒（南京建成生物有限公司，批號(hào)為915482）；V-熒光素異硫氰酸酯（FITC）凋亡試劑盒（美國(guó)Sun-Shine公司，批號(hào)為396765）；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（CCK - 8，批號(hào)123594），RNA 提取試劑盒（批號(hào)為9451894），RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（批號(hào)3201549），實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT - qPCR）試劑盒（批號(hào)為3021948），購(gòu)自上海優(yōu)寧維生物有限公司；FMNL2 蛋白抗體（批號(hào)為661259），β-actin 蛋白抗體（批號(hào)549258），均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；山羊抗兔二抗（武漢三鷹生物有限公司，批號(hào)為614948）。

細(xì)胞：HL - 60 細(xì)胞株（武漢普諾賽生命科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

于液氮罐中取HL-60細(xì)胞株1支，進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，將復(fù)蘇后的細(xì)胞置RPMI1640 培養(yǎng)基中，采用細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行分裝，于培養(yǎng)箱（5%CO2，37 ℃）中培養(yǎng)24 h 后更換培養(yǎng)基，細(xì)胞覆蓋率達(dá)70%時(shí)在培養(yǎng)皿中加入胰蛋白酶，進(jìn)行細(xì)胞傳代。

1.2.2 細(xì)胞分組、轉(zhuǎn)染及螢光素酶的報(bào)告基因檢測(cè)

將 HL - 60 細(xì)胞分為對(duì)照組、miR - NC 組、PVT1 -siRNA 組、miR - 1207 - 5p inhibitor 組和 miR - 1207 -5p mimic 組。對(duì)照組細(xì)胞不處理；miR - NC 組、PVT1 -siRNA、miR - 1207 - 5p inhibitor 組和 miR - 1207 -5p mimic 組按Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑盒說明書方法分別將miR - NC，PVT1 - siRNA，miR - 1207 -5p inhibitor，miR - 1207 - 5p mimic 轉(zhuǎn)染到 HL - 60 細(xì)胞，48 h 后用雙螢光素酶檢測(cè)試劑分析miR - 1207 -5p和FMNL2野生型/突變型（wt/mut）螢光素酶活性。

1.2.3 CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞存活率

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL - 60 細(xì)胞，在培養(yǎng)皿中加入1 mL 胰蛋白酶輕微吹打2 min，使細(xì)胞完全懸浮。將懸浮的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中離心（轉(zhuǎn)速為2 000 r/min）10 min，棄去上清液，加入1 mL RPMI 1640培養(yǎng)基，輕微吹打，使細(xì)胞充分懸浮，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至96 孔板中，每孔100μL，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，棄去96孔板中的培養(yǎng)基，每孔依次加入新的RPMI 1640 培養(yǎng)基，各組6 個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24 h，棄去培養(yǎng)液，每孔加入100 μL 培養(yǎng)液和10 μL CCK-8 溶液，持續(xù)培養(yǎng)3 h，于450 nm 波長(zhǎng)處使用Bio-Rad 型微孔板閱讀器讀取吸光度，重復(fù)3 次，計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.2.4 改良Matrigel Boyden 室測(cè)定法測(cè)定細(xì)胞侵襲性

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-60細(xì)胞，按5×105個(gè)/mL接種于有基質(zhì)膠的濾膜上，濾膜的下室倉中放入10% FBS，作為趨化劑，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，取出濾膜并染色，使用EVOS M7000 型倒置顯微鏡對(duì)濾膜上的細(xì)胞計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)，每個(gè)濾膜隨機(jī)選擇5 個(gè)視野，重復(fù)6 次，取平均值。

1.2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移力

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-60細(xì)胞按5×105個(gè)/mL接種于6 孔板內(nèi)，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。劃痕實(shí)驗(yàn)時(shí)吸頭垂直孔壁劃痕，并加入無血清培養(yǎng)基，劃痕完成后培養(yǎng)48 h，使用EVOS M7000 型倒置顯微鏡觀察，并分析相對(duì)遷移率。

