柿葉美白面膜制劑工藝的研究

王含笑，張毓珈，李 猛，呂 哲，李東霞

（大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116622）

柿葉為雙子葉柿樹科柿樹屬柿（Diospyros kakiThunb.）的新鮮或干燥樹葉。現(xiàn)代研究表明，柿子葉的活性成分主要是三萜類、多酚類、揮發(fā)性成分等化學(xué)成分，具有抗菌消炎、活血降壓、預(yù)防貧血、抗氧化等作用，在臨床上主要用于治療咳喘、降低血壓、消渴及潰瘍?？顾ダ系拿廊菪Ч饕怯捎诙喾宇愇镔|(zhì)，以單寧酸為主，其與自由基發(fā)生反應(yīng)，能產(chǎn)生強(qiáng)大的抗氧化性。研究表明，絕大多數(shù)的皮膚老化與自由基產(chǎn)生的損害相關(guān)。因柿葉中的多酚類物質(zhì)對(duì)消除自由基作用顯著，故以柿葉提取物為主要原料所制成的面膜可用于祛斑、延緩皮膚的老化。

目前柿葉產(chǎn)品的開發(fā)利用較少，且通常是柿葉茶和柿葉飲料等初級(jí)產(chǎn)品，利用柿葉中的活性成分開發(fā)復(fù)方制劑更是稀少。為了對(duì)柿葉資源進(jìn)行進(jìn)一步開發(fā)，充分發(fā)揮柿葉單寧的有效作用，以柿葉為主要原料，研制具有抗氧化、美白祛斑功能的面膜。本制劑所用原料來源充足且價(jià)格低廉，可為人們提供更加經(jīng)濟(jì)、安全有效的美白面膜選擇。

1 試藥與儀器

1.1 試藥

柿葉產(chǎn)于陜西省華陰市，經(jīng)大連大學(xué)中藥基礎(chǔ)教研室蘇明教授鑒別為柿科植物柿（Diospyros kakiThunb.）的葉。明膠，CMC-Na，甘油，聚丙烯酰胺，尼泊金乙酯，Na2HPO4·12H2O，NaH2PO4·12H2O，L-酪氨酸，丙二醇，無水乙醇，活性炭。

1.2 儀器

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9076A，上海市精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司）、分析天平（AL204，梅特勒-托利多儀器上海有限公司）、電子天平（JM2102，余姚紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司）、調(diào)溫電熱套（KDM，山東新華電熱儀器廠）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（N-1300，東京理化器械株式會(huì)社）、恒溫水浴鍋（HH-2，上海梅香儀器有限公司）、離心機(jī)（TDL80-2B，北京市醫(yī)用離心機(jī)）、比例光束分光光度計(jì)（U-5100型，日本株式會(huì)社日立高新技術(shù)）

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)方法

2.1.1 柿葉提取液的制備

選用干凈柿葉，置50 ℃烘箱內(nèi)烘干，碾碎至適當(dāng)粗細(xì)，稱取柿葉粉末10 g，按料液比1∶10，取70%濃度乙醇浸泡30 min，加熱回流提取2次，每次40 min，合并提取液。過濾后加入定量活性炭，靜置24 h，過濾至澄清。采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除乙醇（30℃，15 r·min-1），用去離子水稀釋至250 mL，得柿葉提取液。

2.1.2 柿葉面膜的制備

分別稱取明膠、CMC-Na和甘油，各加入適量去離子水，80 ℃水浴加熱，將其混合，充分?jǐn)嚢韬笏”兀环Q取適量柿葉提取液，加入聚丙烯酰胺，滴加少量乙醇，攪拌溶解；稱取適量尼泊金乙酯和香精，加適量水溶解。將上述三種液體混合，并加入適量去離子水混勻， 冷卻至室溫。

2.1.3 單因素試驗(yàn)

（1）CMC-Na和明膠的含量。按上述方法制備3份面膜，將CMC-Na和明膠按1%、2%、3%比例混合，其他條件一致，觀察面膜形態(tài)及流動(dòng)性，確定最優(yōu)含量。

（2）聚丙烯酰胺的含量。按上述方法制備3份面膜，將聚丙烯酰胺以0.3%、0.5%、0.7%的比例加入面膜中，其他條件一致，觀察面膜的粘度，確定最優(yōu)含量。

