七葉一枝花種子引發(fā)技術(shù)研究與應用進展

孫 琴 楊樹文 鄭 杰 周鈺垚

（懷化職業(yè)技術(shù)學院，湖南 懷化 418000）

七葉一枝花（Paris polyphylla Smith var.chinensis）是百合科草本植物，為多年生植株，其入藥部位為根莖，且其野生資源逐漸匱乏，屬于瀕危植物。作為中國特有的藥用植物，其藥用歷史長，可以起到鎮(zhèn)痛、止血、鎮(zhèn)靜、抗腫瘤和調(diào)節(jié)身體的免疫等一系列作用，在消炎、咳嗽等引起疾病的治療上，效果非常理想，同時對于人體內(nèi)發(fā)生的炎癥以及毒蛇的咬傷等現(xiàn)象都有較為突出的療效。七葉一枝花在應用上范圍非常廣泛，由于其藥用價值較高，諸多研究者對其進行了較為深入的研究，隨著七葉一枝花的藥用價值逐漸提升，被利用的范圍不斷擴大，在醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)中利用率不斷提升，且市場中的需求量持續(xù)增加。從七葉一枝花的利用形式來看，既可以采取傳統(tǒng)的飲片方式來利用，還能夠以其為主，制成成品藥進入消費市場，例如藥品市場中常見的云南白藥、抗病毒顆粒等。

1.七葉一枝花概述

七葉一枝花是多葉重樓的變種之一，是重樓屬的側(cè)膜亞屬，是單子葉植物，具有單子葉植物的基本特征，是多年生的草本植物，為根狀莖，直立單出，葉片為全緣形，有5-8片葉在莖的頂部排成一輪，在葉輪的中央生一朵花，花梗呈直立狀，花內(nèi)外輪呼聲花瓣及花萼，顏色為黃色或者黃綠色，化藥為基部著生，子房接近球形，茹果球形，其種子內(nèi)有紅色的肉質(zhì)假種皮，種子數(shù)量由數(shù)枚到多枚，花期為5-7月，果期為8-10月。

七葉一枝花植株的完整生長周期時間較長，且生長過程中對于外界的自然環(huán)境要求極高，目前藥用七葉一枝花供應的主要來源是依靠野生的資源，而隨著長時間的過度開采，其資源不斷枯竭，供需逐漸失衡。七葉一枝花主要分布于四川、福建以及云貴地區(qū)，總共有19種，基本都可以作為藥材被利用。在市場中其需求量持續(xù)擴大，但是其具體供應情況越來越緊張，目前的資源不斷遭受濫挖濫采，且生長環(huán)境遭受不同程度的破壞。

七葉一枝花的種源之間的形狀差異相對較大，但其在形態(tài)學上與其他的重樓屬植物在植物形狀上較為接近，不易區(qū)分，由于資源持續(xù)短缺，導致市場上供不應求，收購入藥過程出現(xiàn)假藥、偽劣藥品摻雜情況，讓其來源混亂情況不斷出現(xiàn)。在植株的形態(tài)上來鑒別是植物最快速、直觀的鑒別方法，但是在七葉一枝花的生長過程當中，其植株的形狀變化較大，其中包括葉片形態(tài)、數(shù)量以及萼片的數(shù)量等，甚至可能出現(xiàn)地上部分只有一片葉的情況。七葉一枝花的整個植株高度一般為35-100cm，莖稈的具體粗細不統(tǒng)一，多為0.5-3cm，形態(tài)細長，抗倒伏能力弱，時常表現(xiàn)出莖稈彎曲甚至折斷的情況，容易影響到種子的整體產(chǎn)量以及成熟度。

