魚用鎮(zhèn)靜劑的種類及檢測(cè)方法

陳博豪，王立坤，張威，郭平，匡佩琳*

1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)（南昌 330045）；2.江西省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證總院食品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院（南昌 330046）

隨著時(shí)代和社會(huì)的不斷發(fā)展，廣大消費(fèi)者對(duì)于魚類等水產(chǎn)品的需求日益增多，而新鮮與否成了決定其品質(zhì)和價(jià)格的一個(gè)重要影響因素。由于我國地域遼闊，全國各地出產(chǎn)的水產(chǎn)品種類五花八門，為了滿足不同地區(qū)、不同年齡層人群的口味需求，鮮活魚在全國各地的流通運(yùn)輸也成為常態(tài)，這也使得運(yùn)輸過程中活魚聚集的數(shù)量更加密集。在運(yùn)輸途中，工作人員搬運(yùn)時(shí)的磕碰或車輛的劇烈振動(dòng)可能會(huì)導(dǎo)致魚類受到驚嚇，產(chǎn)生活動(dòng)加強(qiáng)、運(yùn)動(dòng)增加、躁動(dòng)不安、翻滾彈跳等應(yīng)激反應(yīng)，經(jīng)過一定時(shí)間后，魚類出現(xiàn)進(jìn)食量減少或不進(jìn)食等癥狀，從而致使魚體受損甚至死亡，影響銷售。為解決這一問題，大量商販會(huì)通過在這些水產(chǎn)品飼養(yǎng)、捕撈和運(yùn)輸過程中加入鎮(zhèn)靜劑類藥物，降低其生理代謝活動(dòng)，提高成活率。

鎮(zhèn)靜劑是一類可以減弱某些器官或組織的活性，其作用機(jī)理主要通過抑制生物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)來起到麻醉或者鎮(zhèn)靜作用的藥物。它具有抗驚厥、抗焦躁、鎮(zhèn)靜催眠等作用。此類藥物的代謝周期普遍較長，給動(dòng)物服用后容易積留在體內(nèi)，人在大量食用這種服用過鎮(zhèn)靜劑的動(dòng)物后可能會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成不良影響。

在水產(chǎn)領(lǐng)域常用的鎮(zhèn)靜劑包括丁香酚、異丁香酚、苯佐卡因和間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（Tricaine methanesulfonate，MS-222）。近年來，一些具有成癮性的鎮(zhèn)靜劑類藥物被不法商販濫用，而鎮(zhèn)靜劑的殘留和檢測(cè)問題也成為社會(huì)廣泛關(guān)注的話題之一。本文對(duì)市場(chǎng)上常見的魚用鎮(zhèn)靜劑以及各類檢測(cè)方法進(jìn)行了概述，以期為我國魚用鎮(zhèn)靜劑的規(guī)范使用和有關(guān)部門的監(jiān)管執(zhí)法等提供借鑒。

1 魚用鎮(zhèn)靜劑的種類

1.1 MS-222

MS-222，化學(xué)名稱為間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽，分子式C10H15NO5S。從外觀上來看，MS-222為白色的結(jié)晶或粉末狀，熔點(diǎn)149.5 ℃，易溶于淡水或海水中，其水溶液呈無色透明狀。作為經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)的能夠在魚類運(yùn)輸途中合理使用的鎮(zhèn)靜劑，MS-222的優(yōu)點(diǎn)就是麻醉的速度快，在魚體內(nèi)的藥物代謝快，并且殘留的藥物含量極少。

經(jīng)過長期的試驗(yàn)和觀察發(fā)現(xiàn)，MS-222的藥物殘留主要蓄積在魚的脾脹和肝臟中，在肌肉中的含量甚微。MS-222在水溶液中溶解后主要是通過魚體的皮膚和腮等部位傳導(dǎo)至其位于腦部的感受中樞，從而達(dá)到抑制魚體的反射及活動(dòng)能力的效果，使魚體的動(dòng)作遲緩、呼吸速率減慢、代謝速度降低、耗氧量減少，從而進(jìn)入一種類似休眠的狀態(tài)。只要根據(jù)魚的種類、大小，以及季節(jié)和水溫等條件控制好MS-222的用量，無論是對(duì)魚和人來說都是較為安全的，因而可被用于大多數(shù)魚類的運(yùn)輸中。

