臨床免疫檢驗自動化研究進展探析構(gòu)建

張金鵬 天津市河西醫(yī)院檢驗科 （天津 300202）

內(nèi)容提要： 自動化檢驗的不斷完善也進一步促進了臨床醫(yī)學(xué)對實驗室安全與檢驗結(jié)果可溯源的要求。臨床中應(yīng)用自動免疫檢驗后，充分減輕了檢驗人員的工作強度，同時也減少了人工操作容易發(fā)生生物危害的問題。可以預(yù)見：自動免疫檢驗在醫(yī)療檢驗中將發(fā)揮更為重要的作用。而現(xiàn)代自動化免疫技術(shù)也由單一檢測分析，進入了多基因分析與微量通化道路的時代，檢驗的精確度進一步提升，不僅在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，在其他領(lǐng)域中也發(fā)揮了重要的作用?；诖耍敬窝芯酷槍ψ詣踊瘷z驗的研究情況做出了梳理，針對研究進展與臨床應(yīng)用做出了針對性分析，以期為促進免疫自動化檢驗技術(shù)的發(fā)展提供相應(yīng)的參考。

臨床調(diào)查顯示[1]：現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，醫(yī)學(xué)檢驗的發(fā)展速度較快，且大部分檢驗項目已實現(xiàn)了自動化檢查，臨床檢驗的特異性與靈敏性均實現(xiàn)了一定程度的提升。而基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中提示的新型生物標(biāo)記物也被逐漸應(yīng)用到自動化的檢查中，進一步提升了檢查能力?；谧詣踊庖邫z測的高靈敏性與高特異性，自動化免疫檢測逐漸成為臨床中的首要檢測方法。從檢測水平的角度分析[2]：檢測也進入了多基因分析與微量通化道路的時代，檢驗的精確度進一步提升，不僅在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，在其他領(lǐng)域中也發(fā)揮了重要的作用?；诖?，本次研究針對自動化檢驗的研究情況做出了梳理，針對研究進展與臨床應(yīng)用做出了針對性分析，具體報道如下。

1.自動化免疫檢查的概念及應(yīng)用情況

1.1 自動化免疫檢查的概念

自動化免疫檢查是以完成免疫分析工作為核心目的，以機械代替人工為核心的一類免疫檢查方法。自動化免疫檢查具體包括三部分內(nèi)容[3]：①在試劑分配、洗滌及加樣的過程中均應(yīng)實現(xiàn)自動化操作。②在進行數(shù)據(jù)處理的過程中實現(xiàn)全數(shù)據(jù)處理的自動化。③在發(fā)生問題時能為機械操作人員清晰提示故障的位置，并能在發(fā)揮計算能力的基礎(chǔ)上，提示解決問題的策略。

1.2 自動化免疫檢查的應(yīng)用情況

臨床研究提示：目前臨床檢測的工作量處于不斷增加的趨勢中，但隨著檢測工作量的增加，人工操作感染樣本風(fēng)險也在不斷增大?；诖?，醫(yī)學(xué)管理對臨床檢驗提出了更高的要求[4]。進入20世紀(jì)70年代，全自動分析設(shè)備被較為廣泛地應(yīng)用到了臨床檢測中，取得了較好的臨床效果。進入20世紀(jì)90年代，自動化免疫分析技術(shù)經(jīng)過長期的臨床實踐，取得了較多的臨床經(jīng)驗，并在臨床經(jīng)驗與學(xué)術(shù)研究的支持下進入了自動化免疫分析的成熟時期。在這一時期，開發(fā)出了較多的免疫分析方法。如熒光分析測定法，化學(xué)發(fā)光測定法與熒光偏振免疫測定法等方法。上述方法不斷被引入到自動免疫分析技術(shù)中，取得了較好的臨床效果。不僅提示了較高的靈敏性，同時也提示出了較強的特異性[5]。且在充分排除人工干預(yù)的情況下，提示了良好的抗干擾能力。