2.七葉一枝花的藥理及成分研究現(xiàn)狀

2.1 藥理研究現(xiàn)狀

有研究發(fā)現(xiàn)，七葉一枝花的提取物有較多的藥理作用，且從其中分離出來的一系列單體也有較為明顯的藥性，在臨床上最常用來治療皮炎、子宮出血、外科方面的炎癥以及腫瘤等，同時還可以用來調(diào)節(jié)免疫以及止血的功效。在對七葉一枝花總皂苷作用Hep G2細胞抗腫瘤的相關(guān)研究當發(fā)現(xiàn)，七葉一枝花的總皂苷可以調(diào)節(jié)蛋白的表達量產(chǎn)生藥理作用，同時對Hep G2肝癌細胞能夠產(chǎn)生抑制作用；Raviku-mar等發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅵ和Ⅰ都具有比較高的細胞毒性；有研究發(fā)現(xiàn)總甾體皂苷溶液能夠在大鼠的體外誘導血液中血小板的凝集；而高濃度皂苷H溶液能夠起到誘導血小板發(fā)生聚集反應的作用；同時有報道指出，七葉一枝花皂苷具有促進血小板生產(chǎn)的功效，還可以參與發(fā)炎組織的修復，能夠增強供試小鼠的免疫能力。

2.2 化學成分研究現(xiàn)狀

對七葉一枝花植株的化學成分研究開始于1962年，國內(nèi)外的研究包括黃酮類、昆蟲變態(tài)激素、三萜類等，其數(shù)量超過了200種，其中研究較多的為皂苷類化學成分，有44種皂苷被分離和鑒定；而在七葉一枝花的研究當中，含有人體所需的多種氨基酸；且對其進行無機元素測定分析研究中，表明七葉一枝花具有多種無機元素，各無機元素的含量也高低不一。

3.七葉一枝花的繁殖技術(shù)研究

七葉一枝花的藥用價值高，但是由于其生長速度慢，導致了消費市場中供需失衡。在對七葉一枝花進行繁殖的具體操作方式中，主要可以采取三種方式來進行，即組織培養(yǎng)法進行繁殖、根莖切塊法繁殖以及利用種子繁殖。

3.1 組織培養(yǎng)法繁殖

七葉一枝花的離體快速繁殖體系出現(xiàn)較早，且繁殖方式較多。王嵐等對供試植株進行消毒處理，獲得了一系列無菌苗，說明在以濃度為0.2%氯化汞作為消毒劑時，消毒時間最佳為8min，最終存活率達到了50%。宋發(fā)軍等在試驗中發(fā)現(xiàn)，在溫度條件為17℃-22℃，光照時間為12h條件下，添加 0.1mg L-1 NAA 和 0.5 mg L-16-6-BA ，誘導率能夠達到57%；利用組織培養(yǎng)來對七葉一枝花進行人工繁殖技術(shù)也在持續(xù)突破，但是目前這方面的研究較少。利用組織培養(yǎng)來繁殖的方式，其繁殖的速度比較快，但是整體過程對試驗條件以及作業(yè)人員的專業(yè)素質(zhì)要求都較高，在繁殖的過程當中容易出現(xiàn)各種情況的污染，材料的污染會讓誘導率大幅下降，在大面積人工種植當中并不適用。

3.2 利用根莖繁殖

根莖切塊的方式是對根莖帶頂芽的部分進行切取，其繁殖方式為無性繁殖，能夠快速地對種苗進行繁殖，縮短整個種植周期。田邦青等將試驗用七葉一枝花的塊莖作為種的來源，將喬木林當中的空地作為培養(yǎng)地對七葉一枝花進行組織培養(yǎng)，獲得了一系列的組培苗，并在模擬的自然狀態(tài)下進行了人工栽培，最終結(jié)果顯示，人工栽培的七葉一枝花的藥用部位性狀和野生的七葉一枝花性狀保持一致，同時人工栽培的七葉一枝花在產(chǎn)量上比野生的有了較大幅度的提升。龔范武等發(fā)現(xiàn)采用根莖作為育苗的來源，在各個種植地區(qū)，都表現(xiàn)出了較高的發(fā)芽率和出苗率，同時發(fā)芽和出苗所需時間少，但是整體過程中需要消耗大量資源，成本總體偏高。

根莖切塊的方法對于種源的整體需求量較大，需要大量的母株供應，在一定程度上造成了母株浪費，且培養(yǎng)過程中容易污染，對持續(xù)生產(chǎn)提出了較高的要求，難以滿足消費市場的需求。

