百香果采后果腐病菌的生物學特性及其殺菌劑毒力測定

杜嬋娟，楊 迪 ， 葉云峰 ，潘連富 ，張 晉，付 崗

(1 廣西農業(yè)科學院植物保護研究所/廣西作物病蟲害生物學重點實驗室，南寧， 530007；2 廣西農業(yè)科學院園藝研究所，南寧，530007)

百香果Passifloraedulis，學名西番蓮，原產于南美洲熱帶地區(qū)，因富含多種營養(yǎng)物質，具有獨特的濃郁香氣，同時兼具食用價值和藥用價值，深受消費者喜愛[1-2]。

我國從20世紀90年代開始引種百香果，主產區(qū)分布包括廣西、廣東、海南、云南和福建等地[3]。截至2018年，我國百香果種植面積4.73萬hm2，鮮果產量達63.5萬t，成為近年來我國大力發(fā)展的新興產業(yè)之一[4]。

隨著百香果產業(yè)的快速發(fā)展，我國百香果種植面積不斷擴大，其病蟲害問題也日益突出[6-13]。其中，可可毛色二孢Lasiodiplodiatheobromae引起的果腐病是近年發(fā)生在百香果果實上新病害[14]，可造成果實腐爛，嚴重影響鮮果經濟價值。然而，目前國內鮮見防治百香果采后果腐病的相關研究報道，病害防治困難較大。

為進一步了解百香果果腐病菌的生物學特性，我們研究其相關生物學特性，測定14種殺菌劑對病原菌的室內毒力，為百香果采后果腐病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

百香果果腐病菌可可毛色二孢Lasiodiplodiatheobromae，由廣西壯族自治區(qū)農業(yè)科學院植物保護研究所分離與保存。培養(yǎng)基包括馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)和察氏培養(yǎng)基[15]。

殺菌劑：植物仿生類，80%乙蒜素乳油，河南科邦化工有限公司產。硫代氨基甲酸酯類，80%代森錳鋅可濕性粉劑，陶氏益農農業(yè)(中國)科技有限公司產。咪唑類，450 g/L咪鮮胺水乳劑，青島中達農業(yè)科技有限公司產。三唑類，250 g/L丙環(huán)唑乳油，山東濰坊雙星農藥有限公司產；430 g/L戊唑醇懸浮劑，江蘇七洲綠色化工股份有限公司產；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑，先正達南通作物保護有限公司產。苯并咪唑類，50%多菌靈可濕性粉劑，上海悅聯(lián)化工有限公司產。烷基多胺類，400 g/L嘧霉胺懸浮劑，拜耳(中國)有限公司產。甲氧基丙烯酸酯類，25%嘧菌酯懸浮劑，陜西皇牌作物科技有限公司產；22.5%啶氧菌酯懸浮劑，安陽市銳普農化有限公司產；30%吡唑醚菌酯懸浮劑，河南勇冠喬迪農業(yè)科技有限公司產；50%肟菌酯水分散粒劑，河北興柏農業(yè)科技有限公司產。酰胺類，41.7%氟吡菌胺懸浮劑，拜耳(中國)有限公司產；50%啶酰菌胺水分散粒劑，巴斯夫歐洲公司產。

1.2 pH值、溫度和光照的影響試驗

將純化后的病原菌移至PDA平板，28 ℃培養(yǎng)2 d，用滅菌的直徑5 mm打孔器沿菌落邊緣取菌餅，分別接種至pH值3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5和11.0的PDA平板，28 ℃培養(yǎng)36 h；另將菌餅接種至PDA平板后，分別放置在10、13、16、19、22、25、28、31、34、37和40 ℃培養(yǎng)36 h；另將菌餅接種至PDA平板后，分別放置24 h/d光照、12 h/d光暗交替和24 h/d黑暗下，28 ℃培養(yǎng)36 h，每處理重復3次，采用十字交叉法測量各處理菌落直徑。

