牛傳染性鼻氣管炎的診斷及防控

袁曉娟，楊勝紅

貴州省黔東南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州凱里 556000

0 引言

牛傳染性鼻氣管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR）是一種由牛傳染性鼻氣管炎病毒（牛皰疹病毒I型）引起的傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將IBR列為必須通報(bào)的動(dòng)物疫病；我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將此病列為二類疫病。IBR病毒（IBRV）可以侵入牛體內(nèi)潛伏，導(dǎo)致病牛長(zhǎng)期帶毒，帶來(lái)危害非常大。IBR的防控需要大量的精力，給當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)部門帶來(lái)很大的挑戰(zhàn)和困難。IBR最初在西方國(guó)家被發(fā)現(xiàn)，我國(guó)是在1980年在進(jìn)口奶牛中首次發(fā)現(xiàn)，其后在我國(guó)的病奶牛、水牛病料中也分離出來(lái)了IBRV。從我國(guó)學(xué)者對(duì)國(guó)內(nèi)11個(gè)省市部分牛場(chǎng)IBRV血清學(xué)調(diào)查結(jié)果看，IBR在我國(guó)牧區(qū)、半牧區(qū)省份的流行已成為十分普遍現(xiàn)象，在貴州9個(gè)市（州）11 縣28個(gè)牛場(chǎng)均有不同程度的IBRV感染[1]，因此對(duì)IBR的相關(guān)研究綜述顯得尤為重要，可以為獸醫(yī)同行快速診斷及防控該病提供參考。

1 病原學(xué)及流行病學(xué)

1.1 病原學(xué)

IBRV屬皰疹病毒科、皰疹病毒亞科甲、水痘病毒屬，是直徑130~180 nm的球形雙股DNA病毒。IBRV在多種牛源細(xì)胞（如腎、胚胎、皮膚等）上做細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)良好，并可產(chǎn)生病變，細(xì)胞聚集后出現(xiàn)巨核細(xì)胞體，染色后發(fā)現(xiàn)有嗜酸性核內(nèi)包涵體[2]。IBRV只有1個(gè)血清型。IBRV的結(jié)構(gòu)蛋白中主要有4 種糖蛋白（gB、gC、gD和gE）負(fù)責(zé)病毒的吸附、滲透和病毒在細(xì)胞之間的擴(kuò)散，同時(shí)也是刺激宿主免疫應(yīng)答的主要抗原蛋白[3]。

1.2 流行病學(xué)

IBRV主要感染牛（如肉用牛、奶牛），各種年齡階段均可感染，也能感染山羊、豬和鹿等。病牛和帶毒牛是主要的傳染源，特別是病牛呼吸道帶毒分泌物可通過(guò)飛沫、交配、接觸、空氣、媒介物等傳播，在一定環(huán)境條件下，IBRV可以經(jīng)空氣傳播3.85 m的距離[4]。IBRV潛伏期一般在3~7 天，最長(zhǎng)可達(dá)3 周。IBR在秋季和冬季較為多發(fā)，特別是在飼養(yǎng)管理較差、牛群飼養(yǎng)密度較大、應(yīng)激因素、其他病原體感染的情況下，都會(huì)加速IBRV的傳播。IBRV的牛群發(fā)病率受環(huán)境等綜合因素影響。由于IBRV傳播性強(qiáng)，截至目前，我國(guó)各地牛群中都檢測(cè)到了IBRV抗體。我國(guó)自首次分離到IBRV后，IBR的流行一直呈上升趨勢(shì)，之后我國(guó)學(xué)者對(duì)國(guó)內(nèi)地區(qū)的調(diào)查結(jié)果進(jìn)一步證明該病在我國(guó)已廣泛存在[5]。目前芬蘭等國(guó)家已徹底清除了IBRV。我國(guó)應(yīng)借鑒國(guó)外控制疫病的方法，結(jié)合本國(guó)的國(guó)情以及地區(qū)的流行特點(diǎn)，消滅該病，以促進(jìn)養(yǎng)牛業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。

