牛結(jié)核病的臨床癥狀、病理變化及診斷方法

張建軍

（烏蘭察布市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 烏蘭察布 012000）

牛結(jié)核桿菌病在世界各地均有發(fā)生，具有上千年的歷史，曾經(jīng)造成人和動(dòng)物大批死亡，1882年發(fā)現(xiàn)其致病原是結(jié)核分枝桿菌。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）報(bào)道，全球每年新增有800～1 000萬(wàn)的結(jié)核病人，導(dǎo)致死亡的約300萬(wàn)人，因此，被OIE列為B類(lèi)動(dòng)物疫病。目前，世界上發(fā)生結(jié)核病最多的國(guó)家是印度，而我國(guó)活動(dòng)性肺結(jié)核病人也有500多萬(wàn)，屬于高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，排名世界第二。

20世紀(jì)50年代，我國(guó)曾發(fā)生過(guò)牛結(jié)核病的大流行，當(dāng)時(shí)抽樣檢測(cè)其陽(yáng)性率高達(dá)36.4%，報(bào)道一出，立即受到極大關(guān)注，各部門(mén)積極采取有效措施，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期努力，使結(jié)核病陽(yáng)性率大大降低。在隨后的兩次全國(guó)對(duì)奶牛進(jìn)行流調(diào)，結(jié)果顯示牛結(jié)核病的陽(yáng)性率均在5%～6%。目前，我國(guó)的養(yǎng)牛大省發(fā)生牛結(jié)核病的概率正呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，目前均已高達(dá)9%，有些地區(qū)比例更高。因此，做好牛結(jié)核病的宣傳與了解至關(guān)重要。本文重點(diǎn)介紹了牛結(jié)核病的臨床癥狀、剖檢變化、診斷方法與防控措施，以期為廣大養(yǎng)殖戶提供理論支持。

1 病 原

結(jié)核分枝桿菌分三個(gè)型：牛型、人型和禽型。牛結(jié)核病主要由牛型結(jié)核分枝桿菌引起，也可由人型結(jié)核分枝桿菌引起。牛型結(jié)核分枝桿菌可感染人，也能使其他家畜致病。禽型結(jié)核分枝桿菌可感染牛、豬和人。人型結(jié)核分枝桿菌屬于細(xì)長(zhǎng)桿菌，有直的，有微彎的，有些有分枝，一般單獨(dú)或者多個(gè)平行排列；牛型結(jié)核分枝桿菌相比會(huì)短而粗，不均勻著色；禽型結(jié)核分枝桿菌相比會(huì)小而短，且形態(tài)不一，多變。

結(jié)核分枝桿菌最適生長(zhǎng)溫度為37～38℃，牛型結(jié)核分枝桿菌最適生長(zhǎng)pH為5.9～6.9；人型結(jié)核分枝桿菌最適生長(zhǎng)pH較高，一般為7.4～8.0；禽型結(jié)核分枝桿菌最適生長(zhǎng)pH為7.2。結(jié)核分枝桿菌常用齊-尼二氏抗酸染色，染色后較難脫色，會(huì)被染成紅色。結(jié)核分枝桿菌非常“懶惰”，生長(zhǎng)非常緩慢，需要經(jīng)半個(gè)月才能長(zhǎng)出菌落，長(zhǎng)出典型的菌落，呈現(xiàn)出粗糙型，此種菌群毒力強(qiáng)，也有變異菌株菌落，變異菌株菌落則呈光滑型，相比較毒力較粗糙型要弱。

結(jié)核分枝桿菌對(duì)自然界的抵抗力很強(qiáng)，尤其是對(duì)干燥、濕冷的抵抗力很強(qiáng)。據(jù)報(bào)道，在干燥的痰液中結(jié)核分枝桿菌能存活10個(gè)月，在土壤中7個(gè)月后仍然存活，在糞便中5個(gè)月后依然存活，在奶中90 d后依然存活，在冷藏奶油中可存活10個(gè)月，在干酪中可存活8個(gè)月。在-198℃可長(zhǎng)期存活。但面對(duì)濕熱和陽(yáng)光直射，其抵抗力大大降低，特別是陽(yáng)光直射的情況下，幾分鐘至幾小時(shí)可使之死亡。濕熱情況下，如沸水中立即死亡。常用的消毒藥如10%漂白粉、75%乙醇、氯胺、4%甲醛溶液、石碳酸等均可將其殺死。

