羅布麻茶改善睡眠功能實(shí)驗(yàn)研究

何 偉 王 莉 劉 磊 黃景鳳 李治建

(1 阿勒泰戈寶茶股份有限公司，阿勒泰，836500；2 阿勒泰戈寶茶股份有限公司烏魯木齊分公司，烏魯木齊，830015；3 新疆羅布麻工程技術(shù)研究中心(紅麻)，阿勒泰，836500；4 新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾藥研究所，烏魯木齊，830049)

羅布麻(ApocynumvenetumL.)屬夾竹桃科植物，《中華人民共和國(guó)藥典》記載，用鮮葉加工成的羅布麻茶功能主治“平肝安神、清熱利水、高血壓、神經(jīng)衰弱”等[1-2]。近幾年，具有保健功效的純天然產(chǎn)品受到亞健康人群的青睞，羅布麻作為天然草本藥物，隨著人們對(duì)其研究的日益深入，其保健功效也逐漸被人們所接受。羅布麻葉中含黃酮、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、脂肪酸醇酯、氨基酸、礦物元素及其他物質(zhì)[3-5]。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，羅布麻葉中的有效成分具有降血壓、降血脂、抗氧化、防抑郁、利尿、保護(hù)腎臟和保護(hù)心血管等作用[6-7]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)羅布麻茶中有效物質(zhì)改善睡眠功能的研究尚未見報(bào)道。

本研究所用羅布麻生長(zhǎng)在東經(jīng)87°33′；北緯47°42′的新疆阿勒泰阿拉哈克鄉(xiāng)東戈壁。本實(shí)驗(yàn)以小鼠為觀察對(duì)象，觀察羅布麻茶改善睡眠的功效，為產(chǎn)品的進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 選用新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的美國(guó)癌癥研究所(Institute of Cancer Research，ICR)雄性小鼠192只[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(新)2018-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(新)2018-0001]，5～6周齡，飼養(yǎng)室溫度(23±3)℃、濕度40%～70%、噪聲<85 dB，12 h/12 h白天和黑夜循環(huán)照明，本實(shí)驗(yàn)方案交由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理(倫理)委員會(huì)審查、批準(zhǔn)后實(shí)施完全按國(guó)家相關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利法規(guī)規(guī)定執(zhí)行(倫理審批號(hào)：nGLP-2019015)。

1.1.2 藥物 羅布麻茶，袋泡茶，內(nèi)容物為由羅布麻葉、五味子提取物、酸棗仁提取物組成的顆粒狀物質(zhì)，由阿勒泰戈寶茶股份有限公司生產(chǎn)提供，批號(hào)：20181116。推薦成人日攝入定型產(chǎn)品量9 g/60 kg(開水泡服，2次/d，1袋/次，4.5 g/袋)，以廠家提供的濃縮液(褐色膏狀，1 g定型產(chǎn)品相當(dāng)于0.7 g濃縮液)作為受試物，則濃縮液的日攝入量為6.3 g/60 kgBW，即0.105 g/kgBW。

1.1.3 試劑與儀器 戊巴比妥鈉(北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)：AM00469)、巴比妥鈉(成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：190305)，2種試劑均現(xiàn)配現(xiàn)用。電子天平(德國(guó)賽多利斯股份公司，型號(hào):BT-124S)、電熱蒸餾水器(北京市永光明醫(yī)療儀器廠，型號(hào):HS.Z68.10)、超聲波加濕器(北京亞都室內(nèi)環(huán)保科技股份有限公司，型號(hào):YC-D209)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 分別選取48只體質(zhì)量為18.7～21.5 g的小鼠并分為4組，每組12只，進(jìn)行直接睡眠實(shí)驗(yàn)、延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)和巴比妥鈉催眠潛伏期實(shí)驗(yàn)[8]。

