HLA-DRA rs3129882多態(tài)性與帕金森病關(guān)系的meta分析*

曹美群，馮毅菲，蔣 屏，范大華

(1.廣東省深圳市第二人民醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)研究所 518035；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生學(xué)院，南寧 530200；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科，長(zhǎng)沙 410007；4.深圳金普邁生物科技有限公司，廣東 518101)

帕金森病(PD)是僅次于阿爾茨海默病的第二大神經(jīng)退行性疾病，全世界有600多萬人受到影響[1]。目前，其病因仍不十分清楚，但越來越多的證據(jù)表明，多個(gè)基因與PD發(fā)病有關(guān)[1-2]。最近一項(xiàng)研究表明，高加索人PD與Ⅱ類主要組織相容性復(fù)合體DRα(HLA-DRA)內(nèi)含子1上的一個(gè)非編碼區(qū)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn) rs3129882關(guān)聯(lián)性很高[3]。然而，后續(xù)系列研究試圖驗(yàn)證PD與HLA-DRA rs3129882的遺傳關(guān)聯(lián)卻得到了不一致的結(jié)果[4-6]。為探究以上研究結(jié)論矛盾的原因，本研究通過對(duì)15篇文獻(xiàn)包括28項(xiàng)獨(dú)立研究進(jìn)行meta分析，評(píng)估了HLA-DRA rs3129882與PD的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

在Medline數(shù)據(jù)庫(kù)和Google Scholar檢索，將研究HLA-DRA rs3129882多態(tài)性與PD關(guān)系的英文文獻(xiàn)作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)評(píng)估rs3129882多態(tài)性與PD的關(guān)聯(lián)性；(2)代表普通人群的隊(duì)列研究或診斷為PD的病例對(duì)照研究；(3)提供優(yōu)勢(shì)比(OR)及其95%可信區(qū)間(95%CI)或提供足夠的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)非英文形式發(fā)表的文獻(xiàn)；(2)綜述、評(píng)論、社論、通訊、meta分析和摘要；(3)重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)(當(dāng)兩個(gè)或更多的研究使用了相同的樣本或大部分重疊的樣本以報(bào)告關(guān)聯(lián)結(jié)果時(shí)只選擇樣本量最大的研究)。

1.2 方法

1.2.1文獻(xiàn)檢索

在Medline數(shù)據(jù)庫(kù)和Google Scholar檢索HLA-DRA rs3129882多態(tài)性與PD關(guān)系的相關(guān)研究文獻(xiàn)。關(guān)鍵詞為帕金森病、人類白細(xì)胞抗原或HLA。檢索時(shí)間為建庫(kù)至2020年12月，同時(shí)追溯檢索原始文章和綜述的參考文獻(xiàn)使文獻(xiàn)檢索盡可能詳盡。

1.2.2資料提取

從符合條件的研究中提取以下信息：(1)第一作者姓名；(2)發(fā)表年份；(3)人群和種族；(4)PD患者組和對(duì)照組rs3129882基因多態(tài)性的次要/主要等位基因；(5)PD病例和對(duì)照者數(shù)量；(6)基因分型平臺(tái)；(7)OR和95%CI，如報(bào)道了潛在混雜因素的調(diào)整，提取調(diào)整后的OR和95%CI，在未報(bào)道調(diào)整OR或95%CI的情況下用報(bào)道的基因型/等位基因數(shù)據(jù)計(jì)算原始OR和95%CI。

1.2.3文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

采用畢卡斯?fàn)?渥太華量表(NOS量表)評(píng)價(jià)文獻(xiàn)質(zhì)量,病例及對(duì)照的選擇計(jì)4分(包括病例的定義是否充分、病例的代表性、對(duì)照的選擇和對(duì)照的定義)、基于設(shè)計(jì)或分析所得的病例與對(duì)照的可比性計(jì)2分、暴露計(jì)3分(包括暴露的確定、病例及對(duì)照的暴露是否采用了相同的確定方法和無應(yīng)答率)共3個(gè)大項(xiàng)9個(gè)小項(xiàng)，滿分為9分，≥5分為高質(zhì)量文獻(xiàn)[7]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Review Manager(Revman)5.3、Stata11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各納入研究異質(zhì)性檢驗(yàn)采用CochraneQ檢驗(yàn)，計(jì)算I2值，I2為0～<25%、25%～<50%、50%～<75%、75%～100%分別表示低、中、高、極不均質(zhì)性。若研究間無統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性(I2≤50%，P≥0.10)，選擇固定效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析[8-9]；若存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性(I2>50%，P<0.10)則采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析。使用逆方差法計(jì)算合并OR。敏感性分析通過一一剔除文獻(xiàn)重新進(jìn)行meta 分析，用漏斗圖、Begg’s和Egger’s檢驗(yàn)評(píng)估潛在的發(fā)表偏倚[10]。

