大白沙鵝鴨疫里氏桿菌病的診斷

梁 琴，梁自蕓，李 媛

（廣西北海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西 北海 536000）

2020年7月合浦縣石康鎮(zhèn)陳某一養(yǎng)鵝場(chǎng)發(fā)病，16日齡大白沙鵝，存欄8 000 只，11 日齡發(fā)病，每天死十幾只，至16日齡已死亡近百只，未免疫禽流感。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷，確定為鴨疫里氏桿菌病，經(jīng)藥敏試驗(yàn)，首選大觀霉素和氟苯尼考，其次左氧氟沙星和克林霉素；使用時(shí)考慮抗生素的劑量、療程和使用方法，采用單一方式輪換給藥，效果顯著，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 臨床癥狀

嚴(yán)重拉稀，喘氣蹲地不動(dòng)，拉黃白色或黃綠色水樣帶氣泡稀糞；腳軟難以站穩(wěn)，站立時(shí)搖頭晃腦，頭頸歪斜轉(zhuǎn)圈；倒退，仰翻臥地，兩腿呈劃水狀,不易爬起；縮頸嗜睡，頭歪向一側(cè)呈瀕死狀態(tài)，3 d內(nèi)死亡；用過(guò)強(qiáng)效西林、安普霉素和環(huán)丙沙星無(wú)效。

2 解剖病變

解剖4 只鵝：肺出血（2/4），心有出血點(diǎn)（1/4），心包混濁（2/4），肝有白膜（3/4），腎腫（4/4）只，胰出血（2/4），直腸、小腸和十二指腸腸壁出血（1/4），腦、脾和氣囊未見(jiàn)病變。

3 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)

3.1 病料涂片染色鏡檢：

取心、肝和脾分別涂片，革蘭氏染色，鏡檢，未見(jiàn)病原菌。

3.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定

無(wú)菌操作，分別取病料（心、肝、脾和腦）接種巧克力平板、麥康凱平板和SS 平板，一組燭缸外需氧、另一組主缸內(nèi)厭氧37 ℃24 h培養(yǎng)，同時(shí)接種正常死亡的鵝腦對(duì)照，結(jié)果只有燭缸內(nèi)接種腦的巧克力培養(yǎng)基劃線處長(zhǎng)出細(xì)小、凸起、邊緣光滑、透明發(fā)亮露珠狀菌落，生長(zhǎng)緩慢。挑取單個(gè)菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，見(jiàn)紅色兩極著色細(xì)小短桿菌；挑取另一相同菌落做純培養(yǎng)。挑取純培養(yǎng)物在麥康凱平板和SS平板上劃線，分別置需氧和厭氧中37 ℃培養(yǎng)24 h，均無(wú)菌落，說(shuō)明純培養(yǎng)物不是大腸桿菌和沙門氏菌。無(wú)菌操作，用生理鹽水洗下純培養(yǎng)菌苔菌落，用接種針蘸取菌液接生化管，置燭缸37 ℃厭氧培養(yǎng)24～72 h，結(jié)果：不發(fā)酵糖，不產(chǎn)吲哚和硫化氫，硝酸鹽還原和西檬氏枸櫞酸鹽利用陰性，明膠液化和產(chǎn)尿素為不定，氧化酶、過(guò)氧化氫酶以及磷酸酶陽(yáng)性，七葉苷水解酶、透明質(zhì)酸梅和硫酸軟膏素酶陰性；以分離株的核酸為模板，用擴(kuò)增16 s rRNA編碼基因的通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將長(zhǎng)約1.5 kb的擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序后，與RA參考菌株的16s rRNA編碼基因序列進(jìn)行比較，序列相似性在99%以上；根據(jù)以上結(jié)果，確定為鴨疫里氏桿菌。

3.3 藥敏試驗(yàn)

藥敏紙片購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司。無(wú)菌操作，用一次性注射器吸取巧克力平板上洗下的純培養(yǎng)菌液，分別注入4個(gè)TSA平板中；如果培養(yǎng)基較干，靜置片刻，待稍吸收，吸取多余菌液，貼藥敏紙片，做好標(biāo)記。20 種藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果：抑菌圈直徑20 mm以上的有大觀霉素和氟苯尼考；抑菌圈直徑15～20 mm的有左氧氟沙星和克林霉素；其他藥物（米諾環(huán)素、林可霉素、羅紅霉素、慶大霉素、諾氟沙星、復(fù)方新諾明、甲氧芐啶素、丁胺卡那、紅霉素、新霉素、桿菌肽、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、多西環(huán)素、阿莫西林、頭孢氨芐）無(wú)抑菌圈。綜合以上結(jié)果，首選大觀霉素和氟苯尼考；其次左氧氟沙星和克林霉素；采用單一方式輪換給藥，避免耐藥性，效果顯著。