1.2.2 給藥方法 以成人(體質(zhì)量按60 kg計(jì))每天攝入濃縮液的量(0.105 g/kg)的10、20和30倍設(shè)置劑量組，則羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組的劑量分別為3.15 g/kg、2.10 g/kg、1.05 g/kg。精確稱取7.88 g、5.25 g、2.63 g濃縮液于50 mL容量中，加入蒸餾水，充分溶解后定容，陰性對(duì)照組為蒸餾水，每組12只。各劑量組小鼠每天灌胃給予濃縮液1次，灌胃量為0.2 mL/10 g，陰性對(duì)照組小鼠給予等體積的蒸餾水，各劑量組持續(xù)灌胃30 d。小鼠于末次給藥前1 d給予蒸餾水及不同濃度濃縮液60 min后，檢測(cè)各組小鼠自主活動(dòng)5 min自主活動(dòng)行為情況，動(dòng)物須在檢測(cè)開始前2 min放入曠場(chǎng)箱內(nèi)適應(yīng)后開始測(cè)試。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1 直接睡眠實(shí)驗(yàn) 小鼠末次喂予蒸餾水及不同濃度樣品的受試物后，查看受試樣品組及陰性對(duì)照組有無入睡表現(xiàn)，以翻正反射消失為標(biāo)準(zhǔn)，記錄陰性對(duì)照組與受試樣品組入睡小鼠個(gè)數(shù)及入睡時(shí)間。

1.2.3.2 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn) 正式實(shí)驗(yàn)開始前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，找到使小鼠完全入睡，但又不會(huì)使其入睡時(shí)間過長(zhǎng)的戊巴比妥鈉劑量(45 mg/kg)，并以此劑量開展后面實(shí)驗(yàn)。小鼠最后1次給予蒸餾水及不同濃度受試物后，出現(xiàn)峰作用前15 min，給各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.1 mL/10 g，以翻正反射消失為標(biāo)準(zhǔn)，查看受試樣品能否延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間。

1.2.3.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn) 正式實(shí)驗(yàn)開始前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量(26 mg/kg)：85%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量。小鼠最后1次給予蒸餾水及不同濃度受試樣品后，出現(xiàn)峰作用前10 min，各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量，注射量為0.1 mL/10 g，記錄30 min內(nèi)入睡個(gè)體數(shù)(翻正反射消失60 s以上)。

1.2.3.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn) 正式實(shí)驗(yàn)開始前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定小鼠完全入睡，但又不會(huì)使其入睡過長(zhǎng)時(shí)間的巴比妥鈉的劑量(260 mg/kg)，并以此劑量開展后面實(shí)驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用方差分析法進(jìn)行均值比較，方差齊性，各組間比較用LSD法；方差不齊性，各劑量組間用Tamhane，s法比較。用方差分析小鼠體質(zhì)量、入睡時(shí)間、入睡動(dòng)物數(shù)、潛伏期的單因素實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；用χ2檢驗(yàn)分析入睡動(dòng)物發(fā)生率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 羅布麻茶對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響 小鼠最后1次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量進(jìn)行方差分析，結(jié)果說明，各劑量組實(shí)驗(yàn)前后小鼠體質(zhì)量與陰性對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。小鼠最后1次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量方差分析，結(jié)果說明，各劑量組實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)后小鼠體質(zhì)量與陰性對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。各劑量組實(shí)驗(yàn)前后小鼠體質(zhì)量與陰性對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。小鼠最后1次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量進(jìn)行方差分析，結(jié)果說明，各劑量組實(shí)驗(yàn)前后小鼠體質(zhì)量與陰性對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表1 羅布麻茶對(duì)直接睡眠實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量的影響