（3）甘油的含量。按上述方法制備3份面膜，將甘油以3%、4%、5%的比例加入面膜中，其他條件一致，觀察保濕度，確定最優(yōu)含量。

（4）柿葉提取液的含量。將柿葉提取液分別以8%、10%和12%的比例加入正交試驗(yàn)所得的最優(yōu)配方中，進(jìn)行單因素試驗(yàn)，通過檢測面膜中酪氨酸酶的抑制率和面膜的pH值，確定柿葉提取液的最佳添加量。

2.1.4 面膜配方的優(yōu)化

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，比例如表1。以外觀（光澤度）、挑起（拉絲感、鋪展性）、涂抹（粘稠度、吸收性、保濕度、爽滑感）為考察指標(biāo)，確定最佳配方。

表1 L9 (33) 面膜配方正交試驗(yàn)因素水平表

取Na2HPO4·12H2O 2.680 g、NaH2PO4·12H2O 1.380 g，分別用去離子水于50 mL容量瓶中定容，用時(shí)等量混勻。

（1）酪氨酸酶溶液的制備。取新鮮的去皮土豆10 g，切塊冷凍。將洗凈的研缽和10 mLPBS放入冰箱冷凍20 min，取出，將土豆和PBS放入研缽充分搗碎，用四層紗布過濾，置離心機(jī)中離心（4 500 r·min-1，10 min），取上層清液，用PBS于50 mL容量瓶中定容，得酪氨酸酶溶液。

（2）L-酪氨酸溶液的制備。精密稱取L-酪氨酸0.112 5 g，用PBS溶液溶解并于25 mL容量瓶中定容。

（3）酪氨酸酶活性抑制率的測試。按表2 所示，用移液管精密量取B1、B2、C1、C2四組反應(yīng)溶液，置37 ℃水浴鍋中，水浴10 min，以B2為B1的參比，C2為C1的參比，分別測出其在475 nm處的吸光度A1和A2，酪氨酸酶抑制率為： 抑制率=（1-A2/A1）×100%，A1未加樣品，A2加入樣品。

表2 酪氨酸酶活性抑制率測試試劑用量

2.1.5 柿葉美白面膜質(zhì)量檢測

（1）性狀與細(xì)膩度。取柿葉美白面膜5g，置于10 mL的燒杯中，觀察其外觀性狀，并涂布于皮膚上，通過感官指標(biāo)評(píng)價(jià)其細(xì)膩度。

（2）pH值。取柿葉美白面膜1 g，溶解于20 mL去離子水中，加熱微沸，冷卻至室溫后用pH計(jì)測定pH值。

（3）耐寒、耐熱試驗(yàn)。取柿葉美白面膜5 g，裝入10 mL的試管中，平行6組，全部用封口膜封好后，分別置于0 ℃、-10 ℃、-20 ℃恒定溫度的冰箱和30 ℃、40 ℃、50 ℃恒定溫度的水浴鍋中，貯存4 h，觀察經(jīng)寒、熱變化后，面膜的外觀性狀變化。

（4）保濕性試驗(yàn)。將載玻片貼上醫(yī)用透氣膠帶作為載體，記錄此載體的質(zhì)量為m，將0.30 g制作完成的面膜均勻涂于膠帶表面，記錄此時(shí)玻璃板和樣品的質(zhì)量m0，將其置于恒溫恒濕放有變色硅膠的干燥器中（相對(duì)濕度為48%），4 h、24 h稱量質(zhì)量mt，計(jì)算保濕率。保濕率=（mt-m）/（m0-m）×100%

（5）離心試驗(yàn)。在常溫狀態(tài)下，在3支10 mL離心管中分別加入2 g柿葉面膜，以4 500 r·min-1離心20 min，觀察經(jīng)離心處理后面膜的變化。

（6）皮膚測試。選取5名前臂內(nèi)側(cè)皮膚健康無創(chuàng)傷的志愿受試者，洗凈受試皮膚部位后，于每名受試者左前臂內(nèi)側(cè)皮膚表面均勻涂敷0.5 g面膜樣品，以右前臂的相同部位作為空白對(duì)照，12 h后用溫水洗凈，對(duì)比觀察受試部位有無紅腫、起疹等不良現(xiàn)象，連續(xù)測試3天。

