三葉青不同部位顯微特征研究

李振斌，杜家會，沈 剛，鄧朝義

(1.黔西南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 興義 562400；2.成都市中草藥研究所，四川 成都 610016；3.貴州黔西南喀斯特區(qū)域發(fā)展研究院，貴州 興義 562400)

三葉青為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDiels et Gilg)的新鮮或干燥塊根，有清熱解毒、消腫止痛、化痰散結(jié)的功效，常用于小兒高熱驚風(fēng)、百日咳、毒蛇咬傷等[1]；也可選用干燥全草，具有清熱解毒、消腫止痛、活血祛風(fēng)等功效，用于流行性感冒、肝炎、泌尿系統(tǒng)結(jié)石、跌打損傷等[2]。

目前，三葉青(蛇附子)的本草考證[3-4]、生物學(xué)研究[5-7]、化學(xué)成分[8]、藥理作用[9-10]已有不少研究報道，但在顯微特征方面，僅見于對其塊根、須根進行的探究[11-12]，未見莖、葉的詳細報道。為準(zhǔn)確應(yīng)用三葉青，本研究從塊根、莖、葉進行顯微特征研究，以期為后期更深入的研究及制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究所用三葉青經(jīng)貴州黔西南喀斯特區(qū)域發(fā)展研究院鄧朝義研究員鑒定為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDiels et Gilg) 的全株。其樣品來源的詳細信息，見表1。

表1 樣品來源

1.2 儀器

DMEX20生物顯微鏡(帶有成像顯微系統(tǒng))；HistoCore AUTOCUT全自動轉(zhuǎn)輪式切片機。

1.3 方法

1.3.1 石蠟切片顯微鑒別 取藥材塊根、中莖、葉制成適當(dāng)規(guī)格，F(xiàn)AA液固定，沖洗，脫水，透明，浸蠟，包埋，切片，脫蠟，二重染色，封藏，貼標(biāo)簽。顯微鏡下觀察，描述其植物組織特征[13]。

1.3.2 粉末顯微鑒別 取少量的藥材粉末于載玻片上，加2～3滴水合氯醛，在酒精燈上透化后，加稀甘油1～2滴，蓋上蓋玻片置于顯微鏡下觀察，描述其粉末顯微特征。

2 結(jié)果

2.1 橫切顯微鑒定

2.1.1 塊根橫切面 木栓層由 2～5列木栓細胞組成。皮層數(shù)列細胞，散有含草酸鈣針晶束的黏液細胞，部分薄壁細胞含棕色物；纖維束排列呈斷續(xù)環(huán)狀，位于維管束上方；韌皮部細胞較小，排列緊密；韌皮纖維呈條帶狀；形成層呈環(huán)狀；木質(zhì)部導(dǎo)管稀少，徑向排列；導(dǎo)管周圍木纖維發(fā)達；射線多寬闊，散有含草酸鈣針晶束的黏液細胞；薄壁細胞含草酸鈣簇晶和淀粉粒。見圖1。

注：1.木栓層；2.皮層；3.纖維束；4.草酸鈣針晶束；5.韌皮部；6.韌皮纖維；7.木質(zhì)部；8.射線；9.草酸鈣簇晶；10.導(dǎo)管；11.中央薄壁組織。

2.1.2 中莖橫切 表皮細胞一列，外被角質(zhì)層。皮層由 6～8 列類圓形的薄壁細胞組成，有的含草酸鈣蔟晶，黏液細胞內(nèi)含草酸鈣針晶束。中柱鞘纖維束環(huán)列，棱角處較大，壁厚。維管束環(huán)列，相對兩邊維管束較發(fā)達。木質(zhì)部頂端木纖維束發(fā)達，一至多條帶狀排列，導(dǎo)管孔徑較大，徑向排列，周圍木纖維發(fā)達。髓部薄壁細胞類圓形，有的含草酸鈣簇晶。見圖 2、圖3。

注：1.表皮；2.皮層；3.纖維束；4.木質(zhì)部；5.韌皮部；6.導(dǎo)管；7.髓部；8.中柱鞘纖維。

2.1.3 葉橫切面 表皮細胞一列，類圓形或扁方形，外被角質(zhì)層。柵欄組織為1～2列細胞，緊密排列，海綿組織疏松，有空隙。主脈維管束外韌型，近環(huán)狀，周圍薄壁細胞含草酸鈣簇晶。見圖4。