2 結(jié) 果

2.1 文獻(xiàn)篩選流程

在Medline上搜索得到171篇文獻(xiàn)，其中12篇符合納入標(biāo)準(zhǔn)；手動(dòng)檢索已納入文獻(xiàn)所引用的參考文獻(xiàn)，補(bǔ)充納入2篇文獻(xiàn)[6，11]；檢索Google Scholar，補(bǔ)充納入1篇文章[12]，共納入文獻(xiàn)15篇[5,11-24]，包括28項(xiàng)獨(dú)立研究。文獻(xiàn)篩選流程見圖1。納入文獻(xiàn)基本特征見表1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程

表1 納入文獻(xiàn)基本特征

2.2 meta分析結(jié)果

15篇文獻(xiàn)包括28項(xiàng)獨(dú)立研究(21項(xiàng)高加索人群研究[5,11-17,23]和7項(xiàng)亞洲人群研究[18-24])納入meta分析，共74 715名受試者(24 269名PD患者和50 446名健康對(duì)照者)，其中63 778名受試者(19 509名PD患者和44 269名健康對(duì)照者)為高加索人，10 937名受試者(4 760名PD患者和6 177名健康對(duì)照者)為亞洲人。15篇文獻(xiàn)[5,11-24]為混合人群的研究，各研究間存在高度統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性(I2=56%，P=0.000 2),采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析?；旌先巳簉s3129882變異與PD無關(guān)(OR=1.04,95%CI：0.99～1.09，P=0.120 0)。7篇文獻(xiàn)[18-24]為亞洲人群的研究，各研究間存在高度統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性(I2=68%，P=0.004 0)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析。亞洲人群rs3129882變異與PD無關(guān)(OR=0.99，95%CI：0.87～1.12，P=0.820 0)。9篇文獻(xiàn)[5,11-17,23]為高加索人群的研究，各研究間無統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性(I2=46%，P=0.010 0)，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析。高加索人群rs3129882變異與PD明顯相關(guān)(OR=1.04,95%CI：1.01～1.08，P=0.005 0)。見表2。

表2 rs3129882多態(tài)性與PD關(guān)系的亞組分析

2.3 敏感度分析與發(fā)表偏倚

通過依次剔除高加索人群或亞洲人群中的研究進(jìn)行敏感性分析發(fā)現(xiàn)結(jié)果和結(jié)論一致。使用Revman創(chuàng)建漏斗圖評(píng)估兩個(gè)亞組研究的發(fā)表偏倚風(fēng)險(xiǎn)見圖2。漏斗圖沒有明顯的不對(duì)稱性，高加索人群的Begg’s檢驗(yàn)P=0.291，Egger’s檢驗(yàn)P=0.186，亞洲人群的Begg’s檢驗(yàn)P=0.230，Egger’s檢驗(yàn)P=0.065。

圖2 評(píng)價(jià)納入研究發(fā)表偏倚的漏斗圖

3 討 論

研究表明，很多基因與PD的發(fā)病有關(guān)，目前，已經(jīng)在家族性PD中發(fā)現(xiàn)了18個(gè)相關(guān)位點(diǎn)，在散發(fā)性PD中也發(fā)現(xiàn)了多個(gè)相關(guān)位點(diǎn)[1-2]。最近一項(xiàng)對(duì)美國(guó)歐洲高加索人的研究發(fā)現(xiàn)，HLA 6號(hào)染色體短臂2區(qū)1帶3亞帶1次亞帶(6p21.3)區(qū)域與PD相關(guān)，且與HLA-DRA rs3129882關(guān)聯(lián)性最高[3]。然而，后續(xù)系列PD與HLA-DRA rs3129882的遺傳關(guān)聯(lián)研究卻得到了不一致的結(jié)果[4-6]。DO等[18]在高加索人群中進(jìn)行的一項(xiàng)大規(guī)模全基因組關(guān)聯(lián)，研究結(jié)果顯示，rs3129882與PD存在關(guān)聯(lián)，而其他樣本量較小的高加索人研究卻沒有發(fā)現(xiàn)這種關(guān)聯(lián)[19-21]。PUSCHMANN等[22]在愛爾蘭和波蘭混合人群中研究，結(jié)果甚至顯示rs3129882的“G”等位基因與PD呈負(fù)相關(guān)。同時(shí)亞洲人群的幾項(xiàng)rs3129882與PD關(guān)聯(lián)的病例對(duì)照研究結(jié)果也不一致。中國(guó)大陸人群的兩項(xiàng)研究顯示，rs3129882是PD的易感基因[23-24]，而中國(guó)臺(tái)灣人群中的兩項(xiàng)研究卻未顯示出這樣的關(guān)聯(lián)[4，8]，甚至還有研究發(fā)現(xiàn)，rs3129882多態(tài)性與新加坡和馬來西亞華裔人群患PD的風(fēng)險(xiǎn)降低有關(guān)[5]。最近一項(xiàng)包括中國(guó)、新加坡、韓國(guó)和日本等地區(qū)的亞洲混合人群的大規(guī)模病例對(duì)照研究也未能顯示出這種關(guān)聯(lián)[6]。