表2 羅布麻茶對(duì)延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量的影響

表3 羅布麻茶對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量的影響

表4 羅布麻茶對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量的影響

2.2 羅布麻茶對(duì)直接睡眠實(shí)驗(yàn)入睡小鼠數(shù)及入睡時(shí)間的影響 與陰性對(duì)照組比較，各劑量組入睡動(dòng)物只數(shù)及入睡時(shí)間均為0，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 羅布麻茶對(duì)戊巴比妥鈉入睡時(shí)間的影響 各組的入睡時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與陰性對(duì)照組比較，高劑量組小鼠入睡時(shí)間顯著增長(zhǎng)(P<0.01)，中劑量組小鼠入睡時(shí)間增長(zhǎng)(P<0.05)，劑量低的觀察組小鼠入睡時(shí)間無明顯變化(P<0.05)。見表5。

表5 羅布麻茶對(duì)戊巴比妥鈉入睡時(shí)間的影響

2.4 羅布麻茶對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)入睡發(fā)生率的影響 與陰性對(duì)照組比較，各劑量組小鼠的入睡發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表6。

表6 羅布麻茶對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)小鼠入睡發(fā)生率的影響(n=12)

2.5 羅布麻茶對(duì)戊巴比妥鈉潛伏期的影響 與陰性對(duì)照組比較，羅布麻茶高劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯變短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組小鼠睡眠潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表7。

表7 羅布麻茶對(duì)戊巴比妥鈉潛伏期的影響

3 討論

目前，失眠已成為社會(huì)普遍現(xiàn)象，嚴(yán)重影響人們的正常生活。西醫(yī)認(rèn)為睡眠主要是因?yàn)榇竽X神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能發(fā)生障礙；中醫(yī)認(rèn)為是人體陰陽失衡。常見安眠藥的作用機(jī)制是抑制神經(jīng)系統(tǒng)，降低神經(jīng)興奮性。因此，它在幫助失眠患者改善睡眠的同時(shí)，會(huì)嚴(yán)重減低神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能。長(zhǎng)期服用，易形成藥物依賴，甚至發(fā)生慢性中毒及戒斷綜合征等[9-13]。羅布麻茶以平肝安神，補(bǔ)腎寧心為法，選用羅布麻葉，輔以酸棗仁提取物，再配以五味子提取物共同組方，改善睡眠。現(xiàn)代研究表明：羅布麻葉對(duì)戊巴比妥的鎮(zhèn)靜催眠作用有協(xié)同作用；酸棗仁具有延長(zhǎng)大鼠慢波睡眠深睡階段的功效；五味子能延長(zhǎng)睡眠時(shí)間，鎮(zhèn)靜安神，同時(shí)具有提高機(jī)體免疫力的功效。羅布麻茶作為一種天然安全的保健食品不僅可以改善睡眠還不會(huì)生產(chǎn)依賴性，其中含有的黃酮類等物質(zhì)使其保健功效更為明確。

通過羅布麻茶小鼠實(shí)驗(yàn)說明，對(duì)小鼠經(jīng)口連續(xù)灌胃給予高劑量、中劑量、低劑量的羅布麻茶30 d，與陰性對(duì)照組比較，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間高劑量組顯著延長(zhǎng),睡眠潛伏期明顯減短；中劑量組小鼠睡眠時(shí)間延長(zhǎng)；直接睡眠實(shí)驗(yàn)入睡動(dòng)物個(gè)數(shù)、睡眠時(shí)間及戊巴比妥鈉入睡發(fā)生率羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組與陰性對(duì)照組比較無顯著性差異；各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組與陰性對(duì)照組比較無顯著性差異，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)中的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為羅布麻茶具有改善睡眠的功效[14-21]。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)比較，羅布麻茶可使小鼠的體質(zhì)量有一定程度的降低，羅布麻具有清熱利尿及增加腸蠕動(dòng)的作用，進(jìn)而促進(jìn)新陳代謝，降低體質(zhì)量，引起動(dòng)物腦系數(shù)的升高，即小鼠腦組織中樞神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺、多巴胺的水平，羅布麻改善睡眠的機(jī)制可能在于促進(jìn)5-羥色胺的生物合成過程，從而幫助患者改善睡眠[22]。