血清LDH、ADA及EBV-DNA對(duì)兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥的診斷價(jià)值分析

張 云 李壽軍 周 星 卜曉敏

江蘇省儀征市人民醫(yī)院兒科 211400

EB病毒屬于嗜人外周血B淋巴細(xì)胞的DNA病毒，能夠誘發(fā)淋巴瘤、鼻咽癌、IM等臨床疾病，因該病毒引發(fā)的血液系統(tǒng)疾病極為常見，且其引發(fā)的疾病性質(zhì)多為惡性[1]。IM發(fā)生后，早期無典型臨床表現(xiàn)，且經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查研究表明，全球感染過該病毒的群體高達(dá)90%，在兒童被感染者中，該病毒會(huì)存在4d到半個(gè)月的潛伏期，且多數(shù)患者在發(fā)病時(shí)僅會(huì)出現(xiàn)上呼吸道癥狀，僅有少數(shù)患者會(huì)延發(fā)為IM[2-3]。雖多數(shù)患者在患病后預(yù)后較佳，但也存在部分患者會(huì)延發(fā)為嗜血綜合征等并發(fā)癥，對(duì)其生命安全造成威脅。故對(duì)該疾病的早期診斷與治療至關(guān)重要。目前，臨床對(duì)該疾病的診斷主要是通過測(cè)定EBV-DNA完成。但受 EBV潛伏期較長(zhǎng)影響，早期會(huì)出現(xiàn)無法檢出的情況，故為了提高疾病早期檢出率，探究其他生化指標(biāo)的測(cè)定勢(shì)在必行。LDH屬于糖酵解以及糖異生過程中的重要參與酶，而ADA是核酸代謝酶，現(xiàn)為探究將這兩項(xiàng)指標(biāo)與EBV-DNA聯(lián)合應(yīng)用于該疾病中的具體診斷價(jià)值，特對(duì)2018年1月—2022年4月間在我院接受治療的IM患兒70例以及同期在我院接受體檢的健康兒童70例進(jìn)行上述三種指標(biāo)的聯(lián)合測(cè)定，并對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行總結(jié)分析，現(xiàn)匯總?cè)缦隆?/p>

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年1月—2022年4月我院接受的兒童IM患兒70例為觀察組。再選取同期在我院接受體檢的健康兒童70例為對(duì)照組。本研究在院倫理委員會(huì)通過并批準(zhǔn)。觀察組中男38例，女32例，年齡4～12歲，平均年齡(8.01±0.34)歲；對(duì)照組中男37例，女33例，年齡4～12歲，平均年齡(7.98±0.33)歲。兩組患兒基礎(chǔ)資料對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。參與此次研究的患者及其家屬均對(duì)研究過程知情且同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)與《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》[4]中該疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)相符；(2)入組前未接受免疫抑制劑、抗感染等相關(guān)治療；(3)EBV特異性抗體陽(yáng)性。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病者；(2)合并咽峽炎、扁桃體炎、肺炎等其他炎性疾病者；(3)非EB病毒引發(fā)的疾病者。

1.2 方法 兩組患兒均在入院1d內(nèi)/入組時(shí)對(duì)其進(jìn)行空腹靜脈血的采集，采集2份血液標(biāo)本，第1份采集量在3～5ml，第2份采集量為2ml。將采集的3～5ml血液置入含乙二胺四乙酸抗凝劑的試管中進(jìn)行充分混勻后送檢。將血液標(biāo)本放置到低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司生產(chǎn)的TD24-WS)中，在10cm半徑，4℃，3 000r/min的條件下進(jìn)行持續(xù)15min的離心。將離心后的標(biāo)本進(jìn)行血清提取，并將提取出的血清放置到-80℃的超低溫冰箱中進(jìn)行保存準(zhǔn)備ADA指標(biāo)以及LDH指標(biāo)的測(cè)定，并在2d內(nèi)完成相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。其中，ADA指標(biāo)的測(cè)定在全自動(dòng)生化分析儀(雅培Aeroset)中完成，采用寧波美康科技有限公司提供的測(cè)定試劑盒，測(cè)定方法為過氧化酶法；LDH指標(biāo)的測(cè)定是在AttuneCytPix 流式細(xì)胞儀(賽默飛世爾科技有限公司)中完成的，采用上海雅吉生物科技有限公司提供的DTNB速率比色法測(cè)定試劑盒，測(cè)定方法為速率比色法。

將采集到的2ml血液置入含乙二胺四乙酸抗凝劑的試管中抗凝后，將其放置到含有淋巴細(xì)胞分離液的試管中，將該試管放置在離心機(jī)中，在18cm半徑，2 000r/min的條件下進(jìn)行持續(xù)20min的離心。離心完成后，對(duì)白細(xì)胞層進(jìn)行提取至1.5ml的離心管中，再將離心管放置在離心機(jī)中，在10cm半徑，12 000r/min的條件下進(jìn)行持續(xù)5min的離心。離心完成后，將上清液棄去，將DNA 提取液加入沉淀物中，并通過c1000熒光定量PCR儀(南京貝登電子商務(wù)有限公司)以及默克DNA試劑盒[西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易]進(jìn)行EBV-DNA指標(biāo)的測(cè)定，測(cè)定方法為熒光PCR技術(shù)。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)比兩組間EBV-DNA陽(yáng)性率以及LDH以及ADA水平。通過Pearson相關(guān)分析LDH、ADA及EBV-DNA三項(xiàng)指標(biāo)之間的相關(guān)性。通過ROC曲線計(jì)算LDH、ADA及EBV-DNA三項(xiàng)指標(biāo)之間的診斷效能。

