牛磺酸滴眼液聯(lián)合玻璃酸鈉滴眼液對苯扎氯銨誘導(dǎo)兔干眼的療效觀察

陳新華，楊笑天，陳博倫，王悅

（1.佳木斯大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154000；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 眼科，黑龍江 佳木斯 154000；3.佳木斯大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154000）

干眼癥是眼科臨床最常見的眼科疾病之一。新的國際眼科共識將其定義為一種以淚膜失衡為特征的多因素疾病，其中感覺神經(jīng)異常具有重要的影響。近幾十年來，干眼癥患者數(shù)量急劇增加。亞洲的干眼癥發(fā)病率高于歐洲和北美，表明文化或種族因素參與了干眼癥的病因?qū)W。我國臺灣地區(qū)，2 045 名65 歲及以上的病例中有33.7%被發(fā)現(xiàn)有干眼癥狀［1］。目前干眼癥患病率也在逐步增加，嚴(yán)重程度可導(dǎo)致視力功能明顯減退而嚴(yán)重影響其正常生活。最常見的癥狀有干澀感、異物感、燒灼感、畏光和視力下降［2］。干眼癥治療的原則是根據(jù)干眼癥的類型和嚴(yán)重程度進(jìn)行長期的、個性化的治療，適應(yīng)于慢性病管理系統(tǒng)。治療方案選擇的基本原則是從簡單到復(fù)雜，從無創(chuàng)到有創(chuàng)［3］。基于以上本研究將利用?；撬岬窝垡郝?lián)合玻璃酸鈉滴眼液對苯扎氯銨誘導(dǎo)兔干眼的治療變化與預(yù)后的相關(guān)性，并探討是否具有重要意義，為臨床應(yīng)用提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選取新西蘭兔15 只（佳木斯大學(xué)實驗室提供），體質(zhì)量2～2.5 kg。在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下，整個研究過程如下：室溫（25±1）°C，相對濕度（60±10）%，光-暗交替12 小時（上午8 點至晚上8點）。室溫條件下飼養(yǎng)，隨機提供食物和水。一切技術(shù)都將根據(jù)ARVO 關(guān)于對動物進(jìn)行眼科和視覺科學(xué)研究的聲明而實施。

1.2 方法

1.2.1 新西蘭兔干眼模型的建立和分組 將根據(jù)動物干眼實驗的報道方法［4］，使用0.2%苯扎氯銨制造干眼動物模型：除了正常組新西蘭兔，所有實驗兔使用0.2%苯扎氯銨滴眼液每天兩次，持續(xù)兩周。造模成功的兔模型，被隨機分為以下三組：A 組：空白對照組，不進(jìn)行任何治療。B 組：0.1%濃度玻璃酸鈉滴眼液，每天四次點眼。C 組：0.1%玻璃酸鈉滴眼液和?；撬岬窝垡褐委?，每天四次點眼。

1.2.2 角膜熒光染色 該實驗采用常見的眼表滴入熒光素鈉的方法來評估角膜上皮的破壞情況。先用0.9%的NaCl 溶液將兔結(jié)膜囊內(nèi)沖洗1～2 次保證眼表干凈后，再用方紗拭去眼周多余水分：然后，將熒光素鈉在眼科專用測試紙的熒光素鈉部分用0.9%的NaCl 溶液全部蘸濕浸潤后，將蘸濕部分的熒光素鈉輕柔的接觸新西蘭兔的角膜表面，當(dāng)熒光素鈉液將角膜全部覆蓋后，在裂隙燈顯微鏡藍(lán)鈷燈下仔細(xì)觀察，并拍照記錄。而角膜損傷部分即為被染成的帶有熒光的黃綠色部分［5］。

1.2.3 淚膜破裂時間 本實驗中評定新西蘭兔淚膜的穩(wěn)定性使用的是BUT 檢測方法。用移液槍，將0.1%的熒光素鈉溶液以10 pL 小心滴入于兔外眥部的結(jié)膜囊內(nèi)約1/3 處，人為閉合其上下眼瞼并使其瞬目三次后，再人為保持新西蘭兔正常睜眼的狀態(tài)下，立即于數(shù)碼裂隙燈顯微鏡或藍(lán)鈷光下觀察，并記錄此時至染色結(jié)果范圍內(nèi)第一次發(fā)生黑色斑點（破裂點）的時間，最后取得三個平均值并進(jìn)行記錄［6］，BUT 測定數(shù)值：小于10 s 為淚膜不穩(wěn)定。

1.2.4 淚液分泌 新西蘭兔用Schirmer 辦法進(jìn)行測定淚液的分泌狀況，先選取淚液測試濾紙片條放在兔眼下方結(jié)膜囊內(nèi)，約5 min 后取出濾紙片條并記下該紙條的潤濕長度（mm）。治療前（D0）、治療后第3 天（D3）、第7 天（D7）、第14 天（D14）的同一時間段，本試驗使用濾紙條對新西蘭兔進(jìn)行SIt 測試。用眼科專業(yè)鑷子將小紙條的一端放在兔眼的結(jié)膜囊中外1/3 處，靜待約60 s，然后專用尺進(jìn)行測定比對其已浸濕部分的直徑，并進(jìn)行記錄（精確到0.5 mm）。檢查之后用手指輕輕使新西蘭兔上下眼瞼閉合，防止角膜手術(shù)創(chuàng)傷和眼表遭受外部沖擊。Schirmer 檢測結(jié)果：淚液分泌的正常值，10～15 mm，＜10 mm 為淚液分泌不足，＜5 mm 為干眼癥。

