TGF-β1、IFN-γ及Treg 水平變化與小兒支氣管哮喘及疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究

田斌斌 郭小鳳 申永霞 李捷

（1.開封市兒童醫(yī)院急診科，河南 開封 475000；2.開封市兒童醫(yī)院新生兒科，河南 開封 475000；3.開封市兒童醫(yī)院內(nèi)科門診，河南 開封 475000）

支氣管哮喘（BA）是指以反復(fù)發(fā)作的喘息、咳嗽、氣促、胸悶為主要癥狀表現(xiàn)的小兒疾病，常在夜間或凌晨發(fā)作或加劇，主要病因包括個(gè)體過敏體質(zhì)、肥胖、遺傳因素等[1]。臨床多表現(xiàn)為煩躁不安、呼吸困難，以呼氣困難為主，往往不能平臥，有時(shí)喘鳴音可傳至窒外；危重狀態(tài)時(shí)患兒面色蒼白、鼻翼扇動(dòng)、口唇、指甲紫紺，甚至冷汗淋漓，面容怕恐不安，應(yīng)予積極治療[2]。該病常見并發(fā)癥包括下呼吸道感染，肺部感染，水、電解質(zhì)和酸堿平衡失調(diào)，氣胸，縱膈氣腫，呼吸衰竭和猝死等。

臨床多采用霧化吸入糖皮質(zhì)激素和支氣管擴(kuò)張劑（β2受體激動(dòng)劑）的治療方式，可有效改善不良癥狀，但仍有部分重度BA患兒療效不佳[3]。研究表明，轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、γ干擾素（IFN-γ）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）參與支氣管哮喘免疫反應(yīng)與炎癥反應(yīng)的全過程，但目前臨床對(duì)TGF-β1、IFN-γ和Treg水平評(píng)估病情程度的研究較少[4]。因此，本研究旨在分析小兒BA中TGFβ1、Treg及IFN-γ水平變化與疾病的相關(guān)性，為疾病的治療和預(yù)后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2019年4月至2022年4月收治的小兒BA患者127例為研究對(duì)象，設(shè)為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床相關(guān)資料完整，耐受性較好者；患兒年齡＜6歲；全部患兒均符合《支氣管哮喘控制的中國專家共識(shí)》中BA診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；無個(gè)人及家族過敏性疾病史；本研究經(jīng)醫(yī)院倫理會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重造血系統(tǒng)疾病和傳染??；合并心、肺、肝、腎等其他臟器并發(fā)癥；存在認(rèn)知功能障礙和心理問題；有惡性腫瘤和嚴(yán)重全身感染。其中女61例（48.03%），男66例（51.97%），年齡4-6歲，平均年齡5.25±0.33歲。根據(jù)BA疾病嚴(yán)重將觀察組患兒進(jìn)一步分為：輕度組43例、中度組52例及重度組32例。病情嚴(yán)重程度的判定標(biāo)準(zhǔn)為，輕度：癥狀每周發(fā)作1次以上，但每日發(fā)作次數(shù)小于1次，睡眠及活動(dòng)受影響，第一秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值≥80%；中度：臨床癥狀明顯，睡眠及活動(dòng)受影響，夜間哮喘每周發(fā)作1次以上，第一秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值在60%-79%；重度：哮喘頻繁發(fā)作，夜間癥狀明顯，體力活動(dòng)受限，第一秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值＜60%以下[6]。輕、中、重組一般資料比較無差異，不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 輕、中、重組一般資料比較（n(%)或±SD）

表1 輕、中、重組一般資料比較（n(%)或±SD）

組別 總例數(shù) 性別 年齡(歲) 病程(月) 男 女 輕度組 43 24(55.81) 19(44.19) 4.06±0.89 1.22±1.58 中度組 52 27(51.92) 25(48.08) 3.98±1.23 1.34±1.42 重度組 32 17(53.13) 15(46.88) 4.24±0.57 1.31±1.09

另選取同期在本院行體檢各項(xiàng)指標(biāo)正常的健康兒童113例為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床相關(guān)資料完整，耐受性較好；年齡＜6歲；無個(gè)人及家族過敏性疾病史；無個(gè)人及家族過敏性疾病史；患者及家屬知情同意并簽署知情同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重造血系統(tǒng)疾病和傳染病；合并心、肺、肝、腎等其他臟器并發(fā)癥；存在認(rèn)知功能障礙和心理問題；有惡性腫瘤和嚴(yán)重全身感染。其中女52例（46.02%），男61例（53.98%），年齡4-5歲，平均年齡4.12±1.27歲。對(duì)照組和觀察組的一般資料比較無差異，不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 TGF-β1、IFN-γ水平檢測(cè)

采集清晨空腹肘靜脈血5 mL，以3000 r·min-1離心10 min，獲得上層血清，置于-20℃冰箱內(nèi)冷凍待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫法對(duì)血清TGF-β1、IFNγ水平進(jìn)行檢測(cè)（使用來自意大利Instrumentation Laboratory SPA的市售試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作）。