4 防治

通過(guò)改善飼養(yǎng)管理和鵝舍及運(yùn)動(dòng)場(chǎng)環(huán)境衛(wèi)生是最重要的預(yù)防措施。應(yīng)經(jīng)常清掃地面并更換墊料，消除地面的尖銳物和鐵絲等，防止造成鵝腳部受到損傷；定期清洗料槽和飲水器，消毒并干燥，保證良好的衛(wèi)生條件。

育雛期間要保證良好的溫度和通風(fēng)條件，適時(shí)調(diào)整飼養(yǎng)密度，避免過(guò)度擁擠。鵝舍要保證足夠的通風(fēng)，避免舍內(nèi)氨氣等有害氣體的蓄積對(duì)呼吸道黏膜的刺激和傷害。

保證雛鵝飼料的質(zhì)量安全，全程飼喂與日齡相適配的營(yíng)養(yǎng)均衡的全價(jià)飼料，注意補(bǔ)充維生素和微量元素等，盡量減少因營(yíng)養(yǎng)不良或其他應(yīng)激因素造成機(jī)體免疫力降低而發(fā)病。

藥物預(yù)防仍然是防控鴨疫里氏桿菌病的一個(gè)主要措施，由于抗菌素廣泛頻繁地使用，鴨疫里氏桿菌對(duì)藥物的耐藥性越來(lái)越多，效果越來(lái)越差，需及時(shí)對(duì)癥篩選高敏藥物。使用時(shí)為避免超量或?yàn)E用抗生素，應(yīng)按照說(shuō)明書給藥，每個(gè)療程在4 d以上，采用單一或者聯(lián)合方式輪換方式給藥。

5 體會(huì)和討論

該群鵝發(fā)病于不易發(fā)病的夏季，但發(fā)病于最易感日齡，解剖病變不典型，發(fā)病率不高，無(wú)典型的“三周炎”病變，提示臨床診斷仍需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)；因無(wú)與相應(yīng)血清型對(duì)應(yīng)的疫苗，當(dāng)日發(fā)病即死，提示需及時(shí)做藥敏試驗(yàn)，篩選高敏藥物，盡早預(yù)防的重要性。

根據(jù)筆者多年經(jīng)驗(yàn)，病料（心肝脾）直接涂片，革蘭氏染色鏡檢，幾乎看不見(jiàn)與純培養(yǎng)相似的鴨疫里氏桿菌；未見(jiàn)兩極著色細(xì)小桿菌，不可排除鴨疫里氏桿菌的可能性，結(jié)合臨床癥狀和解剖病變，需接種巧克力培養(yǎng)基或TSA培養(yǎng)基，厭氧培養(yǎng)24～48 h予以確定。根據(jù)筆者多年經(jīng)驗(yàn)，挑取心肝脾在培養(yǎng)基上劃線，分離成功率很低，很容易污染，大多長(zhǎng)出2 個(gè)以上菌落且難以區(qū)別，難以純化培養(yǎng)，降低工作效率。從腦分離成功率很高，通常只長(zhǎng)出一種菌落，更易分離純化。感覺(jué)上，與鴨相比，鵝的鴨疫里氏桿菌生長(zhǎng)較慢。

近年來(lái)的研究表明，我國(guó)大部分地區(qū)鴨疫里默氏菌分離株均有不同程度的耐藥性，耐藥譜介于5～13種之間（該病例耐藥16種），可見(jiàn)鴨疫里默氏菌的耐藥性已經(jīng)變得越來(lái)越普遍。

綜上所述，鵝的鴨疫里氏桿菌對(duì)鵝養(yǎng)殖業(yè)影響較大，一旦發(fā)生感染，不但給養(yǎng)殖戶帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失，還會(huì)脅迫到整個(gè)地區(qū)禽業(yè)養(yǎng)殖的健康發(fā)展。因此各動(dòng)物疫病防控部門需加強(qiáng)鴨疫里氏桿菌相關(guān)知識(shí)的宣傳教育，帶動(dòng)當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶對(duì)鴨疫里氏桿菌疫病的防控，從而優(yōu)化養(yǎng)殖質(zhì)量，促進(jìn)禽類養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。