3.3 利用種子繁殖

七葉一枝花的種子萌發(fā)的難度高，在自然環(huán)境下，需要2年的時間才能順利萌發(fā)并成苗，且其種子有二次休眠的特性。在種子胚休眠時期，其種子的外觀已經(jīng)成熟，但種胚的生理體系尚不完善，需要經(jīng)過后熟過程，才能最終萌發(fā)。種子在經(jīng)過變溫層積之后，可以讓其成苗率和成活率得到提升。蒙愛東等采收了一定量的七葉一枝花種子，然后對其進行了沙藏等方式的處理，最終結(jié)果表明，其播種到最后的出苗時間比自然狀態(tài)下所需時間縮短到了一年，同時對其發(fā)芽的動態(tài)持續(xù)進行觀察，結(jié)果表明七葉一枝花種子萌發(fā)的各個階段所持續(xù)的時間長短相差較大，其花胚在發(fā)育過程中的誘因以及所需要的時間仍需要進行后續(xù)研究；彭靜等對七葉一枝花的種子進行了冷藏、沙藏等一系列處理，然后對其進行控溫催芽，最后結(jié)果表明這些措施能夠打破種子的休眠機制，讓種胚的后熟過程整體縮短，減少出苗時間，同時可以提升其成苗率以及存活率，對于七葉一枝花的規(guī)模化人工種植具有一定的意義。龔范武等對七葉一枝花的種子采取了一系列處理措施，例如冷藏、沙藏和控溫催芽，結(jié)果其種子的整體出苗率高達70%-80%，且經(jīng)過冷藏處理之后，其種子的出芽率高于沙藏處理后種子的出芽率，在冷藏處理之后，對種子控溫催芽，其出苗率可以達到80.1%，且出苗的時間可以縮短至一年。七葉一枝花種子的繁殖過程中，由于其種子休眠特性以及育苗周期和生長周期長，但是繁殖系數(shù)較大，操作過程便捷，整體過程中沒有隱患，能夠在規(guī)?；N植當中利用。

3.4 外源激素的影響

外源激素對植株來說是一種生長調(diào)節(jié)劑，對于種子的萌發(fā)過程有較大的影響，有諸多研究采用了許多不同激素來對種子萌發(fā)的條件進行摸索。張旺凡等采用對植株施加激素的方式進行處理，打破了其休眠機制，其結(jié)果表明，處理措施為變溫層積的方式時，溫度為20℃條件下催芽60d，最終供試植株的整體發(fā)芽率高達90%以上。楊亞利等利用處理試劑為不同濃度的秋水仙素，誘導七葉一枝花植株產(chǎn)生多倍體，且對處理了不同時間的植株進行比較和具體分析，發(fā)現(xiàn)供試樣品在經(jīng)過秋水仙處理，當七葉一枝花種子萌發(fā)后，組培苗的整體根莖呈現(xiàn)出增粗的趨勢，節(jié)間的距離縮短，種子表現(xiàn)出了胚根粗短狀態(tài)，整體胚軸變長，且根尖均表現(xiàn)出膨大表型，其膨大率可以高達51.69%，而處理的最優(yōu)時間為12h。黃珊珊等采取根莖繁殖的方式，處理方式為使用艾比蒂（ABT）生根粉，表面這種方式能夠明顯地加快其生長，縮短整個生長周期。

3.5 外界環(huán)境影響因素

在外界環(huán)境中，病蟲害的防治以及土壤中有機物質(zhì)含量和營養(yǎng)元素種類對七葉一枝花繁育植株也有較大的影響。氮、磷、鉀和一些微量元素對七葉一枝花植株中的有效成分有著不同的影響。在人工栽培過程中，還需注意栽培的密度、模式以及合理的營養(yǎng)施肥，同時當?shù)貧夂?、地形等都會對人工繁殖造成一定程度的影響?/p>

4.環(huán)境條件對七葉一枝花種苗繁育的影響

在植株的生長過程中，需要外界提供適宜的溫度、光照以及水分條件。而外源激素是植株在生長過程中的調(diào)節(jié)劑，能夠影響植株的新陳代謝，對整個植株的生長發(fā)育周期都有一定的影響。

4.1 溫度的影響

梁娟等利用了盆栽方式進行試驗，結(jié)果表明不同的溫度對于七葉一枝花植株生長中的光和特性以及皂苷含量都有明顯的影響，比較適宜的生長溫度范圍在18℃-24℃，最佳的適于其生長的溫度為22℃左右。