1.3 不同碳源、氮源的影響試驗

以察氏培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，分別用葡萄糖、甘露醇、D-半乳糖、乳糖、山梨醇、果糖、可溶性淀粉、木糖、木糖醇和甘油等含碳化合物，等量置換基礎培養(yǎng)基中的蔗糖，制成不同碳源培養(yǎng)基；用硝酸鉀、甘氨酸、硫酸銨、L-脯氨酸、亞硝酸鈉、L-精氨酸、氯化銨、DL-丙氨酸、L-天冬氨酸和尿素等含氮化合物，等量置換基礎培養(yǎng)基中的硝酸鈉，制成不同氮源培養(yǎng)基，將病原菌菌餅接種至不同碳源或氮源培養(yǎng)基中，重復3次，28 ℃培養(yǎng)36 h，采用十字交叉法測量各處理菌落直徑。

1.4 殺菌劑室內毒力測定

采用平板生長速率法，將供試14種殺菌劑用無菌水配制成母液，分別加入PDA中配制成不同濃度含藥平板。即丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑濃度為3.125、6.25、12.5、25、50 mg/L；戊唑醇、多菌靈和吡唑醚菌酯濃度為6.25、12.5、25、50、100 mg/L；乙蒜素、嘧霉胺和咪鮮胺濃度為12.5、25、50、100、200 mg/L；啶氧菌酯和氟吡菌胺濃度為25、50、100、200、400 mg/L；嘧菌酯、肟菌酯和啶酰菌胺濃度為62.5、125、250、500、1 000 mg/L；代森錳鋅濃度為125、250、500、1 000、2 000 mg/L。每平板中央移入菌餅1塊，每濃度重復3次，以不含藥劑的PDA為對照， 28 ℃培養(yǎng)36 h，采用十字交叉法測量菌落直徑，計算相對抑菌率。以藥劑濃度對數(shù)值為自變量(x)，相對抑菌率的概率值為因變量(y)，進行線性回歸分析，建立毒力回歸方程，計算相關系數(shù)r和抑菌有效中濃度EC50和EC95。相對抑菌率(%)=(對照菌落直徑-藥劑處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-5)×100。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

數(shù)據(jù)用Excel 2019匯總、計算平均值和作圖，并采用SPSS 18.0軟件的Duncan’s新復極差法進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 pH值和培養(yǎng)溫度對菌絲生長的影響

從圖1可知，病原菌在pH值3.5～10.5范圍內均可以生長，培養(yǎng)36 h，病原菌菌落直徑13.62 mm以上。當pH值為4.5～5.5時，菌落生長最快且不同處理間差異不顯著(p<0.05)，菌落直徑最大可達64.48 mm。當pH值11.0時，病原菌停止生長。病原菌在10～40 ℃范圍內均可生長；培養(yǎng)36 h，以31～34 ℃時菌落生長最快，且差異不顯著(p<0.05)，菌落直徑最大可達68.15 mm。當溫度小于16 ℃或大于40 ℃時，病原菌生長緩慢，菌落直徑在7.63 mm以下。

注：不同小寫字母表示處理間存在顯著性差異(p<0.05)。

2.2 碳源、氮源和光照條件對菌絲生長的影響

從表1可知，供試碳源條件下，病原菌均可較好生長。培養(yǎng)36 h，病原菌在以蔗糖、甘油、D-半乳糖、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、D-木糖、乳糖、山梨醇和可溶性淀粉為碳源的培養(yǎng)基上生長差異不顯著，菌落直徑為43.20～59.64 mm。病原菌可利用11種供試氮源生長。在以硫酸銨和氯化銨為氮源的培養(yǎng)基上，病原菌生長最迅速，培養(yǎng)36 h，菌落直徑均在74 mm以上。以尿素為氮源的培養(yǎng)基上，病原菌生長最慢，其菌落直徑僅3.34 mm，顯著低于其他氮源處理(p<0.05)。

表1 不同碳源、氮源和培養(yǎng)光照條件對百香果果腐病菌可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae菌絲生長的影響