2 臨床癥狀

IBRV在臨床上可引起多種病癥，癥狀輕重差別很大，主要以呼吸道感染癥狀為主，表現(xiàn)為呼吸困難，常常張口呼吸，鼻黏膜發(fā)炎腫脹（圖1）；母牛患病表現(xiàn)為膿皰性外陰陰道炎，產(chǎn)奶量下降，引起乳房炎、流產(chǎn)等；公牛患病則表現(xiàn)為發(fā)熱、龜頭炎等。另外，病牛還可表現(xiàn)出眼結(jié)膜炎、腸炎、腦膜炎（常見(jiàn)犢牛）等臨床癥狀。

圖1 病牛張口呼吸，鼻黏膜發(fā)炎腫脹

3 診斷方法

3.1 血清學(xué)診斷

血清學(xué)檢測(cè)包括瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、病毒中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)等。血清學(xué)檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是操作容易、物廉，適合于大面積基礎(chǔ)血清學(xué)調(diào)查。間接免疫熒光抗體試驗(yàn)可用于微量血清樣品的檢測(cè)，與中和試驗(yàn)相比靈敏度更高。ELISA檢測(cè)方法具有多種優(yōu)點(diǎn)，大量學(xué)者對(duì)其均有研究，李偉等[6]用IBRV gB蛋白作為診斷抗原建立的間接ELISA診斷方法，與進(jìn)口診斷試劑盒比較，該診斷方法具有良好的特異性和靈敏性，可用來(lái)區(qū)別疫苗毒株及野毒株誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體。馬輝[7]、董華興等[8]分別建立的雙抗體夾心ELISA、間接ELISA方法來(lái)檢測(cè)IBRV，后者與病毒中和試驗(yàn)、全病毒ELISA方法的檢測(cè)結(jié)果符合率分別為87.5%、92.5%，該方法為基層檢查提供了便利。張帆[9]對(duì)我國(guó)IBR的流行情況做了Meta分析并建立了gE間接ELISA方法，可用于奶牛場(chǎng)中IBRV的流行病學(xué)調(diào)查。

3.2 病原學(xué)診斷

在PCR技術(shù)建立方面，學(xué)者更傾向于研究與IBRV同屬病毒的鑒定，王冰等[10]建立了一種既能檢測(cè)IBRV、又能區(qū)分同屬病毒（牛皰疹病毒5型、偽狂犬病病毒）的PCR技術(shù)；魏宇等[11]建立了一種同時(shí)檢測(cè)牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）和牛冠狀病毒（BCoV）2 種病原的雙重納米R(shí)T-PCR方法，可適用于大批量臨床樣品檢測(cè)，結(jié)果表明，此方法對(duì)IBRV、牛呼吸道合胞體病毒（BRSV）、牛副流感病毒3型（BPIV3）和牛輪狀病毒（BRV）均無(wú)交叉反應(yīng)，特異性良好。此外，敏感性試驗(yàn)結(jié)果為常規(guī)RT-PCR敏感性的10 倍，最低檢出限為1 fg。Marley等[12]建立的復(fù)式熒光定PCR（qPCR），在檢測(cè)IBRV的同時(shí)也能鑒定BVDV-1型和BVDV-2型；孔繁德等[13]為滿足同時(shí)對(duì)IBRV和赤羽病病毒（AKAV）進(jìn)行快速診斷的需要，建立了多重PCR方法，該方法的建立對(duì)于加強(qiáng)進(jìn)出口牛IBRV和AKAV的檢驗(yàn)檢疫有重大意義。此外，范晴等[14]利用特異性LAMP引物標(biāo)記熒光基團(tuán)擴(kuò)增建立了一種用于檢測(cè)牛支原體（Mycoplasma Bovis，MB）和IBRV的二重?zé)晒釲AMP檢測(cè)方法，檢測(cè)敏感度達(dá)100 拷貝/μL，與OIE推薦的熒光定量PCR檢測(cè)方法相比，此二重LAMP方法敏感性為94.4%~96.6%，特異性為100%，能同時(shí)檢測(cè)大量樣本，可用于MB和IBRV的臨床檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查。