1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率

使用FITC凋亡試劑盒，將HL-60細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌2次，用1×結(jié)合緩沖液在1×106個(gè)/mL濃度下懸浮于400 μL V - FITC 溶液中，暗室溫孵育15 min，然后加入PI 10 μL，4 ℃避光孵育5 min，立即用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞，重復(fù)6次。

1.2.7 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)柔紅霉素敏感性

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-60細(xì)胞，按5×105個(gè)/mL接種于96 孔板，置培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)24 h。以不同質(zhì)量濃度（0，0.5，1，2，4，8 μg/ mL）的柔紅霉素處理細(xì)胞48 h，每個(gè)劑量設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔，處理結(jié)束后，每孔加質(zhì)量濃度為 5 g/ L 的 MTT 試劑 20 μL，4 h 后加入 150 μL 二甲基亞砜，采用酶標(biāo)儀于490 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量光密度（OD），并計(jì)算細(xì)胞增殖活力。

1.2.8 總RNA 提取及RT-qPCR

取出培養(yǎng)皿放入無菌操作臺(tái)，棄去培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液。根據(jù)RNA提取試劑盒說明書提取細(xì)胞總RNA，并利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到cDNA，- 80 ℃保存?zhèn)溆?。RT -qPCR 體系：SYBR Green qPCR SuperMix 16.25 μL，特異性引物2.0μL，模板cDNA3.25μL，DEPC水補(bǔ)足至30μL。反應(yīng)條件：95 ℃，10 min；95 ℃，10 s；60 ℃，30 s；70 ℃，30 s；共 40 個(gè)循環(huán)。設(shè)置 6 個(gè)復(fù)孔，根據(jù)公式（2-ΔΔCt）計(jì)算、分析Cdc42和PAK1 mRNA表達(dá)，引物序列見表1。

表1 引物序列Tab.1 Sequences of primers

1.2.9 免疫印跡（Western blot）法檢測(cè)細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)

取培養(yǎng)皿，放入無菌操作臺(tái)，棄去培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，加入 1 mL PBS 和 100 μL 蛋白酶 K 溶液，使細(xì)胞懸浮，超聲細(xì)胞破碎儀作用2 min 破碎細(xì)胞，離心（轉(zhuǎn)速3 000 r/min，4 ℃）20 min，取上清液，置新的1.5 mL EP管中。經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）分離、轉(zhuǎn)模和封閉后用特異性抗體FMNL2 和β-actin（稀釋濃度1∶5 000）在4 ℃條件下孵育12 h，孵育后的條帶1%吐溫清洗3次，山羊抗兔二抗（稀釋濃度1∶500）孵育 2 h，LAS 4000 型成像系統(tǒng)成像并觀察結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 LncRNA PVT1 對(duì) miR - 1207 - 5p 和 miR -1207-5p 對(duì) FMNL2 的靶向作用

檢索生物信息學(xué)網(wǎng)站www. Targetscan. org，發(fā)現(xiàn)LncRNA PVT1 與 miR - 1207 - 5p、miR - 1207 - 5p 與FMNL2 均有潛在的結(jié)合位點(diǎn)。螢光素酶分析結(jié)果顯示，LncRNA PVT1 可明顯增加miR - 1207 - 5p 的螢光素酶活性，miR - 1207 - 5p 可明顯增加FMNL2 - wt 的螢光素酶活性，表明LncRNA PVT1 與miR-1207-5p、miR-1207-5p與FMNL2存在靶向調(diào)節(jié)作用。詳見表2和圖1。

圖1 Targetscan預(yù)測(cè)miR-1207-5p與LncRNA PVT1和FMNL mRNA的互補(bǔ)配對(duì)序列Fig.1 Prediction of the complementary pairing sequences of miR -1207 - 5p with LncRNA PVT1 and FMNL mRNA by the Targetscan

表2 螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果（）Tab.2 Results of luciferase reporter gene assay（）

表2 螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果（）Tab.2 Results of luciferase reporter gene assay（）

注：與對(duì)照組比較，aP < 0.05；與 miR - NC 組比較，bP <0.05；與 miR - 1207 - 5p inhibitor 組比較，cP < 0.05。表 3 至表7同。Note：Compared with those in the control group，aP < 0.05；Compared with those in the miR -NC group，bP < 0.05；Compared with those in the miR-1207-5p inhibitor group，cP < 0.05（for Tab.2-7）.

