食品中獸藥殘留檢測卡與試劑盒檢測技術(shù)

王宏業(yè)

(七臺(tái)河市檢驗(yàn)檢測中心，黑龍江 七臺(tái)河 154600)

0 引言

食品檢測是一項(xiàng)系統(tǒng)化的復(fù)雜工作，內(nèi)容比較繁雜。食品種類越來越多，食品檢測內(nèi)容也在逐漸增加，不同的食品，其檢測標(biāo)準(zhǔn)和要求也存在很大差別，傳統(tǒng)的單一的檢測方法已逐漸被淘汰。應(yīng)健全檢測規(guī)范，積極運(yùn)用先進(jìn)的檢測技術(shù)，探索新的檢測模式，完成食品檢測工作。目前，我國食品檢測工作中存在的主要問題是食品檢測方法不當(dāng)，檢測技術(shù)落后，檢測標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)不規(guī)范，檢測人員責(zé)任心不強(qiáng)，不能抓住關(guān)鍵環(huán)節(jié)，食品檢測監(jiān)督力度不到位。應(yīng)提高食品檢測技術(shù)水平，健全食品檢測管理體系，抓住食品檢測的重點(diǎn)環(huán)節(jié)。

在食品檢測流程上，應(yīng)對(duì)食品樣本進(jìn)行檢測，為食品監(jiān)管部門提供食品檢測數(shù)據(jù)，對(duì)食品質(zhì)量進(jìn)行有效監(jiān)管，促進(jìn)食品工業(yè)穩(wěn)定發(fā)展，為食品市場供給合格的產(chǎn)品，不斷提升食品質(zhì)量，保證消費(fèi)者合法權(quán)益。在食品檢測機(jī)構(gòu)方面，提升檢測水平和檢測設(shè)備性能，針對(duì)檢測重點(diǎn)環(huán)節(jié)，提升檢測管理水平。優(yōu)化食品檢測工作流程，進(jìn)行檢測業(yè)務(wù)受理，客戶將采集樣本送檢，進(jìn)行檢測任務(wù)派發(fā)，檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行樣品接收、制備、流轉(zhuǎn)、檢測，形成原始記錄，對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行審核，編制、審核批準(zhǔn)檢測報(bào)告，對(duì)檢測報(bào)告存檔管理，提升食品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，保證食品檢測質(zhì)量。抓住食品檢測流程的基本環(huán)節(jié)，加強(qiáng)樣本采集、樣本接收、樣本制備、樣本流轉(zhuǎn)等環(huán)節(jié)的管理。加強(qiáng)檢測流程質(zhì)量管控力度，制定檢測流程改進(jìn)方案，提升食品檢測效率。

食品檢測技術(shù)人員要掌握獸藥殘留快速檢測基本方法和基本操作技能，熟悉獸藥的基本類型，熟悉檢測原理，了解如何獲得獸藥殘留的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)和檢測試劑制造商信息，更好地掌握食品中獸藥殘留控制途徑、技術(shù)方法、標(biāo)準(zhǔn)等。

以食品中獸藥殘留檢測為例，研究檢測適用范圍，檢測必備的儀器、材料和試劑，掌握檢測的主要步驟及檢測中應(yīng)注意的問題等。

1 鹽酸克侖特羅檢測卡檢測技術(shù)