在目前的情況下，我國的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)均取得了較為充分的發(fā)展。在這一背景下，關(guān)于免疫學(xué)的相關(guān)研究也取得了相應(yīng)的發(fā)展。在臨床免疫檢查運用過程中，也逐漸在基層醫(yī)療機構(gòu)全面推廣。而隨著醫(yī)療科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來越多的先進自動化設(shè)備也應(yīng)用于臨床檢驗工作中，不僅充分緩解了檢驗工作人員的壓力，同時減少了臨床檢查中的工作流程，提升了檢驗結(jié)果的精確性、靈敏性[6]。

2.免疫檢驗自動化的研究進展

20世紀(jì)70年代后期，臨床免疫技術(shù)取得了長足的發(fā)展，現(xiàn)代化的免疫分析儀不斷應(yīng)用新的免疫分析技術(shù)。臨床研究提示：現(xiàn)代化的免疫分析儀器一般使用一種或兩種免疫分析技術(shù)[7]。目前，自動化免疫檢驗中主要使用的免疫分析技術(shù)包括：生物素—親和素分析技術(shù)；酶聯(lián)免疫分析技術(shù)、化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)、熒光偏振免疫測定技術(shù)及化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)等[8]。綜合使用各項免疫分析技術(shù)后，全自動免疫檢驗實現(xiàn)了高特異性與高靈敏性的要求，且具有較強的抗干擾性。

2.1 免疫濁度測定自動化檢驗技術(shù)的研究進展

免疫濁度測定技術(shù)是使用可溶性抗原抗體進行檢測，利用抗原抗體在反應(yīng)液體內(nèi)會發(fā)生特異結(jié)合而形成大小不一的復(fù)合物的特征進行檢驗。而隨著復(fù)合物的增多，反應(yīng)液體會呈現(xiàn)出一定的濁度。臨床研究提示[9]：在反應(yīng)液體內(nèi)的抗體較多時，復(fù)合物的抗原含量水平也會隨之增多。統(tǒng)計反應(yīng)液體濁度后，與標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液進行比較能夠獲得抗原抗體的含量，進而得出相應(yīng)的檢查結(jié)論。

2.1.1 散射比濁儀測定法

散射比濁儀測定法采用既定波長光線照射的方式進行分析，沿水平方向進行照射，在具體照射過程，遭遇抗體抗原復(fù)合物后的照射光線會發(fā)生折射的，可清晰觀察到角度的偏轉(zhuǎn)。臨床研究提示[10]：照射光線的波長，偏轉(zhuǎn)角度及規(guī)格與抗原抗體的情況呈現(xiàn)出正相關(guān)關(guān)系，即抗原抗體越復(fù)雜，數(shù)量越多的情況下，照射光線的角度偏轉(zhuǎn)越大，波長較短。綜合情況下，抗原抗體的情況越復(fù)雜，照射光線所表現(xiàn)出的散射強度也越大。

而在統(tǒng)計出相應(yīng)數(shù)據(jù)的情況下，通過數(shù)學(xué)函數(shù)模型的計算，能夠較為精確地計算出抗原抗體復(fù)合物的具體水平。臨床研究提示[11]：散射比濁測定方法的臨床靈敏度較高，精密性也較強，能夠較為充分地滿足臨床檢測效果。但臨床研究也提示了這一檢測方法所存在的部分問題。散射比濁測定要求檢測儀器與的檢測試劑需配套使用，因而檢測范圍較為狹窄，臨床檢測的成本也較高。

2.1.2 透射比濁測定法

透射比濁測定法是一種直接測量反應(yīng)溶液內(nèi)的離子散射水平與強度的臨床檢測方法。在反應(yīng)溶液內(nèi)離子存在較為確定的情況下，對反應(yīng)溶液進行強光照射，強光遭遇反應(yīng)溶液中的離子后會發(fā)生散射的情況，從而出現(xiàn)光度下降的情況。而對光度的下降水平進行分析，能夠分析出反應(yīng)溶液內(nèi)的粒子濃度情況。透射比濁測定法的反應(yīng)原理與光度測定的反應(yīng)原理相似。