1.2.2 Treg細(xì)胞含量分析

分離PBMC，RPMI1640培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞重懸為2×109L-1，每孔依次加入佛波酯至終濃度50 μg·L-1、離子霉素至750 μg·L-1、莫能星至2 μmol·L-1后，于CO2培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）中培養(yǎng)5 h。以2000 r·min-1的速度離心8 min，棄上清洗滌細(xì)胞。取l×l06PBMC于流式專用試管中，標(biāo)記Treg測(cè)量管，在Treg測(cè)量管中加入抗人CD4-FITC和CD25-PE單克隆抗體。于室溫環(huán)境下，避光孵育30 min。離心重新懸浮細(xì)胞到200 μL。再加入10 μL PE標(biāo)記的抗人Foxp3抗體，避光、4℃條件下孵育30 min，洗滌重懸，流式細(xì)胞儀（美國貝克曼庫爾特CytoFLEX生產(chǎn)）進(jìn)行分析。

對(duì)比各組血清TGF-β1、IFN-γ水平和血中Treg細(xì)胞含量；分析TGF-β1、IFN-γ及Treg水平與疾病程度的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 27.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）的形式表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示，組間比較采用卡方χ2檢驗(yàn)；均以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組和觀察組的TGF-β1、IFN-γ水平和Treg細(xì)胞含量

觀察組TGF-β1水平明顯高于對(duì)照組，Treg細(xì)胞含量、IFN-γ水平低于對(duì)照組（P＜0.05）。詳見表2。

表2 兩組TGF-β1、Treg細(xì)胞含量和IFN-γ水平比較（±SD）

表2 兩組TGF-β1、Treg細(xì)胞含量和IFN-γ水平比較（±SD）

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05。

組別 例數(shù) TGF-β1(ng·L-1) IFN-γ(ng·L-1) Treg細(xì)胞含量(%) 對(duì)照組 113 125.38±32.18 112.34±18.68 8.55±1.92 觀察組 127 287.25±33.02a 62.37±15.23a 5.86±1.77a

2.2 不同嚴(yán)重程度BA患者的TGF-β1、IFN-γ水平和Treg細(xì)胞含量

TGF-β1水平隨著BA嚴(yán)重程度上升而上升，Treg細(xì)胞含量和IFN-γ水平隨著BA嚴(yán)重程度下降而下降（P＜0.05）。見表3。

表3 不同BA嚴(yán)重程度患者的TGF-β1、Treg和IFN-γ水平比較（±SD）

表3 不同BA嚴(yán)重程度患者的TGF-β1、Treg和IFN-γ水平比較（±SD）

注：與輕度組相比，aP＜0.05；與中度組相經(jīng)，bP＜0.05。

組別 n TGF-β1(ng·L-1) IFN-γ(ng·L-1) Treg細(xì)胞含量(%) 輕度組 43 168.32±30.21 105.49±18.17 7.88±1.84 中度組 52 256.24±31.48a 70.26±16.33a 6.09±1.32a 重度組 32 302.45±32.15ab 56.39±15.21ab 4.23±1.08ab

2.3 TGF-β1、IFN-γ和 Treg與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析

血清TGF-β1水平與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（r=0.845，P＜0.05）；Treg細(xì)胞含量與疾病嚴(yán)重程度呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.564，P＜0.05）；血清IFNγ水平與疾病嚴(yán)重程度呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.564，P＜0.05）。

3 討論

BA是一種表現(xiàn)反復(fù)發(fā)作性咳嗽、喘鳴和呼吸困難，并伴有氣道高反應(yīng)性的可逆性、梗阻性呼吸道疾病，積極防治小兒支氣管哮喘對(duì)防治成人支氣管哮喘意義重大。本次研究結(jié)果顯示，觀察組TGF-β1水平明顯高于對(duì)照組，IFN-γ水平和Treg細(xì)胞含量均低于對(duì)照組，且血清TGF-β1水平與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，血清IFN-γ水平和Treg細(xì)胞含量與疾病嚴(yán)重程度呈顯著負(fù)相關(guān)。Treg是近年發(fā)現(xiàn)的一種具有免疫抑制活性的CD4+T細(xì)胞亞群，與自身免疫性疾病的發(fā)生關(guān)系密切，其異常表達(dá)可導(dǎo)致自身免疫性疾病[7]。舒姣潔等多位學(xué)者研究中指出，Treg對(duì)于自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展都具有重要意義，對(duì)其進(jìn)行深入研究將有助于了解自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制，對(duì)疾病預(yù)后判斷、進(jìn)一步的治療有著深遠(yuǎn)的意義[8]。IFN-γ是II型干擾素的唯一成員，可通過抗病毒、抗增殖和免疫調(diào)節(jié)功能在宿主防御中扮演關(guān)鍵角色[9]。能有效活化巨噬細(xì)胞、指導(dǎo)B細(xì)胞免疫球蛋白的合成、類型轉(zhuǎn)化和分泌，在自身免疫和動(dòng)脈粥樣硬化癥等一些炎癥性疾病過程中起著重要作用[9]。綜上所述，血清TGF-β1、IFN-γ及Treg水平與BA及疾病的嚴(yán)重程度息息相關(guān)，是誘發(fā)疾病進(jìn)展的重要因素，臨床可聯(lián)合血清TGFβ1、IFN-γ及Treg水平對(duì)BA病情進(jìn)行評(píng)估，為臨床制定治療方案提供依據(jù)。