臭味假柴龍樹小枝化學(xué)成分研究*

胡祖艷，蘇錦華，刀建華，周 林，李 光

(1.西雙版納州藥品監(jiān)督檢驗研究院，云南 景洪 666100；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所 云南分所，云南 景洪 666100；3.云南省南藥資源可持續(xù)利用研究重點實驗室，云南 景洪 666100)

臭味假柴龍樹[1]又名青脆枝[Nothapodytesfoetida(Wight)Sleumer，又名NothapodytesnimmonianaGraham或者MappiafoetidaMeirs]，為茶茱萸科假柴龍樹屬植物，分布于印度、斯里蘭卡、緬甸、泰國、柬埔寨、印度尼西亞(蘇門塔臘)、菲律賓(呂宋)、日本琉球群島至中國臺灣。臭味假柴龍樹全株含喜樹堿，入藥有抗癌、祛風除濕、理氣散寒等作用。

文獻調(diào)研發(fā)現(xiàn)，自20世紀70年代開始，已有多國科研工作者對臭味假柴龍樹進行研究，主要化學(xué)成分為喜樹堿及其衍生物[2-8]，研究植物主要采于印度等地區(qū)。國內(nèi)對臭味假柴龍樹的研究較少，特別是對生長于中國大陸的臭味假柴龍樹的研究。由于地域及生長環(huán)境的不同，植物中所含的化學(xué)成分可能不同。本研究對臭味假柴龍樹的90%甲醇提取物進行分離和鑒定，從中得到6個化合物，鑒定為(Z)-3-己烯基-O-β-D吡喃葡萄糖基-(1″→2′)-β-D吡喃葡萄糖苷(1)，17-羥基-20-O-β-D吡喃葡萄糖苷(2)、9-β-D-葡萄糖氧基喜樹堿(3)、對羥基苯甲酸(4)、對羥基苯甲醛(5)、香草醛(6)。各化合物結(jié)構(gòu)式見圖1，其中化合物1為首次從該屬植物種分離得到。

1 樣品、儀器與試劑

1.1 儀器

Waters AutoSpec Premier P776雙聚焦三扇形磁質(zhì)譜儀(德國Waters公司)；Bruker AV-400型核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)；Bruker DRX-500型核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)；AvanceⅢ-600超導(dǎo)核磁共振儀 (1H：400 MHz，13C：101 MHz；1H：500 MHz，13C：125 MHz；1H-600 MHz，13C：151 MHz；TMS為內(nèi)標)，UV-1型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)；循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪予華儀器廠)。

1.2 樣品

臭味假柴龍樹(N.foetida)于2012年3月采于云南省西雙版納傣族自治州勐臘縣勐伴，并由中國科學(xué)院西雙版納熱帶植物園王洪高級工程師鑒定，標本存放于中國科學(xué)院西雙版納熱帶植物園民族藥研究組實驗室。

1.3 試劑

柱層析硅膠(100～200目，200～300目，青島海洋化工廠)；薄層層析硅膠板(GF254，青島海洋化工廠)；MCI填料(粒徑75～150 μm，日本三菱化學(xué)株式會社)；Sephadex LH -20葡聚糖凝膠(粒徑40～70 μm，美國GE Healthcare公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

干燥的臭味假柴龍樹 62 kg，粉碎后，用90%甲醇熱回流提取3次(4、3、3 h)，合并提取液，減壓濃縮得甲醇浸膏 6.775 kg，然后將浸膏用水攪拌溶解稀釋后依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，得到石油醚萃取物 521 g，氯仿萃取物 335 g，正丁醇萃取物 494 g。

氯仿部分經(jīng)硅膠柱 (200～300目，3.5 kg)分離，以石油醚-丙酮(體積比90∶10，70∶30，60∶40，50∶50，30∶70，0∶100)梯度洗脫，得到B1～B6六個組分。B1經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，MCI和Sephadex LH-20純化，得到化合物4(30 mg)；B2經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，MCI和Sephadex LH-20純化，得到化合物5(26 mg)，6(23 mg)。