4.2 光照的影響

鄭順林等研究了在不同光照下七葉一枝花整體光合水平指標，并進行了分析，結(jié)果表示最佳的遮光范圍是40-60%，當遮光部分超過了整體的80%之后，其光合作用的各項指標均會下降。王嵐等選取了3年生長的植株為實驗材料，對其整個生理健康相關(guān)指標和光合作用對整個植株影響進行了測定和分析，最終結(jié)果說明在移栽的過程當中，最佳的遮陰度為60%。

4.3 水分的影響

梁娟等對七葉一枝花的盆栽植株當中，具體測量了光合作用中各項具體參數(shù)和皂苷含量，并對土壤中水分的不同含量對整個植株的影響進行了分析，結(jié)果表明在人工栽培的條件下，在其進行營養(yǎng)生長的整個過程中，植株對于土壤中水分含量有一定的需求，但是在生長的后期，對其采取干旱處理，能夠有效地提升整個植株中的有效成分。

4.4 林地

龔范武等對七葉一枝花進行了林下的人工栽培試驗，對闊葉林、灌木林和針葉林下培育的植株進行了各項指標的比較和分析，結(jié)果表明在闊葉林較為合適，成功率較高，同時整體植株的質(zhì)量和土壤中所含的營養(yǎng)元素也存在關(guān)聯(lián)。

4.5 外源激素影響

王嵐等對七葉一枝花施用外源激素后，測定植株的生理特性，結(jié)果說明IAA能夠提升七葉一枝花植株中葉綠素、蛋白質(zhì)以及可溶性糖的含量，且增加效果最顯著的處理條件是 20d,IAA 濃度為 60 mg L-1。

4.6 其他影響條件

在七葉一枝花的培育中，病蟲害的防治技術(shù)以及田間管理對于整個植株的發(fā)育也比較重要，采取的主要措施為除草、施肥等，同時需要防治葉枯病、莖腐病和蚜蟲、刺蛾等侵害，保證植株的生長環(huán)境。

5.種子標準研究現(xiàn)狀

在中藥現(xiàn)代化的過程中，需要完成中藥的標準化，只有建立了精準的評價標準，才能在市場中對中藥的質(zhì)量進行有效把控，保障中藥的生產(chǎn)、使用安全性。其中，中藥植株的種子對于整個植株的生產(chǎn)起到了非常重要的作用，因此在大規(guī)模繁殖過程中，需要對藥材的種子質(zhì)量提出明確的要求，讓其能夠控制種子的質(zhì)量，在實際生產(chǎn)中避免劣質(zhì)種子的流通。隨著我國中藥產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，出現(xiàn)了一些質(zhì)量參差不齊等問題，因此在制定種子質(zhì)量標準時，需要結(jié)合實際情況制定對應的標準以及檢測方法。目前對于七葉一枝花種子的生產(chǎn)及使用還未有統(tǒng)一的標準，其種子采收方式多為直接對野生種苗進行采集，或者將其移栽以后再對其進行人工馴化，再對其采集。而七葉一枝花在我國的分布范圍較廣，適宜其生長的地域較為分散，且各地域直接的栽培方式有所不同，其效果也有差別，缺乏統(tǒng)一、合理的評價系統(tǒng)。同時各地域的種子生理特性也有差別，對自然環(huán)境等條件有不同的要求，同時儲存的方式也并不統(tǒng)一。

6.小結(jié)

七葉一枝花作為重樓的主要來源植物，急需對其進行人工繁殖，目前七葉一枝花人工繁殖技術(shù)仍然缺乏系統(tǒng)性。由于七葉一枝花具有較高的藥用價值，但是其野生資源逐漸匱乏，而在自然狀態(tài)下，其生長速度非常緩慢，隨著市場需求的持續(xù)增加，野生資源供應減少和持續(xù)增加的消費市場之間的矛盾越發(fā)突出，人工繁育方式當中，繁育技術(shù)在持續(xù)改進，目前最佳的大規(guī)模人工繁育方式是通過種子來進行繁育。為了保障人工繁育植株維持其藥性，需研究分析野生植株和人工種植植株之間的具體差異，加快人工繁育評價體系的建設，構(gòu)建完善、科學的質(zhì)量評價體系，保障其藥材的品質(zhì)，實現(xiàn)七葉一枝花的持續(xù)發(fā)展。