A.檢測適用范圍。鹽酸克侖特羅檢測卡檢測方法應(yīng)用于豬肉、內(nèi)臟和豬尿液中的鹽酸克侖特羅含量的檢測。

B.檢測基本原理。運(yùn)用抗原抗體的特異反應(yīng)及側(cè)向色譜和膠體金技術(shù)進(jìn)行尿液中克侖特羅分子的快速定性檢測。

C.檢測主要儀器。食品加工機(jī)，低速離心機(jī)，電子秤(精度0.1 g)，250 μL單道微量移液器(移液槍)。

D.檢測材料與試劑。鹽酸克侖特羅檢測卡、檢測試劑A(3%三氯乙酸溶液)、檢測試劑B(0.1 mmol/L氫氧化鈉溶液)、pH試紙、剪刀、10 mL試管(或離心管)、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.檢測的主要操作步驟：從原包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在1 h內(nèi)盡快使用。把肉或內(nèi)臟樣本用剪刀剪成碎條后放入食品加工機(jī)中，用一字刀粉碎，稱取5 g粉碎樣本置于試管中，加入5 mL檢測試劑A。蓋上蓋，搖勻，浸泡約10 min。用離心機(jī)離心裝有浸泡液和樣本的試管2 min (3 000 r/min)，用移液槍移取250 μL上清液轉(zhuǎn)移入2 mL檢測管中，加入約l滴檢測試劑B，調(diào)整pH值至7左右。將鹽酸克侖特羅檢測卡片置于干凈平坦的臺(tái)面上，用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處理液于加樣孔內(nèi)，待紫紅色條帶出現(xiàn)后，測試結(jié)果在5 min時(shí)讀取，進(jìn)行結(jié)果判定。

F.靈敏度。靈敏度(閾值)：按照每種檢測卡控制濃度確定。鹽酸克侖特羅有控制規(guī)格，判斷前向供應(yīng)廠家咨詢控制閾值。

G.檢測中應(yīng)注意的幾個(gè)問題：一是豬組織及尿液采用不同型號(hào)的檢測卡，使用時(shí)必須分類使用。二是使用鹽酸克侖特羅(尿液)檢測卡對(duì)豬尿液檢驗(yàn)時(shí)，直接把豬尿液代替樣品處理液用于檢測。三是肉及內(nèi)臟中脂肪會(huì)造成假陽性結(jié)果，取樣時(shí)需剔除肉眼可見的脂肪。四是鹽酸克侖特羅檢測卡必須在常溫下使用，不能對(duì)剛屠宰的豬肉或冷凍豬肉直接進(jìn)行檢測。五是自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對(duì)照，可用與閾值接近的幾個(gè)濃度階梯來校驗(yàn)檢測卡的靈敏度。

2 萊克多巴胺檢測卡檢測技術(shù)

A.檢測適用范圍。此類方法應(yīng)用于豬肉、內(nèi)臟和豬尿液中萊克多巴胺含量的檢測。

B.檢測基本原理。本試劑運(yùn)用競爭抑制膠體金免疫色譜的原理。

C.檢測的主要儀器。食品加工機(jī)，低速離心機(jī)，電子秤(精度0.1 g)，250μL單道微量移液器(移液槍)。

D.檢測材料與試劑。萊克多巴胺檢測卡、檢測試劑A(3%三氯乙酸溶液)、檢測試劑B(0.1 mmol/L氫氧化鈉溶液)、pH試紙、剪刀、1.5 mL離心管、10 mL試管(或離心管)、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.檢測的主要操作步驟：鋁箔包裝袋中取出檢測卡，在1 h內(nèi)盡快使用。把肉或內(nèi)臟樣本用剪刀剪成碎條后放入食品加工機(jī)中，用一字刀粉碎，稱取5 g粉碎樣本置于試管中，加入檢測試劑A 5 mL。蓋上蓋，搖勻，浸泡約10 min。用離心機(jī)離心裝有浸泡液和樣本的試管2 min (3 000 r/min)，用移液槍移取250 μL上清液轉(zhuǎn)移入2 mL檢測管中，加入約l滴檢測試劑B，調(diào)整pH值至7。把萊克多巴胺檢測卡片置于清潔平坦的臺(tái)面上，用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處理液于加樣孔內(nèi)。等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結(jié)果應(yīng)在5 min時(shí)讀取，進(jìn)行結(jié)果判定。

F.靈敏度。靈敏度(閾值)：按照每種檢測卡控制濃度確定，按萊克多巴胺目前的控制規(guī)格，判斷前向供應(yīng)廠家咨詢控制閾值。

G.檢測中應(yīng)注意的問題：一是根據(jù)豬組織和尿液采用不同的檢測卡，必須區(qū)別使用。二是使用萊克多巴胺(尿液)檢測卡對(duì)豬尿液進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，直接把豬尿液代替樣品處理液用于檢測。三是肉及內(nèi)臟中脂肪會(huì)造成假陽性結(jié)果，取樣時(shí)應(yīng)剔除肉眼可見的脂肪。四是萊克多巴胺檢測卡須在常溫下使用，不能對(duì)剛屠宰的豬肉或冷凍豬肉直接檢測。五是自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對(duì)照，可用與閾值接近的濃度階梯來校驗(yàn)檢測卡的靈敏度。