FMNL2-mut 1.00±0.00 1.01±0.05 0.58±0.06ab 1.02±0.08 8.021<0.001組別對(duì)照組miR-NC組miR-1207-5p inhibitor組miR-1207-5p mimic組F值P值LncRNA PVT1-wt 1.00±0.00 1.05±0.02 1.02±0.08 1.49±0.13abc 15.068<0.001 LncRNA PVT1-mut 1.00±0.00 1.04±0.07 0.55±0.06ab 1.03±0.11 9.041<0.001 FMNL2-wt 1.00±0.00 1.02±0.03 1.07±0.05 1.46±0.14abc 16.275<0.001

2.2 LncRNA PVT1 對(duì) miR-1207-5p 表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，轉(zhuǎn)染PVT1 - siRNA 后，LncRNA PVT1 表達(dá)水平顯著降低（P< 0.05），miR - 1207 - 5p表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）。詳見表3。

表3 轉(zhuǎn)染LncRNA PVT1對(duì)miR-1207-5p表達(dá)水平的影響（，n=6）Tab.3 Effects of transfection of LncRNA PVT1 on the expression level of miR-1207-5p（，n=6）

表3 轉(zhuǎn)染LncRNA PVT1對(duì)miR-1207-5p表達(dá)水平的影響（，n=6）Tab.3 Effects of transfection of LncRNA PVT1 on the expression level of miR-1207-5p（，n=6）

miR-1207-5p（2- ΔΔCt）1.00±0.00 1.03±0.04 1.43±0.11ab 17.063<0.001組別對(duì)照組miR-NC組PVT1-siRNA組F值P值LncRNA PVT1（2- ΔΔCt）1.00±0.00 1.05±0.07 0.52±0.05ab 12.053<0.001

2.3 轉(zhuǎn)染miR - 1207 - 5p 對(duì)細(xì)胞存活率、遷移率及侵襲力的影響

與對(duì)照組比較，miR-1207-5p inhibitor 組細(xì)胞存活率、遷移率和侵襲均數(shù)顯著降低（P< 0.05），miR -1207-5p mimic組細(xì)胞存活率、遷移率和侵襲數(shù)均顯著升高（P< 0.05）；對(duì)照組和miR - NC 組無顯著差異（P>0.05）。詳見表4和圖2。

圖2 轉(zhuǎn)染miR-1207-5p對(duì)細(xì)胞的影響（×400）Fig.2 Effects of transfection of miR-1207-5p on the cells（× 400）

表4 轉(zhuǎn)染miR-1207-5p對(duì)細(xì)胞存活率、遷移率和侵襲力的影響（，n=6）Tab.4 Effects of transfection of miR-1207-5p on the survival rate，migration rate and invasiveness of cells（，n=6）

表4 轉(zhuǎn)染miR-1207-5p對(duì)細(xì)胞存活率、遷移率和侵襲力的影響（，n=6）Tab.4 Effects of transfection of miR-1207-5p on the survival rate，migration rate and invasiveness of cells（，n=6）

組別對(duì)照組miR-NC組miR-1207-5p inhibitor組miR-1207-5p mimic組F值P值細(xì)胞存活率（%）100.00±0.00 99.14±8.26 59.83±5.10ab 147.19±10.22abc 32.064<0.001細(xì)胞遷移率（%）100.00±0.00 98.79±6.33 73.86±6.19ab 136.54±10.88abc 26.481<0.001細(xì)胞侵襲數(shù)（個(gè)）151.78±11.27 152.33±10.82 97.92±7.09ab 207.58±12.94abc 38.552<0.001

2.4 轉(zhuǎn)染miR-1207-5 p 對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響

與對(duì)照組比較，miR-1207-5p inhibitor 組細(xì)胞凋亡率顯著升高（P< 0.05），miR - 1207 - 5p mimic 組細(xì)胞凋亡率顯著降低（P<0.05）；對(duì)照組和miR-NC組無顯著差異（P>0.05）。詳見圖3和表5。