同時，臨床研究中也提示了全自動透射比濁法的臨床優(yōu)勢，即透射比濁測定方法在滿足相應(yīng)的條件后就可以進行檢測，臨床條件較為容易滿足。具體要求為：待檢測樣本溶液中確定包含較多的抗原抗體，且抗原抗體與反應(yīng)溶液所形成的復(fù)合物體直徑較大，而在無法達到這一要求的情況下，透射光線將無法有效阻擋照射強光。第二、待檢測的抗原抗體具備良好的抗體親和力，且所使用的反應(yīng)加強劑能夠有抑制抗體抗原的溶解水平[12]。即只要臨床中合格的檢測試劑，就能實現(xiàn)使用生化分析檢測儀器進行全自動檢測的方法。

在具體應(yīng)用透射比濁方測定法進行檢測時，需要利用全自動免疫濁度分析儀器設(shè)備配合進行檢測分析。而使用全自動比濁儀器后，不論待檢樣本屬于血漿樣本，還是其他液體樣本。樣本中的特異蛋白情況，及尿微量蛋白情況的測定準(zhǔn)確性均會得到一定程度的提升[13]。綜合而言，透射比濁測定法的臨床適用條件較為簡單，檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確率較高，能夠促進提升臨床免疫檢測的效率。

2.2 免疫標(biāo)記自動化測定技術(shù)的研究進展

免疫標(biāo)記技術(shù)確定抗原抗體的一種技術(shù)，將臨床中已確定的抗原抗體通過較為方便且明顯的物質(zhì)進行標(biāo)記。其后對標(biāo)記物的含量進行測定，從而取得抗原抗體的反應(yīng)結(jié)果。并以標(biāo)記物測定結(jié)果為依據(jù)，通過數(shù)學(xué)模型分析出待檢測反應(yīng)液體中是否抗原抗體及其具體含量情況。且臨床研究提示[14]：免疫標(biāo)記技術(shù)的操作較為簡單，能夠較為充分地滿足臨床檢測中對檢測方法的要求。且免疫標(biāo)記方法的定性與定量技術(shù)均較為成熟，且準(zhǔn)確性較高，是目前臨床中使用范圍最廣的測定方式。

臨床統(tǒng)計提示[15]：目前常見的標(biāo)記免疫測定方法主要為放射免疫測定技術(shù)與免疫熒光技術(shù)。放射免疫測定技術(shù)是通過放射性核素標(biāo)記抗原抗體，通過分析抗原抗體特異性的情況下，繪制競爭抑制曲線，與標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比，從而實現(xiàn)檢測的目的。免疫熒光技術(shù)是通過熒光物質(zhì)標(biāo)記抗原抗體的情況下，分析復(fù)合反應(yīng)物中熒光強度所突出的特異性。并測定反應(yīng)液體中的微量與超微量物質(zhì)情況。最后通過計算機技術(shù)配合自動化免疫分析儀進行分析的情況下，實現(xiàn)測定的目的。臨床研究提示[16]：上述兩種標(biāo)記測定方法在臨床中的使用頻率較多，而可以預(yù)見的是：在設(shè)備儀器不斷提升的背景下，標(biāo)記檢測方法在未來的臨床檢測中也會發(fā)揮更重要的作用。