2 結(jié)果

2.1 兩組EBV-DNA陽(yáng)性率對(duì)比 觀察組EBV-DNA陽(yáng)性率高于對(duì)照組(χ2=124.559，P=0.000<0.05)。見表1。

表1 兩組EBV-DNA陽(yáng)性率對(duì)比[n(%)]

2.2 兩組LDH、ADA水平對(duì)比 觀察組LDH、ADA水平均高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組LDH、ADA水平對(duì)比

2.3 LDH、ADA及EBV-DNA三項(xiàng)指標(biāo)之間的相關(guān)性對(duì)比 LDH、ADA及EBV-DNA三項(xiàng)指標(biāo)之間存在相關(guān)性(P<0.05)。見表3。

表3 LDH、ADA及EBV-DNA三項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性對(duì)比

2.4 LDH、ADA及EBV-DNA三項(xiàng)指標(biāo)之間的診斷效能 ROC曲線表明，EBV-DNA以703.22copies/ml為臨界值時(shí)，診斷效能最高，再依次為ADA、LDH。詳情見表4及圖1。

表4 LDH、ADA及EBV-DNA三項(xiàng)指標(biāo)診斷效能對(duì)比

圖1ROC曲線

3 討論

IM由支原體、腺病毒、巨細(xì)胞病毒以及EB病毒等多種病原體感染誘發(fā)的傳染性自限性疾病，以兒童以及青少年為主要高發(fā)群體[5]。其中，EB病毒是誘發(fā)該疾病發(fā)生的主要致病菌，以外周血異型淋巴細(xì)胞增多、肝脾腫大、淋巴結(jié)腫大以及發(fā)熱為典型臨床表現(xiàn)[6]。多數(shù)患者還會(huì)伴有上呼吸道感染癥狀以及輕度咽炎，少數(shù)患兒還會(huì)伴有噬血細(xì)胞綜合征、溶血性貧血、血小板減少性紫癜等血液系統(tǒng)疾病，突發(fā)性耳聾、視神經(jīng)炎、腦炎等神經(jīng)系統(tǒng)疾病，并可能會(huì)出現(xiàn)呼吸道梗阻、喉頭水腫、肺炎、心肌炎等并發(fā)癥。故為保障患兒的預(yù)后，早期的診斷與治療至關(guān)重要[7-8]。

本文結(jié)果表明，觀察組EBV-DNA陽(yáng)性率以及LDH、ADA水平高于對(duì)照組(P<0.05)；LDH、ADA及EBV-DNA三項(xiàng)指標(biāo)之間存在相關(guān)性(P<0.05)；ROC曲線表明，EBV-DNA以703.22copies/ml為臨界值時(shí)，其診斷IM患兒的特異性為0.949、敏感性為0.897，診斷效能最高，之后依次為ADA、LDH。結(jié)果證實(shí)血清LDH 、ADA及EBV-DNA聯(lián)合應(yīng)用在IM患兒的疾病診斷中具有較高的臨床價(jià)值。這與胡杰等[9]的觀點(diǎn)一致。結(jié)合本文結(jié)果進(jìn)行分析，ADA參與了嘌呤核苷代謝過程，是將腺嘌呤核苷催化成次黃嘌呤核苷，再在核苷磷酸化酶的輔助下轉(zhuǎn)化成次黃嘌呤，以尿酸為代謝緩和終產(chǎn)物[10-11]。因此，在機(jī)體的不同組織中均有其存在，但以淋巴細(xì)胞、脾、胸腺處存在量更大，以骨骼肌、腎、肺、肝處含量較少；該指標(biāo)在淋巴細(xì)胞的成熟、分化以及增殖過程中具有所參與，且主要參與T 淋巴細(xì)胞的活化過程，屬于該淋巴細(xì)胞的非特異性指標(biāo)之一[12-13]。且該指標(biāo)還與機(jī)體細(xì)胞免疫活性具有較大的關(guān)系，通過與體液、血液中該指標(biāo)及其同工酶的測(cè)定，可有效對(duì)疾病進(jìn)行鑒別診斷；而在IM疾病中，由于該疾病由EBV 感染引發(fā)，而EBV基因是由B 淋巴細(xì)胞攜帶，并對(duì)相應(yīng)的抗原做出表達(dá)，故會(huì)對(duì) T 淋巴細(xì)胞刺激而引發(fā)其異常的分化、增殖，故導(dǎo)致ADA水平急劇增加[14]。因此，EBV-DNA指標(biāo)在診斷IM患兒方面具有較高的特異度和靈敏度。而LDH 屬于酶類物質(zhì)，參與了糖酵解與對(duì)丙酮酸以及乳酸的催化之間氧化還原反應(yīng)，其在機(jī)體任何組織細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)均存在，但在腎臟組織中分布最廣，能夠用于惡性腫瘤以及肝臟疾病的鑒別診斷[15]。在IM疾病中，EB病毒結(jié)合B 淋巴細(xì)胞上的 EBV 受體，進(jìn)而導(dǎo)致B 細(xì)胞在受到感染后，其表面抗原發(fā)生改變，誘發(fā)了T 細(xì)胞異常活性，對(duì)B細(xì)胞造成殺傷，進(jìn)而對(duì)組織造成損害，誘發(fā)LDH水平急劇增多。

綜上所述，在IM的診斷中，EBV-DNA、LDH及ADA具有較高的診斷效能，應(yīng)用價(jià)值顯著。