1.2.5 角膜結(jié)膜組織學(xué)變化 本實驗采用了對石蠟的切片，進(jìn)行了蘇木精-伊紅（HE）染色，在光鏡下觀察各組新西蘭兔角膜組織形態(tài)學(xué)各方面的改變；對石蠟切片進(jìn)行了高碘酸-雪夫（PAS）染色，在光鏡下觀察各組新西蘭兔結(jié)膜杯狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的改變。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS 25 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗。計數(shù)資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組新西蘭兔角膜熒光素染色檢測結(jié)果

治療后第7 天，A 對照組新西蘭兔角膜可見大片熒光素著染，B 組和C 組新西蘭兔角膜可見少量點狀熒光素著染；治療后第14 天，B 組仍可見少量熒光素著染，C 對照組更接近于正常。見圖1。

圖1 角膜熒光素染色檢測結(jié)果

2.2 各組淚膜破裂時間實驗結(jié)果比較

實驗干預(yù)治療前兩組之間的淚膜破裂時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均為P＞0.05）。實驗干預(yù)治療后第7 天和第14 天，數(shù)值B 組C 組淚膜破裂時間顯著高于A 組，C 組高于B 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均為P＜0.05）。見表1。

表1 各組淚膜破裂時間實驗結(jié)果比較（,s）

表1 各組淚膜破裂時間實驗結(jié)果比較（,s）

注：1）與A 組比較，P＜0.05；2）與B 組比較，P＜0.05。

2.3 各組淚液分泌結(jié)果比較

實驗干預(yù)治療前，兩組角膜淚液分泌水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。實驗干預(yù)治療后第3 天，角膜分泌值與B 組C 組和A 組角膜淚液分泌量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。第7 天和第14 天，角膜淚液分泌量顯著高于A 組，數(shù)值C 組高于B 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 各組淚液分泌結(jié)果比較（,mm）

表2 各組淚液分泌結(jié)果比較（,mm）

注：1）與A 組比較，P＜0.05；2）與B 組比較，P＜0.05。

2.4 各組角膜上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

光鏡下觀察角膜組織結(jié)構(gòu)。角膜上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化：A 對照組的新西蘭兔，角膜上皮層顯著性降低，可見細(xì)胞浸潤，上皮細(xì)胞細(xì)胞膜界限不清而且排列紊亂，角膜表面不光滑；各給藥組兔的角結(jié)膜上皮情況與模型組對比均有所改善，其中C 組給藥組角膜上皮排列均較為比較完整，且上皮細(xì)胞體積也有恢復(fù)，病理情況有所改善，接近于正常水平。見圖2。

圖2 角膜上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

2.5 結(jié)膜杯狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

光鏡下觀察結(jié)膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)：結(jié)膜表面可見杯狀細(xì)胞，對照組A 結(jié)膜上皮細(xì)胞缺失，結(jié)膜杯狀細(xì)胞數(shù)量下降，微絨毛消失，細(xì)胞間的連接或斷裂固有層出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤；B、C 治療組新西蘭兔富含結(jié)膜杯狀細(xì)胞，分泌顆粒豐富，杯狀細(xì)胞數(shù)量逐漸增多，上皮細(xì)胞的表面微絨毛也逐漸增多，細(xì)胞緊密，C 治療組更接近于正常，無水腫及炎癥細(xì)胞浸潤。見圖3。

圖3 結(jié)膜杯狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

3 討論

干眼的主要治療目標(biāo)是緩解癥狀，并維持正常視覺功能［7］。輕度和中度干眼癥是可逆的，在緩解癥狀的同時應(yīng)盡可能消除病因。重度干眼癥有不同的病因，而且大多是不可逆的。治療目標(biāo)是在合理治療的基礎(chǔ)上保留視覺功能，延緩癥狀。干眼的治療原則也是根據(jù)干眼的類型和程度提供長期的、個性化的治療［8-11］，并使患者適應(yīng)緩慢的疾病管理系統(tǒng)。治療方案的基本選擇原則是從簡單到復(fù)雜，從無創(chuàng)性到有創(chuàng)性［12］。

人工淚液功能主要是潤滑眼表，可以適用于各種各樣的干眼癥。在人工淚液中，富有代表性的是玻璃酸鈉。玻璃酸鈉自身具備很強的粘彈性、可塑力和吸濕特性，對眼表有著提高潤滑、緩解眼表干澀癥狀的效果，而從眼表中獲得足夠的潤滑劑又能夠減輕因受到外界影響的癥狀，又對眼淚膜的穩(wěn)定能力起到保障作用，另有科學(xué)研究表明，玻璃酸鈉在抗炎和抗氧化等幾個方面都有著重要的效果。在細(xì)菌生長、分化和成熟過程中也有很大的影響［13］。玻璃酸鈉的使用可以改善干眼癥動物模型的眼表損傷，促進(jìn)眼表的修復(fù)。

?；撬崾且环N特殊的、高滲透性的氨基酸，存在大腦、心臟和肌肉中，因此在心血管、顱神經(jīng)、運動、免疫和視覺系統(tǒng)中發(fā)揮著出色的調(diào)節(jié)功能［14］。?；撬嵋彩且活惪寡趸瘎?，呈游離狀態(tài)下普遍出現(xiàn)于哺乳動物機體，可以保護(hù)哺乳動物機體的滲透壓均衡，并具有抵抗炎癥和控制細(xì)胞凋亡的功能，在一定的環(huán)境下可以產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞保護(hù)能力，以及對人類角膜的自身修護(hù)功能［15］。?；撬峥梢源龠M(jìn)淚液分泌，緩解干眼角膜上皮增生情況?？傊；撬岬窝垡汉筒Ａ徕c滴眼液的聯(lián)合使用可以改善新西蘭兔動物模型中干眼的相關(guān)指標(biāo)。