1.2 丁香酚

丁香酚，化學(xué)名稱為4-烯丙基-2-甲氧基苯酚，分子式為C10H12O2，是一種極為特殊的、具有天然丁香花氣味的無色或淡黃色液體，與水不互溶。最早在1972年，丁香酚這種物質(zhì)在日本的遠(yuǎn)藤地區(qū)被發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過長時(shí)間的研究證明其對(duì)魚類具有一定的麻醉作用后，丁香酚開始被廣泛地應(yīng)用于魚類的麻醉中[1]。

其主要的作用機(jī)制是丁香酚最開始會(huì)抑制魚類的腦皮質(zhì)，隨著時(shí)間的推移慢慢作用于魚類的基底核及小腦，最后作用于脊髓以達(dá)到麻醉魚類的效果[2]。除了用于魚類的麻醉以外，丁香酚由于其天然的丁香花味道，成為了許多淡香水和護(hù)膚品中不可或缺的香料成分，同時(shí)也可作為滅蟲劑、添加劑以及食品香料來使用，因?yàn)榫哂幸志鷼⒍咀饔茫∠惴釉卺t(yī)學(xué)上也有較為廣泛的應(yīng)用。

1.3 苯佐卡因

苯佐卡因，化學(xué)名稱為對(duì)氨基苯甲酸乙酯，分子式是C9H11NO2。苯佐卡因是一種有機(jī)化合物，它的外觀為無色斜方形結(jié)晶，難溶于水。在臨床上，苯佐卡因常被用于各種皮膚病的止癢以及傷口和潰瘍的止疼。當(dāng)苯佐卡因被用于魚類的麻醉時(shí)，需要在乙醇的幫助下溶解使用[3]。其作用機(jī)制是與黏膜或皮膚的脂層相互結(jié)合，進(jìn)而與皮膚黏膜的神經(jīng)組織發(fā)生反應(yīng)，阻斷神經(jīng)沖動(dòng)的傳導(dǎo)，這也會(huì)導(dǎo)致魚體各部位的感覺暫時(shí)喪失，感覺神經(jīng)末梢被麻醉，魚體的機(jī)能變得遲緩，從而達(dá)到使魚類麻醉的作用。

1.4 苯巴比妥

苯巴比妥的化學(xué)名稱為5-乙基-5-苯基-2,4,6-（1H,3H,5H）-嘧啶三酮，分子式是C12H12N2O3。從外觀上看，苯巴比妥是一種白色有光澤的結(jié)晶性粉末狀物質(zhì)，其與水不互溶，溶于乙醇、氯仿以及乙醚。苯巴比妥屬于巴比妥類安眠鎮(zhèn)靜藥物，在魚類的飼養(yǎng)階段向水中添加一定濃度的苯巴比妥或者直接對(duì)魚體進(jìn)行肌肉注射，在控制好用量的前提下，能夠達(dá)到麻醉魚體并且不導(dǎo)致其死亡的效果。在進(jìn)行魚體的運(yùn)輸過程中加入這類藥物可以降低魚體的死亡率，有效地提高經(jīng)濟(jì)效益[4]。

1.5 2-苯氧乙醇

2-苯氧乙醇（2-phenoxyethanol）又稱乙二醇苯醚，可由乙二醇和苯酚醚化合成，分子式為C8H10O2。2-苯氧乙醇是一種無色并且?guī)в行┰S黏性的液體，具有獨(dú)特芳香氣味，微溶于水，易溶于乙醇及氫氧化鈉。由于價(jià)格低廉、使用方便、反應(yīng)迅速及具有殺菌消毒等功能，2-苯氧乙醇被廣泛應(yīng)用于魚體的麻醉中[5-6]。但經(jīng)過研究證明，2-苯氧乙醇的藥效持續(xù)時(shí)間長，魚在復(fù)蘇后3 d體內(nèi)仍殘存著一些藥物，如此若反復(fù)使用2-苯氧乙醇進(jìn)行麻醉，魚體必然會(huì)產(chǎn)生耐藥性。此外，2-苯氧乙醇會(huì)產(chǎn)生一定的不良反應(yīng)，它會(huì)刺激魚的細(xì)胞膜，降低其血液的pH，增加血液中的葡萄糖水平[7]。國際上尚未規(guī)定2-苯氧乙醇的最高殘留限量（MRL），歐盟不允許其用于魚類的麻醉[8]。

