XBP1、Twist1、VEGF在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義

周保丹 高飛 王淇民 王明國(guó)

南陽市第二人民醫(yī)院神經(jīng)外科，南陽 473000

腦膠質(zhì)瘤是起源于神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的顱內(nèi)惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率均較高，且治愈率較低。目前其治療方式還是首選手術(shù)切除，來緩解患者的癥狀，但治療效果并不理想［1-3］。該病的發(fā)病機(jī)理還不明確，因此探討其機(jī)制對(duì)于病情的控制和患者生活質(zhì)量的改善意義重大。X 盒結(jié)合蛋白1（XBP1）是一種可以結(jié)合于目的基因構(gòu)建蛋白質(zhì)、脂類和糖類的相關(guān)蛋白質(zhì)［4-5］。Twist 相關(guān)蛋白1（Twist1）是一種結(jié)合在基因上游特異核苷酸序列上的蛋白質(zhì)［6-7］。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）已經(jīng)證實(shí)可以通過誘導(dǎo)神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡抑制和異常分化［8-9］。但在國(guó)內(nèi)關(guān)于XBP1、Twist1、VEGF 與腦膠質(zhì)瘤的相關(guān)性還尚無研究。因此，本研究通過對(duì)腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本和健康腦組織標(biāo)本中XBP1、Twist1、VEGF的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)比較，分析其在該病中的臨床意義，以期能夠?yàn)榕R床治療提供一定的依據(jù)。

資料與方法

1.一般資料

選取2018年9月至2020年6月南陽市第二人民醫(yī)院保存的50 例腦膠質(zhì)瘤組織作為研究對(duì)象，其中男性28 例，女性22 例，年齡（37.66±5.66）歲。根據(jù)預(yù)后不同將其分為生存組（35 例）和死亡組（15 例）。其生存組男性18 例，女性17 例，年齡（37.60±5.47）歲，病程（1.31±0.47）年；死亡組男性10 例，女性5 例，年齡（37.80±5.97）歲，病程（2.00±0.38）年。同時(shí)選取40 例正常腦組織作為對(duì)照組，其中男性24 例，女性16例，年齡（37.75±7.68）歲。

經(jīng)南陽市第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2020192），患者及家屬知情同意。

2.納入標(biāo)準(zhǔn)

⑴經(jīng)病理學(xué)診斷確診為腦膠質(zhì)瘤者［10-11］；⑵均為原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤者；⑶入院前未接受放化療治療；⑷無磁共振檢查禁忌；⑸無腦部手術(shù)史；⑹臨床資料完整者。

3.排除標(biāo)準(zhǔn)

⑴患者非首次入院；⑵合并有其他血液疾病、惡性腫瘤者；⑶合并有內(nèi)分泌疾病者；⑷合并風(fēng)濕免疫及結(jié)締組織病變者；⑸心、肝、腎功能異常者。

4.檢測(cè)方法

將收集的腦組織的石蠟標(biāo)本進(jìn)行切片，脫蠟后滴加一抗，孵育后滴加試劑1，在37 ℃中孵育，然后進(jìn)行免疫組化染色、脫水、樹脂封固，鏡下觀察，拍照，評(píng)定XBP1、Twist1、VEGF表達(dá)，上述操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

5.療效觀察

5.1.判定標(biāo)準(zhǔn) 在染色均勻的區(qū)域，選取5 個(gè)高倍鏡視野，依照陽性細(xì)胞數(shù)量與染色強(qiáng)度進(jìn)行判定：陰性（-）0 分，弱陽性（+）1～2分，中度陽性（++）：3～4分，強(qiáng)陽性（+++）。

5.2.觀察指標(biāo) 觀察比較病例組與對(duì)照組XBP1、Twist1、VEGF 表達(dá)水平；觀察XBP1、Twist1、VEGF 在患者不同臨床病理特征中的表達(dá)水平；分析影響患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素；分析患者XBP1、Twist1、VEGF 表達(dá)對(duì)生存時(shí)間的影響。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)比較；logistic 回歸分析危險(xiǎn)因素；Kaplan-Meier 進(jìn)行生存分析；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

與對(duì)照組相比，生存組和死亡組XBP1、Twist1、VEGF陽性表達(dá)均較高，且死亡組高于生存組，見表1。

表1 病例組腦膠質(zhì)瘤組織與對(duì)照組正常腦組織XBP1、Twist1、VEGF表達(dá)比較[例（%）]

XBP1、Twist1、VEGF 與患者組織分化、臨床分期以及KPS評(píng)分有顯著相關(guān)性見表2。

表2 XBP1、Twist1、VEGF與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

XBP1、Twist1、VEGF 均是影響患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，見表3。

表3 影響50例腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析

隨訪期間死亡15 例，存活35 例，生存時(shí)間為5.00～56.00個(gè)月，平均29.56個(gè)月，與XBP1、Twist1、VEGF陰性表達(dá)相比，陽性表達(dá)時(shí)患者的生存時(shí)間較短，P＜0.05，見圖1。