表5 轉(zhuǎn)染miR-1207-5p對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響（，n=6）Tab.5 Effects of transfection of miR-1207-5p on the apoptosis rate（，n=6）

表5 轉(zhuǎn)染miR-1207-5p對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響（，n=6）Tab.5 Effects of transfection of miR-1207-5p on the apoptosis rate（，n=6）

組別對(duì)照組miR-NC組miR-1207-5p inhibitor組miR-1207-5p mimic組F值P值細(xì)胞凋亡率（%）11.07±1.12 12.22±1.08 24.13±2.05ab 5.26±0.51abc 43.228<0.001

圖3 轉(zhuǎn)染miR-1207-5 p對(duì)細(xì)胞凋亡的影響Fig.3 Effects of transfection of miR-1207-5p on the apoptosis

2.5 干擾LncRNA PVT1 對(duì)HL - 60 細(xì)胞柔紅霉素敏感性的影響

與對(duì)照組比較，同質(zhì)量濃度柔紅霉素作用下，PVT1-siRNA組HL-60細(xì)胞的活力顯著升高（P<0.05）。詳見表6。

表6 干擾LncRNA PVT1對(duì)HL-60細(xì)胞柔紅霉素敏感性的影響（，n=6）Tab.6 Effects of interfering the expression of LncRNA PVT1 on the sensitivity of HL-60 cells to daunorubicin（，n=6）

表6 干擾LncRNA PVT1對(duì)HL-60細(xì)胞柔紅霉素敏感性的影響（，n=6）Tab.6 Effects of interfering the expression of LncRNA PVT1 on the sensitivity of HL-60 cells to daunorubicin（，n=6）

組別對(duì)照組PVT1-siRNA組t值P值0μg/mL 97.12±4.53 94.59±4.87 0.653 0.582 0.5μg/mL 82.37±3.13 88.29±3.26a 3.208 0.001 1μg/mL 72.78±3.11 81.09±3.35a 3.872<0.001 2μg/mL 61.22±3.08 70.37±3.15a 3.583<0.001 4μg/mL 50.16±3.87 59.23±3.92a 4.031<0.001 8μg/mL 39.29±3.19 50.16±3.88a 5.275<0.001

2.6 FMNL2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平

與對(duì)照組比較，miR - 1207 - 5p inhibitor 組細(xì)胞FMNL2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P<0.05），miR - 1207 - 5p mimic 組細(xì)胞 FMNL2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05）；對(duì)照組和miR-NC組無顯著差異（P>0.05）。詳見表7和圖4。

表7 各組細(xì)胞FMNL2 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較（，n=6）Tab.7 Comparison of FMNL2 mRNA and protein expression levels in each group（，n=6）

表7 各組細(xì)胞FMNL2 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較（，n=6）Tab.7 Comparison of FMNL2 mRNA and protein expression levels in each group（，n=6）

組別對(duì)照組miR-NC組miR-1207-5p inhibitor組miR-1207-5p mimic組F值P值FMNL2 mRNA（2- ΔΔCt）1.00±0.00 0.98±0.07 1.42±0.09ab 0.62±0.05abc 14.273<0.001 FMNL2/β-actin 0.53±0.06 0.56±0.04 0.89±0.07ab 0.27±0.02abc 19.035<0.001

圖4 各組細(xì)胞FMNL2免疫印跡圖Fig.4 Western blot of FMNL2 in each group

3 討論

急性髓性白血病具有無限增殖、分化等特點(diǎn)，因造血干細(xì)胞堆積而抑制造血功能［9］。病程進(jìn)展緩慢，早期無明顯臨床癥狀，易錯(cuò)過最佳治療時(shí)間。當(dāng)細(xì)胞迅速增殖和擴(kuò)散，患者出現(xiàn)系列異常臨床癥狀時(shí)，多已進(jìn)展至晚期［10］。目前，臨床主要通過手術(shù)和化療等進(jìn)行治療，但會(huì)出現(xiàn)耐藥，難以達(dá)到預(yù)期效果［11］。迫切需要尋找有效、新穎的檢測(cè)方法，提高疾病早期的發(fā)現(xiàn)率，幫助預(yù)后的預(yù)測(cè)及個(gè)性化治療。

