HIF-1α、pVHL在卵巢透明細(xì)胞癌的表達(dá)及意義*

房惠瓊 張?jiān)氯A 張淦梅 肖 妮 張良運(yùn)

廣東省佛山市第一人民醫(yī)院病理科 528000

卵巢透明細(xì)胞癌(OCCC)是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,發(fā)病率僅次于高級(jí)別漿液性癌。卵巢透明細(xì)胞癌因其鏡下形態(tài)的多樣性和復(fù)雜性導(dǎo)致常出現(xiàn)誤診和漏診,是婦科病理學(xué)中的診斷難點(diǎn)之一。本文通過對(duì)30例卵巢透明細(xì)胞癌及40例其他類型卵巢癌(高級(jí)別漿液性癌、子宮內(nèi)膜樣癌、黏液性癌)進(jìn)行HIF-1α、pVHL免疫組化標(biāo)記,觀察不同類型卵巢癌之間的表達(dá)差異,探討HIF-1α、pVHL在卵巢透明細(xì)胞癌診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2015—2019年收治的卵巢透明細(xì)胞癌30例作為實(shí)驗(yàn)組,并隨機(jī)抽取同期收治的高級(jí)別漿液性癌20例、子宮內(nèi)膜樣癌10例、黏液性癌10例作為對(duì)照組。所有病例病理診斷明確,經(jīng)3名高年資病理醫(yī)生閱片并做出一致性診斷,診斷標(biāo)準(zhǔn)參照WHO腫瘤分類。排除疑似病例、無免疫組化資料等難以明確診斷的病例。實(shí)驗(yàn)組30例,年齡23～55歲,平均年齡38歲;對(duì)照組40例,年齡31～68歲,平均年齡48歲。

1.2 方法 所有標(biāo)本經(jīng)常規(guī)脫水、石蠟包埋、3μm切片、脫蠟后,采用免疫組化方法進(jìn)行HIF-1α、pVHL檢測(cè)。

免疫組化采用二步法,組織切片常規(guī)脫蠟至水,檸檬酸高溫修復(fù);滴加一抗37℃1h;滴加二抗,室溫孵育10min; DAB顯色,蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片。主要反應(yīng)步驟在Dako Omnis全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)進(jìn)行,用PBS溶液代替一抗作陰性對(duì)照,用已知陽性表達(dá)的腫瘤組織作陽性對(duì)照。一抗兔抗人低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)單克隆抗體(克隆號(hào)EP118,批號(hào)21824552)、二步法通用檢測(cè)試劑盒(鼠兔通用型二抗)購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司,一抗兔抗人VHL多克隆抗體(pVHL,克隆號(hào)CC66171,批號(hào)XS20201211016)購自Bioworld生物技術(shù)有限公司。

1.3 結(jié)果觀察和判定 免疫組化采用DAB顯色,HIF-1α以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性,pVHL以細(xì)胞漿或細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。

免疫組化結(jié)果采用半定量分析法,對(duì)細(xì)胞陽性百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野,觀察50個(gè)目標(biāo)細(xì)胞,以5個(gè)視野陽性細(xì)胞平均百分?jǐn)?shù)作為該切片的陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行計(jì)分：0%～5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分以陽性細(xì)胞著色強(qiáng)弱進(jìn)行計(jì)分,細(xì)胞未著色(陰性)為0分,染色呈淡黃色(弱)為1分,染色呈棕黃色(中)為2分,染色呈棕褐色(強(qiáng))為3分。以兩項(xiàng)評(píng)分的總分進(jìn)行結(jié)果判定,0～1分為陰性(-),2～3分為弱陽性(+),4～5分為中等陽性(++),6～7分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理,進(jìn)行χ2檢驗(yàn),選取檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

30例卵巢透明細(xì)胞癌中,HIF-1α的陽性率為83.3%(25/30),中等陽性為主,其他類型卵巢癌分別為高級(jí)別漿液性癌10%(2/20)、子宮內(nèi)膜樣癌10%(1/10)、黏液性癌0%(0/10),弱陽性為主。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn),HIF-1α在透明細(xì)胞癌中陽性率高于其他類型卵巢癌,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而pVHL在4種卵巢癌的表達(dá)分別為透明細(xì)胞癌73.3%(22/30)、高級(jí)別漿液性癌75.0%(15/20)、子宮內(nèi)膜樣癌60.0%(6/10)、黏液性癌60.0%(6/10),且均為局灶弱陽性,差異不明顯,不做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