4 疫苗研究

接種疫苗是防控該病的重要手段。IBR的疫苗主要包括弱毒疫苗、滅活疫苗、亞單位疫苗。由于常規(guī)疫苗的種種缺點(diǎn)，不少學(xué)者開(kāi)始研究新型疫苗，基因缺失疫苗的優(yōu)點(diǎn)是病毒毒力不易返強(qiáng)，免疫原性好且安全性能高，可用于免疫和野毒感染動(dòng)物的鑒別。為了獲得具有良好抗原性的IBRV重組gE蛋白，楊木嬌等[15]采用PCR方法得到的重組gE蛋白，經(jīng)試驗(yàn)證明具有較強(qiáng)的反應(yīng)原性以及良好免疫原性，為gE基因缺失疫苗免疫牛與自然感染牛的鑒別診斷提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。Zhang等[16]開(kāi)發(fā)了IBR的一種新的疫苗，利用牛皰疹病毒-1（BoHV-1）的突變體，通過(guò)同源重組刪除基因的糖蛋白G（GG）和胸苷激酶（TK）構(gòu)成，所以BoHV-1的gG（-）/TK（-）可能是IBR標(biāo)記疫苗的一個(gè)發(fā)展方向。

郭利等[17]為試驗(yàn)IBR的致弱疫苗（LNM株）的安全性及其免疫效果，結(jié)果顯示，3月齡牛接種該弱毒株后，無(wú)異常。對(duì)免疫牛進(jìn)行的攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示，IBR弱毒疫苗免疫可有效地保護(hù)牛抵抗強(qiáng)毒株的攻毒，免疫保護(hù)期持續(xù)12個(gè)月。冷雪等[18]將毒株滅活與佐劑混合乳化制成IBR滅活疫苗，接種于普通牛和母牛，無(wú)異常表現(xiàn)，疫苗接種牛對(duì)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率達(dá)80%以上，說(shuō)明該疫苗安全性高且免疫保護(hù)效果良好。

5 防控措施

采取綜合措施是預(yù)防IBR的最佳選擇，首先對(duì)出入境牛只進(jìn)行嚴(yán)格檢疫，嚴(yán)禁從疫區(qū)引進(jìn)種牛，種牛引進(jìn)應(yīng)按照相關(guān)政策程序執(zhí)行；其次要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和改善衛(wèi)生條件，注意消毒、養(yǎng)殖密度、通風(fēng)、保溫等措施，定期進(jìn)行檢疫；最后制定合理的免疫程序，一旦發(fā)現(xiàn)可疑病例，立即采取隔離、封鎖和消毒等措施，對(duì)所有牛群進(jìn)行緊急注射疫苗，以提高牛群免疫力。

對(duì)于IBR，目前沒(méi)有特效藥。為防止得病牛只發(fā)生其他繼發(fā)性感染，可采取抗生素藥物對(duì)癥治療，若牛發(fā)熱，在體溫下降不明顯的情況下可以肌內(nèi)注射氨基比林，可結(jié)合中醫(yī)治療方法，采用柴胡、牛蒡子等幫助退熱，同時(shí)服用板藍(lán)根、連翹、升麻、桔梗等提高機(jī)體免疫機(jī)能。繼發(fā)感染時(shí)，用400 萬(wàn)單位青霉素、100 萬(wàn)單位鏈霉素各2 支肌內(nèi)注射，1 天1 次，連用3 天[19]。

6 小結(jié)

隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的日益發(fā)展，IBRV傳播的風(fēng)險(xiǎn)也越來(lái)越大，采用有效可靠的檢測(cè)方法確診陽(yáng)性牛并予以撲殺是目前根除IBR的方法。對(duì)于IBRV的流行應(yīng)提高警惕，開(kāi)展一切防控計(jì)劃和措施，重中之重是研發(fā)出安全有效低廉的疫苗。另外，科學(xué)的飼養(yǎng)管理和嚴(yán)格落實(shí)檢疫制度對(duì)防控該病也很重要。相信隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人們對(duì)該病的不斷研究，人類有望最終可以控制并消滅IBRV。