注：1.表皮；2.柵欄組織；3.主脈維管束；4.草酸鈣簇晶；5.海綿組織。

2.2 三葉青粉末顯微

2.2.1 塊根粉末顯微 粉末淺紅棕色或淺棕色。淀粉粒類圓形、橢圓形、紡錘形等，直徑8～56 μm，多單粒，臍點點狀或裂縫狀，層紋不明顯。網(wǎng)紋細胞黃棕色，壁稍厚，具有類圓形網(wǎng)狀壁孔，直徑171～219 μm。草酸鈣簇晶單個散在，直徑12～60 μm。草酸鈣針晶較多，散在，長32～196 μm。見圖5。

注：1.淀粉粒；2.網(wǎng)紋細胞；3.草酸鈣針晶束；4.草酸鈣簇晶。

2.2.2 莖粉末顯微 淺黃褐色。表皮細胞方形，細胞壁較厚，胞腔常含黃棕色物，斷面觀外被較厚角質(zhì)層?？准y導(dǎo)管多破碎，直徑42～98 μm。草酸鈣簇晶較多，散在或排列成行直徑10～66 μm。草酸鈣針晶散在或成束存在于類方形黏液細胞內(nèi)，長45～182 μm。纖維長，單個散在或成束，直徑6～18 μm壁木化，有紋孔。見圖6。

注：1.角質(zhì)層；2.表皮細胞；3.孔紋導(dǎo)管；4.草酸鈣簇晶；5.草酸鈣針晶；6.纖維。

2.2.3 葉粉末顯微 綠色或黃綠色。草酸鈣簇晶散在，直徑22～58 μm。草酸鈣針晶散在或成束存在于紡錘形黏液細胞內(nèi)，長65～195 μm。導(dǎo)管為螺紋導(dǎo)管，直徑15～35 μm。葉片下表皮細胞多角形，氣孔為平軸式或不定式。見圖7。

注：1.含草酸鈣針晶的黏液細胞；2.草酸鈣簇晶；3.螺紋導(dǎo)管；4.氣孔。

3 討論

通過對三葉青塊根、莖、葉橫切特征進行研究，發(fā)現(xiàn)塊根皮層結(jié)構(gòu)明顯，纖維束較規(guī)律排列于維管束上方，呈斷續(xù)環(huán)狀；韌皮部韌皮纖維呈條帶狀，一至多條，或連續(xù)，或間斷；射線薄壁細胞常見草酸鈣簇晶；莖皮層中柱鞘纖維束環(huán)列，在5個棱角處較大，棱角間較小，壁厚；維管束排列成環(huán)狀，5邊中有兩邊相對，該兩邊維管束較發(fā)達。木質(zhì)部頂端木纖維束一至多條帶狀排列，或呈“口”“日”等閉合形狀。此研究結(jié)果與《浙江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》記載的三葉青橫切特征相對比，發(fā)現(xiàn)《標(biāo)準(zhǔn)》中均未見描述，結(jié)合本研究目標(biāo)物為黔地喀斯特地區(qū)采集樣品，地域特點較為突出，與湖南、浙江等地差異較大，推測該差異或因此產(chǎn)生，也體現(xiàn)了三葉青生物特性隨區(qū)域不同變化較大的特點。而《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》三葉青莖橫切特征中“韌皮部外緣的兩徑向面有草酸鈣簇晶環(huán)列”又異于本研究，也佐證了地域性差異的影響。

本研究還對三葉青塊根、莖、葉粉末特征進行了對比，發(fā)現(xiàn)均含有草酸鈣簇晶，大小無明顯差異，莖中簇晶常成排；草酸針晶甚多，塊根、莖中晶體多散在，存在于類方形黏液細胞，而葉晶體存在于紡錘形黏液細胞中；塊根中淀粉粒較大，臍點及層紋不明顯，網(wǎng)紋細胞大型，黃色。其中，塊根粉末特征與已報道的特征差異不明顯[1，12]，而莖、葉粉末顯微特征，未見相關(guān)文獻報道。研究還發(fā)現(xiàn)，葉片中草酸晶體(簇晶、針晶)數(shù)量明顯多于莖葉中，而三葉青葉片口味較酸，或與該特點密切相關(guān)。

綜上，本研究較為詳細地闡明了三葉青不同部位的顯微特征，為其準(zhǔn)確合理應(yīng)用提供了參考，也為后續(xù)深入研究、制定地方標(biāo)準(zhǔn)及申報國家標(biāo)準(zhǔn)提供了有價值的理論依據(jù)。