1.6 乙醚

乙醚的分子式為C2H5OC2H5，其外觀為無色透明狀的液體，聞起來有特殊的刺激性氣味且本身極容易揮發(fā)。乙醚作為一種吸入性的全身麻醉劑，它的麻醉機(jī)理相較于市面上較為常見的一些鎮(zhèn)靜劑來說比較特殊，主要是通過使神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞膜上的脂質(zhì)分子排列異常，從而導(dǎo)致膜蛋白失去正常功能進(jìn)而產(chǎn)生麻醉效果。乙醚很早以前就被應(yīng)用于魚類的麻醉中，張恒等[9]使用乙醚作為麻醉劑來麻醉活魚，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)的驗(yàn)證，乙醚對(duì)活魚的麻醉效果較為明顯，能夠提高活魚在運(yùn)輸過程中的存活率。

2 魚用鎮(zhèn)靜劑的檢測(cè)方法

水產(chǎn)品中鎮(zhèn)靜類藥物的常用檢測(cè)方法有高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）[10-11]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（gas chromatography-tandem mass spectrometry，GC-MS/MS）[12]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）[13-14]和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）。

2.1 高效液相色譜法

氣相色譜法的使用范圍很廣泛，但并不適用于揮發(fā)性較差及熱不穩(wěn)定的化學(xué)物質(zhì)的分離，而液相色譜正是用于這類化合物的有效手段。在傳統(tǒng)的液相色譜中，流動(dòng)相是靠著溶劑自身的重力作用完成對(duì)樣品的分離過程，這也是液相色譜的缺點(diǎn)所在：分析速度慢，不能立即完成檢測(cè)。為了解決這一問題，20世紀(jì)60年代市面上開始出現(xiàn)利用高壓泵來輸送流動(dòng)相，同時(shí)采用新型的柱填料和高靈敏度的檢測(cè)器的液相色譜儀，逐漸發(fā)展為現(xiàn)如今的高效液相色譜法[15]。

高效液相色譜法具有操作簡(jiǎn)便、迅速、分離效能高、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)色譜分離過程的自動(dòng)化與高效化。王彩霞等[16]使用乙腈超聲提取，通過高效液相色譜法來測(cè)定鮰魚體內(nèi)丁香酚的殘留量。檢出限為0.045 mg/kg，在添加濃度0.40～3.20 mg/kg的情況下，加標(biāo)回收率達(dá)到78.67%～90.54%。黃武等[17]選用乙腈作為提取溶劑，經(jīng)過超聲提取以及用正己烷除油脫脂重復(fù)凈化2次后，通過高效液相色譜法檢測(cè)羅非魚中丁香酚的殘留情況。檢出限為0.03 mg/kg，定量限為0.10 mg/kg，加標(biāo)回收率達(dá)到80.5%～101.2%。焦亞琴等[18]采取甲醇和乙腈進(jìn)行提取和過濾樣品，通過高效液相色譜法測(cè)定鯉魚血漿中的丁香酚含量。檢出限為0.828 ng/mL，定量限為1.656 ng/mL，加標(biāo)回收率達(dá)到86.74%。

2.2 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法發(fā)展較早，技術(shù)也發(fā)展得較為成熟，是分析殘留物質(zhì)的較為理想的檢測(cè)手段之一。自20世紀(jì)50年代開始發(fā)展，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法是迄今為止發(fā)展最完善并且也是應(yīng)用最為廣泛的技術(shù)，非常適用于高靈敏度、廣適用范圍、復(fù)雜基質(zhì)的多殘留物質(zhì)的測(cè)定。但氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法一個(gè)很大的限制就是其要求被檢測(cè)的樣品需要具有一定的蒸氣壓，而在常見的檢測(cè)樣品中只有20%左右的樣品可以不提前經(jīng)過相應(yīng)的處理而直接進(jìn)行檢測(cè)，在大多數(shù)情況下被檢測(cè)的樣品都需要經(jīng)過一定的人工處理，使之具有一定的蒸汽壓后才能進(jìn)行分析。