本研究對(duì)15篇文獻(xiàn)包括28項(xiàng)獨(dú)立研究進(jìn)行了meta分析，以評(píng)估HLA-DRA rs3129882在PD發(fā)病中的作用，結(jié)果顯示，在混合人群或亞洲人群樣本中未發(fā)現(xiàn)這種關(guān)聯(lián)，但在高加索人中rs3129882與PD明顯相關(guān)。這種在高加索人群和亞洲人群中rs3129882與PD的關(guān)聯(lián)不一致很可能與不同種族和地理群體之間基因多態(tài)性的遺傳變異(也稱為群體亞結(jié)構(gòu))有關(guān)，在同一種族但不同地域人群中甚至存在重要的亞結(jié)構(gòu)[3]。HAMZA等[3]在高加索人群中觀察到，rs3129882風(fēng)險(xiǎn)等位基因的頻率梯度范圍在北歐受試者的0.35至南歐受試者的0.46之間，同樣，在東亞華人人群中也有顯著變動(dòng)，其水平從中國(guó)大陸的0.28升高至中國(guó)臺(tái)灣的0.37[4-5,8,23-24]。此外，值得注意的是，rs3129882的次要等位基因從高加索人的鳥嘌呤“G”轉(zhuǎn)換為亞洲人的腺嘌呤“A”[3，18，23-24]。因此，如不考慮混合地域來源樣本的種群亞結(jié)構(gòu)，rs3129882與PD無關(guān)，甚至是反向關(guān)聯(lián)[5]。未來對(duì)HLA區(qū)域的遺傳變異和PD易感性研究應(yīng)該按種族和地理來源進(jìn)行仔細(xì)分層。

本研究雖已證實(shí)rs3129882與高加索人PD的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)聯(lián)，但其潛在的分子機(jī)制仍有待于闡明。有研究表明，rs3129882位點(diǎn)突變會(huì)影響HLA-DR和HLA-DQ的基因轉(zhuǎn)錄和選擇性剪接，最終影響HLA-DRA和HLA-DRB抗原表達(dá)水平[10]。另有研究表明，自發(fā)性PD或神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)誘導(dǎo)的PD大腦HLA-DR抗原表達(dá)均顯著上調(diào)[25]，長(zhǎng)期使用非甾體抗炎藥可顯著降低PD的風(fēng)險(xiǎn)[26-27]。表明神經(jīng)炎癥在PD發(fā)病機(jī)制中具有重要作用[28]。因此，本研究發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)HLA-DRA rs3129882與高加索人PD發(fā)病相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了免疫系統(tǒng)在PD發(fā)病中的作用，為高加索人PD的治療提供了新靶點(diǎn)。

但本研究仍存在局限性：(1)僅使用全基因組關(guān)聯(lián)研究和meta分析所采用的可加性遺傳模型[29]，沒有使用顯性模型或隱性模型進(jìn)行分析，無法獲得所有研究中3種基因型的確切數(shù)量。今后應(yīng)更多地關(guān)注顯性和隱性模型下不同種族和地理來源人群中HLA-DRA rs3129882與PD的相關(guān)性。(2)僅關(guān)注了HLA-DRA rs3129882一個(gè)基因多態(tài)性，越來越多的證據(jù)表明，在HLA區(qū)域內(nèi)存在多個(gè)與PD相關(guān)的變異[30]。今后應(yīng)對(duì)HLA區(qū)域內(nèi)受人群亞結(jié)構(gòu)調(diào)整的PD相關(guān)變異進(jìn)行全面系統(tǒng)分析,將有助于進(jìn)一步解釋關(guān)聯(lián)研究結(jié)果的差異。