桑樹病原茄科雷爾氏菌的IMSA-LAMP檢測(cè)方法獲得新進(jìn)展

桑樹青枯病作為茄科雷爾氏菌(Ralstoniasolanacearum)感染引發(fā)的一種毀滅性細(xì)菌性病害，嚴(yán)重影響到桑葉的產(chǎn)量和質(zhì)量，被國家列為植物重點(diǎn)的檢疫性病害。建立一種能對(duì)茄科雷爾氏菌進(jìn)行快速有效檢測(cè)的方法，對(duì)預(yù)防桑樹青枯病的發(fā)生和擴(kuò)散具有重要意義。國家蠶桑產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系桑樹柞樹細(xì)菌病毒病防控崗位專家、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)劉吉平教授團(tuán)隊(duì)以茄科雷爾氏菌果膠裂解酶基因(Pectate lyase gene，PL)為靶標(biāo)，首次嘗試融合新型核酸擴(kuò)增技術(shù)IMSA的引物設(shè)計(jì)策略和LAMP擴(kuò)增反應(yīng)的技術(shù)體系，并對(duì)其反應(yīng)體系和實(shí)用性操作等進(jìn)行優(yōu)化，成功建立了一種快速高效的茄科雷爾氏菌IMSA-LAMP檢測(cè)技術(shù)，研發(fā)成果發(fā)表于《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》。

崗位團(tuán)隊(duì)采集了廣東、廣西、海南等4個(gè)省份桑樹種植區(qū)的24份疑似桑樹青枯病病樣，通過傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法觀察病狀，將分離的病原菌通過全基因組測(cè)序分析鑒定獲得茄科雷爾氏菌的果膠裂解酶基因，并以該基因?yàn)榘袠?biāo)，融合IMSA引物設(shè)計(jì)策略和LAMP擴(kuò)增反應(yīng)的技術(shù)體系建立快速高效的茄科雷爾氏菌IMSA-LAMP檢測(cè)方法。應(yīng)用該技術(shù)在64.5 ℃條件下，45 min內(nèi)即可完成對(duì)陽性樣品的特異檢測(cè)，比常規(guī)PCR方法快60 min以上，反應(yīng)結(jié)果可通過熒光擴(kuò)增曲線出現(xiàn)的先后進(jìn)行快速判定；對(duì)茄科雷爾氏菌的模板DNA檢測(cè)靈敏度達(dá)200 fg/L，對(duì)應(yīng)的菌液濃度為1×102CFU/mL，比LAMP檢測(cè)方法的靈敏度高10倍左右，比常規(guī)PCR檢測(cè)法的靈敏度高100倍。應(yīng)用該技術(shù)對(duì)生產(chǎn)上收集桑樹青枯病病樣的檢出率為87.75%。

本團(tuán)隊(duì)成功建立的茄科雷爾氏菌IMSA-LAMP檢測(cè)方法具有準(zhǔn)確可靠、實(shí)用性強(qiáng)的特點(diǎn)，可用于大批量桑樹青枯病樣品的快速分子診斷，為桑樹細(xì)菌病檢測(cè)和防疫提供了新技術(shù)支持，對(duì)各種作物青枯病的快速檢測(cè)也具有重要的參考價(jià)值。