2.3 臨床檢查中的注意事項

自動化臨床免疫檢驗實現(xiàn)了以具有高速運算能力的計算機代替人工操作完成免疫檢驗及分析的整個過程，其中包含了免疫檢驗項目自動化加樣，其后對試劑進行分配、洗滌和測定，最后以自動化技術(shù)處理現(xiàn)有數(shù)據(jù)，在儀器出現(xiàn)故障時，能夠通過設(shè)備的自檢系統(tǒng)完成故障排除和初步確定，在減少人工操作同時，確保了設(shè)備的有序運行。免疫檢驗自動化運用過程中包含了免疫濁度自動化測定、標(biāo)記免疫檢驗自動化測定，以及相關(guān)的免疫檢測技術(shù)，其中免疫濁度技術(shù)主要運用的是抗原特異性結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，會在對應(yīng)液體內(nèi)呈現(xiàn)出渾濁狀態(tài)，通過這一變化測定相關(guān)指標(biāo)。臨床主要運用的測定免疫濁度技術(shù)包括散射比濁和投射濁度。標(biāo)記免疫檢驗運用的是放射性同位素對抗原抗體加以標(biāo)記，形成相應(yīng)反應(yīng)，依據(jù)免疫標(biāo)記方式差異，標(biāo)記分為酶標(biāo)技術(shù)、放射性免疫檢驗技術(shù)、免疫熒光技術(shù)等，但由于免疫熒光無法實現(xiàn)定量檢測以及自動化檢測，加之放射免疫技術(shù)費用高昂，運用試劑可能對人體健康造成影響，導(dǎo)致該技術(shù)推廣受限。免疫酶技術(shù)運用較為廣泛，且無需運用昂貴設(shè)備便可操作，并且檢測技術(shù)易于掌握。發(fā)光免疫檢驗技術(shù)運用的標(biāo)記物為發(fā)光物質(zhì)，免疫反應(yīng)體系下，發(fā)光物質(zhì)會釋放自由能量并發(fā)光，對光源信號的監(jiān)測就可以測定數(shù)據(jù)，該檢測方法準(zhǔn)確性高，試劑穩(wěn)定性高，可以進行諸多項目的檢測。免疫檢驗的自動化分析儀運用了免疫分析的最新技術(shù)，涉及內(nèi)容包括：抗體需要較高親和力與特異性；磁性微球為常用的固體載體，能夠增加反應(yīng)面積；抗原反應(yīng)信號系統(tǒng)設(shè)計逐步趨于人工智能化，對于提升檢驗自動校對功能具有重要影響。

隨著臨床免疫檢驗技術(shù)水平的上升及要求的提高，在進行檢測的過程中，應(yīng)注意在檢測全過程中充分注意質(zhì)量的控制。要求檢測工作人員在采集樣本、保存樣本及運輸，儲存樣本的過程中嚴(yán)格按照操作規(guī)范進行操作。并在對檢查結(jié)果進行二次復(fù)查時候，嚴(yán)格按照各項檢測儀器與檢測設(shè)備說明與SOP規(guī)范進行操作。避免因規(guī)范問題而引發(fā)檢測結(jié)果的異常。同時，在具體進行檢測的過程中應(yīng)注意彌補常規(guī)質(zhì)量控制中存在的不足?；诖耍瑱z查工作人員需注意與主治醫(yī)師及護理人員進行充分的溝通，向醫(yī)護人員闡釋檢測對規(guī)范操作的需求，從而促進提升醫(yī)護工作人員的規(guī)范操作意識。同時院內(nèi)也可以通過交流學(xué)習(xí)或舉辦學(xué)術(shù)講座的方法，向相關(guān)工作人員提示檢測對規(guī)范操作的需求，規(guī)范相關(guān)工作人員進行規(guī)范操作，從而促進提升檢查的準(zhǔn)確率。而在檢查中發(fā)現(xiàn)問題時，應(yīng)注意進行溯源分析，在充分提示問題發(fā)生原因的基礎(chǔ)上，分析問題的解決方法，并形成循證依據(jù)，避免問題的重復(fù)發(fā)生。

3.結(jié)束語

在免疫技術(shù)不斷發(fā)展，自動化檢測技術(shù)不斷完善的背景下，臨床檢驗中也主要使用自動化檢查技術(shù)進行檢查，避免人工操作所帶來的誤差與感染問題。目前，臨床研究中關(guān)于自動化的研究主要集中在免疫濁度測定研究與標(biāo)記自動化測定兩方面。而在免疫檢驗技術(shù)不斷發(fā)展，自動化檢查設(shè)備不斷更新的背景下，臨床自動化檢查技術(shù)也將呈現(xiàn)出更便捷，更高效的特征。本次研究針對自動化檢驗的研究情況做出了梳理，針對研究進展與臨床應(yīng)用做出了針對性分析，為促進免疫自動化檢驗技術(shù)的發(fā)展提供相應(yīng)的參考。