3 討論

3.1 OCCC的臨床特征與病理診斷 OCCC的發(fā)病率占所有卵巢惡性腫瘤的5%～25%,僅次于高級(jí)別漿液性癌(70%)[1],早期(FIGO I期)的患者預(yù)后較好,但晚期(FIGO Ⅱ期及Ⅱ期以上)患者較其他類型的卵巢癌預(yù)后更差,復(fù)發(fā)率高,多伴有盆腔的廣泛轉(zhuǎn)移;對(duì)傳統(tǒng)鉑類化療藥物高度耐受,化療不敏感。

OCCC鏡下形態(tài)多樣,包括組織結(jié)構(gòu)的多樣性,如腺管樣、乳頭樣、實(shí)性片狀等,和細(xì)胞形態(tài)的多樣性,如胞質(zhì)透亮富含糖原的多邊形透明細(xì)胞、細(xì)顆粒狀胞質(zhì)的嗜酸性細(xì)胞、特征性的核大深染凸出于腔緣的鞋釘樣細(xì)胞和囊性擴(kuò)張腺腔襯附的扁平細(xì)胞。目前臨床常用于診斷OCCC的免疫組化抗體是HNF-1β和NapsinA,HNF-1β在OCCC的陽性率可達(dá)85%～100%[2],但在子宮內(nèi)膜樣癌、黏液性癌中的陽性率也分別達(dá)到25%～60%、50%～60%;NapsinA在OCCC的陽性率60%～100%[3-6],也可表達(dá)于一些子宮內(nèi)膜樣癌。還有一些新的抗體,如AMACR/P504S、glypican-3、HIF-1α均有報(bào)道在OCCC的陽性率高于其他類型卵巢癌[6-9]。

3.2 HIF1-α與OCCC 缺氧誘導(dǎo)因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)是細(xì)胞處于低氧及模擬低氧環(huán)境條件下產(chǎn)生的一種蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子, HIF-1α是 HIF-1特有的一種活性亞基結(jié)構(gòu),參與低氧狀態(tài)下血管生成的全過程,一方面促進(jìn)血管形成以及新陳代謝,另一方面促進(jìn)腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移。因此,阻斷HIF-1α能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)。

已有研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α與許多上皮性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān),如腎癌、胃癌、膽管癌、食管鱗癌、膀胱尿路上皮癌[10-11]等。Lee S等[7]研究發(fā)現(xiàn),HIF-1α在OCCC的表達(dá)顯著高于其他類型卵巢癌(P=0.001)。Miyazama M等[8]的研究發(fā)現(xiàn),HIF-1、HIF-1α在OCCC 的表達(dá)高于其他類型卵巢癌,對(duì)36例卵巢上皮性腫瘤(包括漿液性腺癌、透明細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜樣腺癌、黏液性腺癌、交界性和良性黏液性腫瘤)的胞核HIF-1、胞漿HIF-1α表達(dá)水平進(jìn)行定量分析,發(fā)現(xiàn)OCCC患者兩指標(biāo)的表達(dá)均最高。本研究也證實(shí)了HIF-1α在OCCC的表達(dá)明顯高于其他類型卵巢癌。因此,HIF-1α既可以是OCCC的輔助診斷性抗體,也可以成為OCCC靶向治療的新靶點(diǎn)。

3.3 pVHL與OCCC pVHL是VHL基因的產(chǎn)物,是一個(gè)多功能的腫瘤抑制因子,與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)。Lin F等[12]報(bào)道在19例卵巢和子宮透明細(xì)胞癌中,17例pVHL陽性,陽性率約90%。彭燕等[13]研究發(fā)現(xiàn),OCCC的pVHL陽性率(18/20,90%)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于高級(jí)別漿液性腺癌(3/20,15%)和子宮內(nèi)膜樣腺癌(2/14,14.3%),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。本次研究pVHL在4種卵巢癌中的表達(dá)并無明顯差異,多呈局灶弱陽性,結(jié)果并不理想,可能是與選用抗體的克隆號(hào)在人體石蠟組織中敏感度較低有關(guān)。

3.4 pVHL、HIF-1α與OCCC 關(guān)于pVHL、HIF-1α在OCCC的表達(dá)相關(guān)性也有少量報(bào)道,結(jié)論并不一致。Lee S等[7]的研究認(rèn)為,HIF-1α和VHL在漿液性腺癌和子宮內(nèi)膜樣腺癌的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)性,但在OCCC中不存在相關(guān)性。而Osada R等[9]的報(bào)道認(rèn)為pVHL的表達(dá)與HIF-1α細(xì)胞核的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)。國內(nèi)尚未檢索到兩指標(biāo)在OCCC的相關(guān)性研究,有待更進(jìn)一步的研究探索。

OCCC是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,發(fā)病率僅次于高級(jí)別漿液性癌,診斷上除了常用免疫組化抗體HNF-1β和NapsinA,也可以采用抗體HIF-1α輔助診斷。HIF-1α在OCCC的高表達(dá),也為靶向治療提供了新靶點(diǎn)。