將正丁醇部分上大孔樹脂，用梯度甲醇溶液(體積分數(shù)20%、40%、60%、80%、100%)和丙酮梯度洗脫得到6個組分(C1～C6)，C2經(jīng)反復(fù)經(jīng)MCI柱層析和Sephadex LH-20純化，得到化合物1(25 mg)；C3經(jīng)反復(fù)MCI柱層析和Sephadex LH-20純化，得到化合物2(17 mg)，3(20 mg)。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，分子式為C18H32O11，HREI-MS：m/z424.1933[M]+，1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δH：5.53 (1H，dt，J=10.2 ，7.2 Hz，H-3)，5.44 (1H，dt，J=10.2，7.4 Hz，H-4)，5.33 (1H，d，J=7.7 Hz，H-1″)，4.91 (1H，d，J=7.5 Hz，H-1′)，4.53 (1H，dd，J=11.5，5.7 Hz，H-6″)，4.43 (1H，dd，J=11.5 Hz，H-6″)，4.36 (2H，d，J=8.0 Hz，H-6′)，4.34 (1H，d，J=5.7 Hz，H-5″)，4.30 (1H，d，J=9.2 Hz，H-4″)，4.26 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，4.23 (1H，d，J=8.7 Hz，H-4′)，4.18 (1H，dd，J=14.2，7.5 Hz，H-2′)，4.12 (1H，t，J=7.7 Hz，H-2″)，4.05 (1H，dd，J=15.4，7.7 Hz，H-1)，3.94 (1H，brs，H-3″)，3.89 (1H，brs，H-3′)，3.65 (1H，dd，J=7.7 Hz，H-1)，2.53 (2H，m，H-2)，1.96 (2H，m，H-5)，0.83 (3H，m，H-6)。13C-NMR (125 MHz，C5D5N)δC：14.8 (C-6)，21.2 (C-5)，28.7 (C-2)，69.8 (C-1)，125.9 (C-3)，133.8 (C-4)，62.8(C-6′)，71.6(C-4′)，78.3(C-5′)，78.7(C-3′)，84.7(C-2′)，103.4(C-1′)，62.9(C-6″)，71.8(C-4″)，77.3(C-2″)，78.4(C-5″)，79.2(C-3″)，106.9(C-1″)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[9]，因此鑒定化合物1為(Z)-3-己烯基-O-β-D吡喃葡萄糖基-(1″→2′)-β-D吡喃葡萄糖苷[(Z)-3-hexenyl-O-β-D-glucopyranosyl-(1″→2′)-β-D-glucopyranoside]，為首次從臭味假柴龍樹中分離得到。