牛分枝桿菌在細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，無(wú)內(nèi)毒素產(chǎn)生，同時(shí)也無(wú)外毒素產(chǎn)生，其毒力主要和脂質(zhì)有關(guān)，含量越高，毒力越強(qiáng)。

2 流行病學(xué)

開(kāi)放型患畜是牛結(jié)核病主要傳染源，病畜通過(guò)痰液、糞尿、乳汁和生殖器官的分泌物排出，健康動(dòng)物通過(guò)被污染的空氣、飼料、飲水經(jīng)呼吸道、消化道等途徑感染。如飼養(yǎng)環(huán)境較差，如圈舍擁擠、通風(fēng)不良、飼養(yǎng)管理較差、營(yíng)養(yǎng)不良等情況，會(huì)增加其患病率。此外，還可以通過(guò)直接接觸、飲用牛奶等途徑而傳染給人，威脅人體健康。此病全年各季節(jié)均可發(fā)病。

據(jù)報(bào)道，哺乳動(dòng)物中約有50多種、禽類(lèi)中約有20多種可患結(jié)核病[1]，其中包括牛、豬、鹿、猴、馬、綿羊、山羊、家禽等。

3 臨床癥狀

牛結(jié)核病的潛伏期長(zhǎng)短不一，有時(shí)達(dá)數(shù)月以上甚至數(shù)年之久。通常病初無(wú)明顯癥狀，很難發(fā)現(xiàn)，當(dāng)病程逐漸延長(zhǎng)，病癥才逐漸顯露。主要臨床癥狀為咳嗽、消瘦、呼吸困難，體溫?zé)o變化。人型分枝桿菌和禽型分枝桿菌對(duì)牛毒力較弱，多為“無(wú)病灶反應(yīng)?！?，此種牛極少有傳染性。

結(jié)核分枝桿菌侵入機(jī)體后，由于其毒力和動(dòng)物機(jī)體抵抗力情況不同，以及發(fā)病部位不同，癥狀也不同。牛結(jié)核病多侵害肺臟、乳房、腸道、生殖器、腦和淋巴結(jié)等。

肺結(jié)核：病牛病初無(wú)明顯癥狀，但是易疲勞，常發(fā)生短促干咳，漸變?yōu)闈裥钥人?，?dāng)患病牛吸入冷空氣或者含有較多灰塵的空氣時(shí)，更容易發(fā)生咳嗽。聽(tīng)診肺部區(qū)域會(huì)有啰音，如若胸膜發(fā)生結(jié)核病變，可聽(tīng)到摩擦音，又稱(chēng)之為“珍珠病”。隨著病情進(jìn)一步加重，咳嗽頻次增加，并表現(xiàn)出明顯的痛苦癥狀，呼吸次數(shù)逐漸增加，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣喘現(xiàn)象。隨著病情的發(fā)展，病牛會(huì)日漸消瘦且伴有貧血。

淋巴結(jié)核：對(duì)于淋巴結(jié)核，均會(huì)發(fā)生在發(fā)病部位臨近淋巴結(jié)。常發(fā)部位有肩前、腹前、腹股溝、頜下、咽及頸部等，淋巴結(jié)腫大，但無(wú)熱感，觸之無(wú)痛。如果縱隔淋巴結(jié)受到侵害，則會(huì)引起慢性瘤胃臌氣。如果病情無(wú)法控制，極易發(fā)生粟粒性結(jié)核，即為全身性淋巴結(jié)結(jié)核。

乳房結(jié)核：乳房淋巴結(jié)腫大，觸之無(wú)熱痛。初期乳汁無(wú)明顯變化，隨病情發(fā)展乳汁日漸稀薄，泌乳量逐漸減少甚至無(wú)乳，若發(fā)生混合感染乳汁中會(huì)有膿塊。

腸結(jié)核：犢牛多發(fā)，常表現(xiàn)消化不良、食欲不振、便秘與下痢交替出現(xiàn)，動(dòng)物快速消瘦。

生殖器結(jié)核：生殖器結(jié)核多引起性機(jī)能紊亂，母牛發(fā)情頻繁，性欲增強(qiáng)。對(duì)于妊娠母畜，常引發(fā)流產(chǎn)。對(duì)于公牛，常導(dǎo)致附睪腫大，陰莖前部發(fā)生結(jié)節(jié)、糜爛等。