3 氯霉素檢測卡檢測技術(shù)

A.檢測適用范圍。氯霉素檢測卡主要應(yīng)用于牛乳、尿樣、肝、肉、飼料、乳粉及其制品中氯霉素含量的檢測。

B.檢測基本原理。采用高度特異性的免疫色譜檢測技術(shù)，通過單克隆抗體競爭結(jié)合氯霉素偶聯(lián)物和牛乳中可能含有的氯霉素?？ㄆ虾斜皇孪裙潭ㄓ谀ど蠝y試區(qū)(T)的氯霉素偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗氯霉素單克隆抗體。

C.檢測的主要儀器：低速離心機(jī)。

D.檢測材料與試劑：氯霉素檢測卡、檢測反應(yīng)試劑杯、吸管、1.5 mL離心管、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.檢測的主要操作步驟：以牛乳氯霉素檢測為例，把采集的樣品進(jìn)行編號(hào)，放于常溫(20℃～30℃)室內(nèi)，低溫牛乳的流動(dòng)性差，不適合試紙色譜檢測。用一次性吸管取1 mL搖勻原乳，加入離心管內(nèi)，扣緊離心管蓋，對(duì)稱放人離心機(jī)轉(zhuǎn)頭內(nèi)，3 000 r/min離心3～4 min，直至離心管溶液頂部出現(xiàn)明顯的脂肪層，離心效果較差時(shí)可考慮使用較高轉(zhuǎn)速的離心機(jī)，控制速度在7 000～10 000 r/min。把吸管插入離心管脂肪層液面下5 mm處，準(zhǔn)確定量吸取脫脂牛乳樣品至吸管刻度線位置。從塑料筒內(nèi)取出需要數(shù)量的反應(yīng)小杯，撕去杯面的密封膜。把吸取的牛乳全部滴入反應(yīng)小杯中，用吸管將反應(yīng)小杯中的溶液進(jìn)行反復(fù)吸放，直至小杯底部及四壁的紅色物質(zhì)全部溶解并混合均勻后，等待約2 min，即得待檢樣品。必須注意的是：本品的靈敏度高低與混勻后等待的時(shí)間正相關(guān)，提高靈敏度可適當(dāng)延長混勻后等待的時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間)。從原包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在1 h內(nèi)應(yīng)盡快地使用。用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處理液于加樣孔(S)內(nèi)。加樣后開始計(jì)時(shí)，待紫紅色條帶出現(xiàn)后，測試結(jié)果在5 min時(shí)讀取，進(jìn)行結(jié)果判定。

F.靈敏度。靈敏度(閾值)：按每種檢測卡控制濃度確定，根據(jù)氯霉素控制規(guī)格，判斷前向供應(yīng)廠家咨詢控制闡值。

G.檢測中應(yīng)注意的問題：一是家禽組織、尿液或飼料必須采用不同類別的檢測卡。二是使用氯霉素(尿液)檢測卡對(duì)家禽尿樣進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，直接將豬尿液代替樣品處理液用于檢測即可。三是檢測家禽肉及內(nèi)臟中脂肪會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果，取樣時(shí)應(yīng)剔除肉眼可見的脂肪。四是氯霉素檢測卡應(yīng)在常溫下使用，不能對(duì)剛屠宰的禽肉或冷凍禽肉直接檢測。五是自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對(duì)照，可用與閾值接近的幾個(gè)濃度階梯來校驗(yàn)檢測卡的靈敏度。

4 牛乳中青霉素酶活性檢測試劑盒檢測技術(shù)

A.檢測適用范圍?？蓹z測到牛乳樣品中殘留的青霉素酶。

B.檢測的主要儀器。溫育器，冰箱或保溫箱，單道微量移液器。

C.檢測材料與試劑。微量移液器吸嘴(盒裝96支)，含特定濃度青霉素G的玻璃瓶裝試劑，試劑筒(包括8孔微孔試劑和8條測試條)，陰性質(zhì)控試劑(不含抗生素和酶的原乳干粉)。