圖1 XBP1（A）、Twist1（B）、VEGF（C）與50例腦膠質(zhì)瘤患者的Keplan-Meier生存曲線圖

討論

膠質(zhì)瘤是惡性程度極高的顱內(nèi)腫瘤，國(guó)內(nèi)外許多神經(jīng)外科研究人員一直對(duì)該病的治療方法進(jìn)行改進(jìn)，但由于該病具有分化較低、侵襲性較強(qiáng)、增殖迅速的特點(diǎn)，所以無論是手術(shù)切除還是術(shù)后結(jié)合放射與藥物進(jìn)行化療的方法，都無法提高其治愈率［12-14］。現(xiàn)階段，臨床工作者多采用影響學(xué)檢查來評(píng)估患者病情的發(fā)展，但是該檢查方式費(fèi)用較高，檢查時(shí)間較長(zhǎng)，且準(zhǔn)確度較低。因此，開發(fā)腦膠質(zhì)瘤早期診斷標(biāo)志物是目前治療膠質(zhì)瘤的研究方向［15-16］。在本研究發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤患者腦組織中XBP1、Twist1、VEGF陽性表達(dá)率高于正常腦組織；這提示，XBP1、Twist1、VEGF 均與該病有一定的相關(guān)性。因此本文針對(duì)其臨床意義進(jìn)行探討，同時(shí)為臨床診療提供新的理論依據(jù)。

當(dāng)XBP1 的表達(dá)受到抑制時(shí)，腫瘤細(xì)胞活力會(huì)降低［17-18］。于佳龍等［19］和Liu 等［20］指出，VEGF 與膠質(zhì)瘤的新伸出的螺旋狀毛細(xì)血管密切相關(guān)，主要通過神經(jīng)遞質(zhì)分泌的形式來促進(jìn)下游的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)。本研究將腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本按照預(yù)后情況分為生存組和死亡組，檢測(cè)組織XBP1、Twist1、VEGF 表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，死亡組腦組織中XBP1、Twist1、VEGF 表達(dá)高于生存組。本研究猜測(cè)，Twist1 與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有一定關(guān)系，但并未得到證實(shí)。因此，本研究檢測(cè)了XBP1、Twist1、VEGF在患者不同臨床病理特征中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，XBP1、Twist1、VEGF與患者組織分化、臨床分期以及KPS評(píng)分有顯著相關(guān)性，這說明，其與患者的臨床病理特征有密切的聯(lián)系；這提示，當(dāng)以上3 個(gè)指標(biāo)在機(jī)體中的表達(dá)升高時(shí)，預(yù)后就越差［21-23］。除此之外，本研究還對(duì)患者發(fā)生腦膠質(zhì)瘤的危險(xiǎn)因素進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，XBP1、Twist1、VEGF 均為患者發(fā)生腦膠質(zhì)瘤的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，進(jìn)一步提示在臨床治療中加強(qiáng)對(duì)以上指標(biāo)的干預(yù)，可對(duì)改善患者病情及預(yù)后有一定的作用。有研究表明，XBP1可能是通過PI3K∕Akt信號(hào)通路對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性產(chǎn)生了一定影響，可能是通過下調(diào)凋亡蛋白對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行阻滯和抑制細(xì)胞增殖［24-26］。也有學(xué)者指出，Twist1 可能是通過抑制P53 介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡功能來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，主要是通過抑制其街道的基因轉(zhuǎn)錄過程來實(shí)現(xiàn)的［27-28］。VEGF 是目前已知效用十分明顯的調(diào)節(jié)微生物正常生長(zhǎng)代謝所必需的因子，對(duì)醫(yī)療研究作用巨大，其可以促進(jìn)扁平上皮細(xì)胞的增殖，促進(jìn)大小分子的通過度，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤螺旋狀毛細(xì)血管的伸出［29-30］。這都表明其在腦膠質(zhì)瘤病情監(jiān)測(cè)方面起到了較高的臨床作用。但是，關(guān)于XBP1、Twist1、VEGF對(duì)該病的作用機(jī)制還是不夠明確。

本研究還對(duì)患者進(jìn)行了隨訪，分析XBP1、Twist1、VEGF與生存時(shí)間的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與XBP1、Twist1、VEGF 陰性表達(dá)相比，XBP1、Twist1、VEGF陽性表達(dá)的患者生存時(shí)間較低；這說明，XBP1、Twist1、VEGF可作為判斷膠質(zhì)瘤侵襲、轉(zhuǎn)移預(yù)計(jì)預(yù)后的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

綜上所述，XBP1、Twist1、VEGF 在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)較高，與臨床病理特征有一定的相關(guān)性，并與患者預(yù)后生存關(guān)系密切，可參與腦膠質(zhì)瘤臨床生物學(xué)進(jìn)展，這為臨床監(jiān)測(cè)、治療以及預(yù)后提供了一個(gè)理想分子靶點(diǎn)。但本研究只是進(jìn)行了初步探討，且樣本量較小，對(duì)于其作用機(jī)制并不明確，還需進(jìn)一步分析。