2.2 試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

（1）CMC-Na和明膠含量對(duì)面膜性狀的影響。當(dāng)CMC-Na和明膠在面膜中的含量為1.0%時(shí)，面膜流動(dòng)性過強(qiáng)，質(zhì)地略?。划?dāng)含量為3.0%時(shí)，面膜流動(dòng)性變差，質(zhì)地略稠，不易挖取涂抹。故初步確定CMC-Na和明膠在面膜中的含量為2%。

（2）聚丙烯酰胺的含量對(duì)面膜性狀的影響。在0.3%~0.7%的范圍內(nèi)，面膜中聚丙烯酰胺的含量增加，面膜的粘度隨之增加，影響使用感，過多的聚丙烯酰胺會(huì)使面膜拉絲而不易斷。故初步確定聚丙烯酰胺在面膜中的含量為0.3%。

（3）甘油含量對(duì)面膜性狀的影響。隨著保濕劑甘油含量的增加，面膜的保濕效果并沒有得到明顯的加強(qiáng)。但甘油含量在3.0%時(shí)，面膜黏度較差；甘油含量在4.0%和5.0%時(shí)，黏度適中。綜合考慮節(jié)約成本及粘度適中的原則，初步確定面膜中甘油的含量為4.0%。

2.2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3結(jié)果可得，各因素對(duì)面膜感官評(píng)價(jià)影響的主次順序?yàn)锳>B>C，即CMC-Na/明膠對(duì)產(chǎn)品感官影響最大，聚丙烯酰胺次之，甘油對(duì)其影響最小，并得出最佳配方為A2B1C3。

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

由表4可見，在柿葉提取液含量為8%~12%時(shí)，面膜的pH為6.64~6.39，符合QB/T 2872-2017對(duì)面膜pH的要求（3.5~8.5）。通過酪氨酸酶活性測試得出，隨柿葉提取液添加量的增加，面膜對(duì)酪氨酸酶的抑制率也隨之加強(qiáng)，可達(dá)到63.5%~68.7%，因此制得的面膜可以在一定程度上抑制酪氨酸酶的活性，證明其具有祛斑美白的功效，但面膜的粘度和顏色也會(huì)隨著柿葉提取液添加量增加而一同增加。綜合考慮面膜粘度適中、節(jié)約成本及美觀的原則，選擇10%為柿葉提取液的最佳添加量。

表4 柿葉提取液含量的選擇

2.2.3 面膜質(zhì)量檢測

按由表5可見，面膜的干燥時(shí)間適中，在起到保濕作用的同時(shí)，還利于美白祛斑成分的吸收。常溫狀態(tài)下，該面膜的pH值符合QB/T 2872-2017關(guān)于面膜的規(guī)定。在高溫和寒冷狀態(tài)前后，其顏色、狀態(tài)未改變，表明面膜在寒、熱環(huán)境下狀態(tài)穩(wěn)定。離心處理后，未發(fā)現(xiàn)明顯分層現(xiàn)象，表明面膜在離心狀態(tài)下的性質(zhì)穩(wěn)定。

表5 面膜質(zhì)量檢測結(jié)果

5名受試者在經(jīng)皮膚試驗(yàn)后，受試左前臂皮膚相比同位置的右前臂皮膚更為水潤，未出現(xiàn)紅腫、皮疹等不良反應(yīng)，也沒有瘙癢、刺痛、過敏等現(xiàn)象，表明該款面膜性質(zhì)溫和，對(duì)皮膚沒有刺激性。

3 結(jié)論

文章以柿葉提取液為原料，研制了一款具有祛斑功效的天然美白面膜，通過正交試驗(yàn)確定該柿葉美白祛斑面膜以明膠1.5%，CMC-Na1.5%，甘油5.0%，聚丙烯酰胺0.1%，柿葉提取液10%為最佳配方。所制得的柿葉美白祛斑面膜為淡褐色、無刺激性氣味、易涂展、質(zhì)地細(xì)膩無明顯顆粒感，在寒、熱狀態(tài)時(shí)穩(wěn)定性良好，各項(xiàng)指標(biāo)符合QB/T 2872-2017面膜行業(yè)的有關(guān)規(guī)定。對(duì)該面膜進(jìn)行酪氨酸酶活性測試，得出其抑制率可達(dá)到66.2%，具有較高的抗氧化能力和良好的保濕活性，且對(duì)皮膚無刺激性。