腦結(jié)核：表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如癲癇、運(yùn)動(dòng)障礙等。

4 病理變化

牛發(fā)生結(jié)核病，在發(fā)病部位多形成突起、散在白色或灰白色的、粟粒大至豌豆大、半透明且堅(jiān)硬的結(jié)核結(jié)節(jié)。切面干酪化壞死、鈣化，切開(kāi)有沙礫感。乳房結(jié)核多見(jiàn)大小不等的病灶，內(nèi)有干酪樣物質(zhì)。胸腹膜發(fā)生結(jié)核，會(huì)形成密集結(jié)節(jié)，像極了散落的珍珠，故又被稱(chēng)為“珍珠病”。腸道黏膜會(huì)形成潰瘍以及大小不等的結(jié)核結(jié)節(jié)。子宮黏膜下組織或肌層組織內(nèi)也會(huì)發(fā)生結(jié)節(jié)、潰瘍，且子宮腔含有油樣膿液，卵巢腫大，輸卵管變硬[1]。

5 診斷

因本病無(wú)特異癥狀，僅憑借臨床檢查很難確診。若動(dòng)物出現(xiàn)進(jìn)行性消瘦、咳嗽、慢性乳房炎、淋巴結(jié)慢性腫大、頑固性腹瀉等癥狀時(shí)，結(jié)合以上臨床癥狀，根據(jù)流行病學(xué)、病理剖檢變化可做出初步診斷，確診則需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)完成。目前國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室大多采用細(xì)菌學(xué)方法、分子生物學(xué)方法以及免疫學(xué)方法確診。

5.1 細(xì)菌學(xué)檢查法

在臨床上，對(duì)于開(kāi)放性結(jié)核病，最有診斷意義的方法要數(shù)細(xì)菌學(xué)檢查法，此法雖為傳統(tǒng)方法，但是臨床意義重大。但由于工序繁多、耗時(shí)較長(zhǎng)、檢測(cè)率較低，已被取代。采集病料，例如病變部位、痰液、糞便、乳汁及其他分泌物，不同的病料需要采用不同的處理方法，如采取病牛痰液，首先加入2倍安替佛尼液，然后置于溫箱1～2 h，離心取沉淀，再用3%醋酸溶液中和沉淀物，用純化水反復(fù)洗滌；對(duì)于病牛糞便，稱(chēng)取30 g，加入15 mL安替佛尼液和55 mL純化水，靜置2～3 h，離心沉淀30 min[2]。取沉淀用棉拭子蘸取，涂片、鏡檢，可見(jiàn)外形呈棍狀，沒(méi)有芽孢和莢膜。將病原體分離培養(yǎng)并接種于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行感染試驗(yàn)[3]。

5.2 分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)診斷方法具有快速、簡(jiǎn)單、分辨率高等特點(diǎn)，不但可以鑒別診斷，還可以按照分枝桿菌種系進(jìn)化的關(guān)系確定精確的種系?，F(xiàn)行的特異性分子生物學(xué)診斷方法有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、基因芯片、DNA探針檢測(cè)等。目前，應(yīng)用比較多的有NDA探針、PCR檢測(cè)。

5.2.1 DNA探針檢測(cè)

DNA探針?lè)▽儆诳焖贆z測(cè)法，不但可以檢測(cè)病原，還可以檢測(cè)其菌株。檢測(cè)操作簡(jiǎn)單，樣品不需特殊處理，只需將樣品DNA與已知的標(biāo)記好的DNA片段探針進(jìn)行分子雜交，檢測(cè)樣品DNA中已經(jīng)標(biāo)記好的基因序列即可[3]。

5.2.2 PCR檢測(cè)

PCR檢測(cè)法是最近幾年應(yīng)用比較多的方法，此法需要根據(jù)基因設(shè)計(jì)特定引物，擴(kuò)增目的片段，對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行檢測(cè)，與結(jié)核病原菌基因組對(duì)比從而確診。PCR檢測(cè)快速，正確率高，不足之處是對(duì)試驗(yàn)儀器精密度要求高，影響因素較多，檢測(cè)結(jié)果的可靠性受外界影響大[3]。

5.3 免疫學(xué)方法

5.3.1 結(jié)核菌素試驗(yàn)