化合物2：黃色粉末，分子式：C25H28N2O8，EI-MS：m/z484 [M]+，1H-NMR (MeOD，600 MHz)δH：8.51 (1H，s)，8.07 (1H，d，J=8.5 Hz)，7.96 (1H，d，J=8.1 Hz)，7.79 (1H，t，J=7.6 Hz)，7.62 (1H，t，J=7.6 Hz)，7.41 (1H，s)，5.32 (1H，t，J=6.7 Hz)，5.18 (2H，dd，J=3.2 Hz)，4.73 (1H，d，J=10.9 Hz)，4.22 (1H，d，J=10.9 Hz)，3.94 (1H，d，J=11.5 Hz)，2.01 (1H，m)，1.87 (1H，m)，1.03 (3H，t，J=7.4 Hz)；13C-NMR (MeOD，151 MHz)δC：10.7 (C-18)，30.9 (C-19)，51.7 (C-5)，55.9 (C-17)，75.3 (C-20)，100.3 (C-14)，128.5 (C-16)，128.9 (C-10)，129.0 (C-8)，129.7 (C-9)，129.8 (C-12)，130.9 (C-6)，130.9 (C-11)，131.9 (C-7)，144.1 (C-5)，149.2 (C-13)，153.8 (C-15)，154.2 (C-2)，160.8 (C-16a)，62.0 (C-6′)，71.5 (C-4′)，73.2 (C-2′)，77.9 (C-3′)，78.1 (C-5′)，101.7 (C-1′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[10]，因此鑒定化合物2為17-羥基-20-O-β-D吡喃葡萄(17-hydroxy-mappicine- 20-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物3：黃色粉末，分子式：C26H26N2O10，EI-MS：m/z526 [M]+；1H-NMR (DMSO，600 MHz)δH：9.01 (1H，s，H-7)，7.81 (1H，d，J=7.9 Hz，H-12)，7.77 (1H，dd，J=7.9，7.9 Hz，H-11)，7.36 (1H，d，J=7.9 Hz，H-10)，7.34 (1H，s，H-14)，6.53 (1H，s，20-OH)，5.42 (2H，s，H-17)，5.34 (1H，d，J=19.8 Hz，H-5)，5.26 (1H，d，J=19.8 Hz，H-5)，5.11 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，4.62 (1H，dd，J=6.1，5.9 Hz，6′-OH)，3.73 (1H，m，H-6′)，3.44 (1H，m，H-6′)，3.44 (3H，m，H-3′，5′)，3.27 (1H，m，H-2′)，1.86 (2H，m，H-19)and 0.87 (3H，m，H-18)；13C-NMR (DMSO，151 MHz)δC：7.8 (C-18)，30.3 (C-19)，50.5 (C-5)，65.3 (C-17)，72.5 (C-20)，96.9 (C-10)，110.2 (C-14)，119.2 (C-16)，120.5 (C-8)，122.4 (C-12)，126.5 (C-7)，129.3 (C-6)，130.6 (C-11)，145.6 (C-3)，148.7 (C-13)，150.1 (C-15)，152.8 (C-2)，153.0 (C-9)，156.9 (C-16a)，172.6 (C-21)，60.7 (C-6′)，69.8 (C-2′)，73.5 (C-3′)，76.4 (C-4′)，77.3 (C-5′)，101.1 (C-1′).以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[11]，因此確定化合物3為9-β-D-葡萄糖氧基喜樹堿(9-β-D-glucosyloxy camptothecin)。

化合物4：白色片狀結(jié)晶，分子式：C7H6O3，EI-MS：m/z138 [M]+.1H-NMR (MeOH，400 MHz)δH：6.81 (2H，d，J=8.7 Hz，H-3，5)，7.88 (2H，d，J=8.7 Hz，H-2，6)；13C-NMR (MeOD，101 MHz)δC：116.2 (C-3，5)，122.8 (C-4)，133.2 (C-2，6)，163.5 (C-1)，170.2 (C-COOH).以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[12]，因此鑒定化合物4為對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)。

化合物5：白色片狀結(jié)晶，分子式：C7H6O2，EI-MS：m/z122 [M]+.1H-NMR (MeOD，400 MHz)δH：6.71 (2H，d，J=8.7 Hz，H-2，6)，7.81 (2H，d，J=8.7 Hz，H-3，5)，9.86 (1H，s，H-CHO)；13C-NMR (MeOD，101 MHz)δC：116.0 (C-2，6)，130.1 (C-4)，133.2 (C-3，5)，162.0 (C-1)，191.5 (C-CHO)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[13]，因此鑒定化合物5為對羥基苯甲醛(p-hydroxy benzaldehyde)。

化合物6：白色粉末，分子式：C8H8O3，EI-MS：m/z152 [M]+.1H- NMR (MeOD，400 MHz)δH：3.92 (3H，s，OMe)，6.94 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，7.42 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，7.44 (1H，s，H-2)，9.74 (1H，s，H-7)；13C- NMR (MeOD，101 MHz)δC：56.5 (C-OMe)，111.4 (C-2)，116.5 (C-5)，128.7 (C-6)，130.7 (C-1)，149.9 (C-3)，155.1 (C-4)，193.1 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[14]，因此鑒定化合物6為香草醛((5)，vanillin)。

3 討論

本研究從臭味假柴龍樹小枝的 90%甲醇提取物中分離得到6個化合物，其中化合物1為首次在臭味假柴龍樹屬植物中分離得到，豐富了臭味假柴龍樹屬化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)多樣性，為其藥理活性研究奠定了基礎(chǔ)。