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法兼具氣相色譜優(yōu)良的分離性和質(zhì)譜鑒定的高選擇性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。田麗等[19]采用正己烷-二氯甲烷的混合溶液作為提取液，通過基于三重四極桿的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定了金槍魚中的多氯聯(lián)苯，檢出限為0.02～0.10 μg/kg，平均回收率達(dá)到80.0%～114.0%。王正全等[20]用二氯甲烷和正己烷進(jìn)行萃取，通過氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品運(yùn)輸水和暫養(yǎng)水中的丁香酚殘留，方法的檢出限為0.5 μg/L，定量限為1.5 μg/L，加標(biāo)回收率達(dá)到82.3%～109.9%。陸添文等[21]采用正己烷提取，苯基固相萃取柱凈化，通過基于三重四極桿的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定池塘養(yǎng)殖水中3種丁香酚類的麻醉劑，丁香酚、異丁香酚及甲基丁香酚的檢出限分別為0.05，0.13和0.03 μg/L，定量限分別為0.17，0.43和0.10 μg/L，回收率分別達(dá)到98.5%～101.6%，98.4%～101.3%和98.5%～104.6%。

2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法雖然起步較晚，在20世紀(jì)70年代才開始研究，但經(jīng)過比氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法更長時(shí)間的實(shí)踐后，其成為具有更廣闊應(yīng)用前景的技術(shù)。它結(jié)合液相色譜儀的強(qiáng)大分離效能及質(zhì)譜儀優(yōu)秀的組分鑒定能力，可將混合物先分離成單一組分，再進(jìn)行解析檢測(cè)。對(duì)極性或熱不穩(wěn)定性太強(qiáng)的農(nóng)藥來說，選用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的優(yōu)點(diǎn)就是其儀器的檢測(cè)靈敏度遠(yuǎn)超其他分析方法。正因?yàn)橐合嗌V-質(zhì)譜聯(lián)用儀具有靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，目前市面上常見的鎮(zhèn)靜劑的檢測(cè)主要就是通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行的。

胡海山等[22]使用乙腈提取樣品，經(jīng)過Oasis HLB固相萃取柱凈化后收集，通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中5種鎮(zhèn)靜劑藥物殘留量，檢出限為0.07～0.11 μg/kg，經(jīng)檢測(cè)，樣品的加標(biāo)回收率能夠達(dá)到94.5%～110.4%。何曉明等[23]通過選用經(jīng)過氨化的乙腈作為提取劑提取樣品，選用增強(qiáng)型已去除脂類基質(zhì)的吸附劑進(jìn)行凈化，通過高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定草魚、梭子蟹等水產(chǎn)品中的13種鎮(zhèn)靜劑，方法的檢出限為0.010 3～0.147 0 μg/kg，定量限為0.034 0～0.485 0 μg/kg，平均加標(biāo)回收率達(dá)到70.7%～108.0%。

3 結(jié)語

我國地大物博，魚類物種資源豐富，隨著市場(chǎng)消費(fèi)水平的不斷提高，許多問題也隨之而來。無論是在養(yǎng)殖過程或是運(yùn)輸途中鎮(zhèn)靜劑類藥物的濫用問題一直都是一個(gè)不可避免的話題。盲目、不合理地使用鎮(zhèn)靜劑，不僅會(huì)導(dǎo)致魚體的個(gè)體狀況惡化，嚴(yán)重的甚至還會(huì)影響到消費(fèi)者的身體健康。我國對(duì)于魚用鎮(zhèn)靜劑的監(jiān)管及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、法律法規(guī)等尚不完善，這也給一些投機(jī)取巧、心懷僥幸心理的商販可乘之機(jī)?，F(xiàn)有的魚用鎮(zhèn)靜劑檢測(cè)方法主要以各種儀器分析為主，受人員、設(shè)備、前處理方法等多方面掣肘，很可能達(dá)不到執(zhí)法人員現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)管及推廣普及的效果。正是因?yàn)榇嬖谌绱硕嗟睦щy，開發(fā)適用于多類魚用鎮(zhèn)靜劑的快速檢測(cè)技術(shù)方法有著廣闊的前景和市場(chǎng)潛力。除此之外，如何研發(fā)出一種對(duì)人體無毒無害的魚用鎮(zhèn)靜劑也是一個(gè)值得思考的方向。