白血病是涉及多基因、多因素、多途徑的復(fù)雜疾病，分子機(jī)制在很大程度上仍未知［12］。非編碼RNA 參與癌癥的發(fā)展，其中的miR通過調(diào)控靶基因的表達(dá)來發(fā)揮作用［13］。幾乎每種癌癥中都存在異常的miR 譜，miR位于腫瘤基因組和腫瘤相關(guān)基因組的不穩(wěn)定區(qū)域［14］。對(duì)miR在腫瘤發(fā)病機(jī)制、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用認(rèn)識(shí)取得了很大進(jìn)展，但臨床用于疾病診斷和治療的miR 很少。在結(jié)腸癌組織中可發(fā)現(xiàn)miR - 1207 - 5p 的異常表達(dá)，提示 miR - 1207 - 5p 參與了惡性腫瘤的進(jìn)展［15］。通過檢測(cè)白血病患者和健康人群血清中的miR水平，兩者在某些miR的表達(dá)水平上存在顯著差異，提示miR可能作為致/抑癌基因參與了白血病的發(fā)生［16］。多種LncRNAs在白血病細(xì)胞中表達(dá)異常，異常表達(dá)的LncRNAs可引起下游靶分子上調(diào)或下調(diào)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生物學(xué)改變，同時(shí)發(fā)現(xiàn)LncRNAs與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期顯著相關(guān)［17］。本研究中分別采用LncRNA PVT1和miR-1207-5p轉(zhuǎn)染 HL-60 細(xì)胞，探討 LncRNA PVT1 和 miR-1207-5p對(duì)HL-60 細(xì)胞增殖、侵襲、遷移及凋亡的影響。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染PVT1 - siRNA 可升高miR - 1207 - 5p 的表達(dá)水平，螢光素酶報(bào)告提示低表達(dá)PVT1可靶向升高miR-1207-5p的表達(dá)，高表達(dá)miR-1207-5p可升高HL-60細(xì)胞增殖、侵襲及遷移水平，凋亡降低，提示miR-1207-5p可能是一種促白血病基因。MTT 試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，同質(zhì)量濃度柔紅霉素作用下，PVT1-siRNA 組HL-60 細(xì)胞的活力顯著升高，提示LncRNA PVT1的低表達(dá)可引起柔紅霉素敏感性降低，可能會(huì)降低患者的化療效果。

生物信息學(xué)分析和雙螢光素酶報(bào)告基因分析證實(shí)，F(xiàn)MNL2 是 miR-1207-5p 的下游結(jié)合基因，過表達(dá)miR-1207-5p可下調(diào)FMNL2。有研究顯示，F(xiàn)MNL2在多種腫瘤中均為抑癌基因，高表達(dá)FMNL2 可抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展［18］。FMNL2 在大多數(shù)癌癥中的作用和作用機(jī)制仍有待發(fā)現(xiàn)。本研究中，轉(zhuǎn)染miR - 1207 -5p inhibitor 和 miR - 1207 - 5p mimic 后檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)FMNL2轉(zhuǎn)錄及翻譯水平，發(fā)現(xiàn)HL-60細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-1207-5p mimic后可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)FMNL2表達(dá)水平降低，升高細(xì)胞增殖、遷移及侵襲水平，同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡，提示FMNL2在白血病中起疾病抑制作用，miR-1207-5p表達(dá)抑制FMNL2的水平，減弱疾病抑制作用。

綜上所述，HL-60細(xì)胞中低表達(dá)LncRNA PVT1可靶向上調(diào)miR - 1207 - 5p 水平，上調(diào)的miR - 1207 - 5p可通過抑制FMNL2 的表達(dá)以促進(jìn)細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，同時(shí)降低細(xì)胞凋亡水平和對(duì)柔紅霉素的敏感性，不利于疾病的治療。