D.檢測的主要操作步驟：吸取400 μL牛乳樣品加到含有一定濃度青霉素G的玻璃試劑瓶中，混合均勻。40℃±3℃溫育45 min。吸取200 μL溫育后牛乳樣品加到裝有凍干試劑的微孔中，混合均勻。40℃±3℃溫育3 min。測試條插入到微孔中，40℃士3℃下繼續(xù)溫育3 min，判讀結(jié)果。

E.檢測中應(yīng)注意的問題：一是試劑盒必須保存在℃～8℃的陰涼干燥處。使用前從冰箱取出，恢復(fù)至室溫后方可使用。二是陰性質(zhì)控需要用1 mL。純凈水還原，混合均勻。陰性質(zhì)控加純凈水還原后需在20℃保存，防止反復(fù)凍融。三是該方法不能用于檢測酸奶。四是要確保待測牛乳樣品是抗生素檢測結(jié)果陰性。

F.檢測結(jié)果判定。其一，陽性(+)牛乳樣品中摻有青霉索酶：若牛乳樣品中含有青霉素酶，青霉素G因其降解，不能抑制青霉素受體與測試條俘獲帶的結(jié)合，則測試條的檢測線(T線)區(qū)出現(xiàn)紅色條帶，而控制線(C線)區(qū)會(huì)發(fā)生淺紅色的條帶。其二，陰性(-)牛乳樣品中不含青霉素酶：若牛乳樣品中未摻雜青霉素酶，或青霉素酶含量少于可檢測到的范圍，玻璃瓶中的青霉素G會(huì)與青霉素受體結(jié)合，將抑制青霉素受體與俘獲帶的結(jié)合，因此，在測試條上只有控制線(c線)區(qū)的一個(gè)條帶顯色。其三，溫育結(jié)束后，10 min內(nèi)讀取結(jié)果。如超過15 min，檢測結(jié)果無效，測試條干燥后顏色深度會(huì)增加。若發(fā)現(xiàn)陽性檢測結(jié)果，必須進(jìn)行驗(yàn)證。

5 鏈霉素ELISA試劑盒在檢測中的應(yīng)用

A.目的要求。理解鏈霉素ELISA試劑盒在蜂蜜、牛乳及組織中鏈霉素檢測中的現(xiàn)實(shí)意義。

B.原理方法。應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)原理，采用競爭抑制法構(gòu)建用于定量測定蜂蜜、肉類及牛乳中鏈霉素殘留的一種ELISA試劑。

C.檢測的主要器材。恒溫箱(孵箱)，單道微量移液器，塑料吸嘴，洗瓶；酶標(biāo)儀，洗板機(jī)；動(dòng)物性制品，乳制品等。

D.主要操作步驟：熟悉試劑盒說明書。把試劑盒內(nèi)的預(yù)包被孔條(通常是由12條可拆卸板條組成，每條8孔)，按需要取出8孔條平衡到室溫，操作過程所需的試劑一同取出平衡到室溫。把準(zhǔn)備好的供試樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等分別定量取到反應(yīng)微孔內(nèi)進(jìn)行孵育，用配套洗液清洗反應(yīng)微孔。微孔去除多余水分后，逐孔定量加入酶標(biāo)記物，按要求孵育一定時(shí)間，用配套洗液清洗反應(yīng)微孔。微孔去除多余水分后，逐孔定量加入TMB，按要求避光孵育一定時(shí)間，直接判讀定性結(jié)果或在酶標(biāo)儀上讀取OD值。

6 結(jié)語

運(yùn)用食品中獸藥殘留檢測的鹽酸克侖特羅檢測卡檢測技術(shù)、萊克多巴胺檢測卡檢測技術(shù)、氯霉素檢測卡檢測技術(shù)、牛乳中青霉素酶活性檢測試劑盒檢測技術(shù)、鏈霉素ELISA試劑盒檢測技術(shù)，明確了其檢測適用范圍、基本原理、儀器、材料與試劑、主要操作步驟和應(yīng)注意的問題，以提升食品檢測技術(shù)水平。