結(jié)核菌素試驗(yàn)法是最具現(xiàn)實(shí)意義的方法，也是OIE推薦的檢測(cè)方法。結(jié)核菌素試驗(yàn)包括兩種診斷法，分別是提純結(jié)核菌素（PPD）和老結(jié)核菌素（OT）。大多數(shù)檢測(cè)方法用的是PPD試驗(yàn)[4-5]。

OT：根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行《奶牛結(jié)核病檢疫規(guī)程》規(guī)定，在臨床上需要采用結(jié)核菌素皮內(nèi)注射法和點(diǎn)眼法兩種方法同時(shí)進(jìn)行，如若兩種方法中的任意一種顯示陽(yáng)性，即判定該牛為結(jié)核菌素陽(yáng)性[4-5]。

PPD：診斷過(guò)程中，用純化水將牛分枝桿菌提純菌素稀釋成10萬(wàn)IU·mL-1，在牛頸部中上1/3處，皮內(nèi)注射0.1 mL[4-5]。

5.3.2 間接酶聯(lián)免疫吸附法

間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)利用抗原與抗體的特異性反應(yīng)，使其能夠快速診斷，整個(gè)試驗(yàn)用時(shí)少，特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，目前應(yīng)用較廣。但是由于此法對(duì)抗原性較弱的病原菌在共同的抗原決定簇作用下，檢出效果較差，限制了其應(yīng)用[3]。

6 防控與治療

對(duì)于防控牛結(jié)核病，主要采取綜合防控。首先，防止病畜傳入。其次，如群體中有患病動(dòng)物，則需凈化牛群。第三，培育健康牛群。無(wú)結(jié)核病動(dòng)物群稱(chēng)為健康牛群，對(duì)于此類(lèi)牛群，平時(shí)應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，特別是平時(shí)的防疫、檢疫和消毒措施，防止牛結(jié)核病的傳入。健康牛群每年的春、秋兩季定期進(jìn)行結(jié)核菌素檢疫，并結(jié)合臨床檢查進(jìn)行分析[2-4]。

一旦檢測(cè)到陽(yáng)性，需要立即采取措施，對(duì)整個(gè)牛群按污染牛群對(duì)待。對(duì)于結(jié)核菌素反應(yīng)陽(yáng)性牛群，應(yīng)按照規(guī)定定期檢查，一旦發(fā)現(xiàn)病牛立即淘汰，從而消滅傳染源。對(duì)于病牛所產(chǎn)犢牛，出生后3～5 d可以飼喂初乳，3～5 d后，立即由無(wú)病的母牛，即代養(yǎng)母牛供養(yǎng)或人工喂養(yǎng)。犢牛在出生后需要做3次檢疫，分別是1月齡、3～4月齡、6月齡三個(gè)階段，一旦檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，必須進(jìn)行及時(shí)淘汰[2,4]。如果3次檢疫結(jié)果均呈陰性，且無(wú)任何可疑臨床癥狀，可定為假定健康牛。假定健康向健康過(guò)渡的牛，應(yīng)每隔3個(gè)月檢疫一次，檢測(cè)一年，直到無(wú)陽(yáng)性結(jié)果為止。然后在接下來(lái)的半年內(nèi)連續(xù)進(jìn)行3次檢疫[2-4]。如果3次檢測(cè)結(jié)果均為陰性則可稱(chēng)為健康牛群[2,4]。

對(duì)于患有牛結(jié)核病動(dòng)物的治療，目前應(yīng)用較多的是鏈霉素、異煙胼和對(duì)氨水楊酸鈉，但治療起來(lái)療程較長(zhǎng)，醫(yī)療費(fèi)用大，且很難根治，只能有所改善，故目前國(guó)內(nèi)外均采取加強(qiáng)檢疫、隔離、及時(shí)淘汰、防止疾病傳入的方式[6]。

7 結(jié)語(yǔ)

牛的結(jié)核病有著重要的公共衛(wèi)生價(jià)值，對(duì)牛結(jié)核病的臨床癥狀、剖檢變化和臨床診斷及防治方法的研究對(duì)養(yǎng)殖業(yè)有重大影響，各專(zhuān)業(yè)學(xué)者需要積極研究，給養(yǎng)殖業(yè)提供一個(gè)更好的養(yǎng)殖環(huán)境，從而促進(jìn)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。