不同光照條件下，病原菌在PDA上的生長無顯著性差異，菌落直徑均在45 mm以上，說明光照對病原菌菌絲生長的影響不大。

2.3 殺菌劑對病原菌的室內毒力

從表2可知，供試14種殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用存在差異。其中，嘧霉胺的毒力最強，EC50為0.004 6 mg/L；其次為戊唑醇、多菌靈、苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑，其EC50均小于1 mg/L，分別為0.007 2、0.025 5、0.384 9和0.706 7 mg/L。毒力中等的為咪鮮胺、吡唑醚菌酯、乙蒜素和啶氧菌酯，EC506～76 mg/L。對病原菌的毒力效果較差的殺菌劑為代森錳鋅、肟菌酯、啶酰菌胺和嘧菌酯，EC50均大于100 mg/L。氟吡菌胺的毒力效果最差，其EC50高達1 152.317 6 mg/L。此外，丙環(huán)唑的EC95最小，為33.129 5 mg/L；其次是咪鮮胺和戊唑醇，EC95分別為46.596 5和90.545 9 mg/L，三者的EC95均小于100 mg/L；乙蒜素、苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅的EC95均小于1 000 mg/L，而其余藥劑的EC95均大于1 000 mg/L。

表2 14種殺菌劑對百香果果腐病菌可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae的室內毒力

3 結論與討論

可可毛色二孢作為一種寄主廣泛的植物病原真菌[16]，可引起多種植物果實病害，其生物學特性研究已有大量報道[17-22]。然而，來源于不同寄主的可可毛色二孢的生物學特性存在一定差異[22-24]。筆者2019年在廣西北流、百色等地調查中發(fā)現(xiàn)可可毛色二孢會引起百香果采后果腐病[14]。由于該病害是近年來在百香果上發(fā)生的新病害，目前關于其病原菌的生物學特性及藥劑篩選鮮見報道。研究結果表明，該病原菌在pH值3.5～10.5范圍內均可生長，以pH值4.5～5.5生長最好；10～40 ℃范圍內均可生長，以31～34 ℃生長最好，表明其適應性強，是一種嗜高溫的微生物。該結果與劉小玉等[24]、董章勇等[25]、戴利銘等[26]的報道基本一致。廣西百香果的采收期正值高溫多雨的夏季，濕熱的氣候為果腐病發(fā)生及病害傳播提供了有利條件。病原菌生長對碳源要求并不嚴格，均可利用供試的11種碳源；對氮源利用差異較大，最佳氮源為硫酸銨和氯化銨，利用尿素的能力最差。有研究表明，百香果果皮富含大量的營養(yǎng)物質[27]，這為病原菌的生長繁殖提供了條件。由于病原菌利用尿素的能力較差，因此，百香果施肥管理時，噴施含有尿素的葉面肥來補充氮肥，可利于控制該病害的發(fā)生和擴展。

8類14種殺菌劑的室內毒力測定結果表明，三唑類的丙環(huán)唑和戊唑醇、咪唑類的咪鮮胺對病原菌表現(xiàn)出較強的抑制作用，這與戴利銘等[26]、唐利華等[28]、劉樹森等[29]的研究相似。而苯并咪唑類、烷基多胺類、甲氧基丙烯酸酯類和酰胺類的供試殺菌劑對病原菌的EC95值均大于1 000 mg/L，表明這些藥劑對病原菌的抑制效果較差，因此在生產上不推薦使用這類藥劑防治百香果果腐病。由于不同類型的殺菌劑對病害的防治機理不同[30-32]，為避免重復施用單一殺菌劑而使病原菌產生抗藥性，可考慮交替使用不同類型的殺菌劑防治病害。此外，本研究調查發(fā)現(xiàn)，百香果果腐病菌主要通過果皮上的傷口侵染為害[14]。因此，為預防該病害發(fā)生，可在采收前全園噴施戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑等藥劑；采后則考慮使用咪鮮胺等藥劑。

本研究僅測定了不同殺菌劑對病原菌的室內毒力，由于田間環(huán)境較為復雜，且殺菌劑對病害的防治與病原菌孢子的抗逆性、殺菌劑的穩(wěn)定性、寄主植物的生長環(huán)境等諸多因素有關。因此，室內篩選藥劑在田間施用時，實際防效可能會存在差異。下一步我們將開展田間藥效試驗，進一步驗證殺菌劑的防效，為百香果果腐病的防治提供參考。