調(diào)胃消痞方對功能性消化不良大鼠胃腸運(yùn)動及炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用

韓 壯，邢賽賽，張勝華，徐 敏，王華寧

(1. 云南中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500；2. 河北大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071000；3. 云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650021)

功能性消化不良是指患者不存在相關(guān)器質(zhì)性病變，但長期存在上腹部脹或痛、早飽感、惡心、食欲不振等不適癥狀的一類臨床綜合征，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)以促進(jìn)胃腸動力、抑制胃酸分泌、根除幽門螺桿菌及抗焦慮抑郁等對癥治療為主，但多數(shù)患者接受治療后癥狀依然存在，且停藥后易于復(fù)發(fā)，給患者帶來較大負(fù)擔(dān)[1]。調(diào)胃消痞方具有疏肝健脾、清熱消痞的功效，前期臨床研究顯示該方可有效緩解脾虛濕熱型功能性消化不良患者的臨床癥狀，且改善胃脘脹悶、口干苦、大便不暢的效果優(yōu)于純西藥治療[2]；動物實驗發(fā)現(xiàn)，調(diào)胃消痞方可調(diào)節(jié)功能性消化不良大鼠體內(nèi)胃腸激素含量[3]，但其具體作用機(jī)制不明確。本實驗從胃腸運(yùn)動及炎癥反應(yīng)的角度，進(jìn)一步探討了調(diào)胃消痞方治療功能性消化不良的潛在作用機(jī)制，為將其開發(fā)成有效中成藥制劑，更廣泛地應(yīng)用于臨床奠定基礎(chǔ)。

1 實驗材料與方法

1.1實驗動物 SPF級SD大鼠40只，雌雄各半，體重(200±10)g，購于成都達(dá)碩生物技術(shù)有限公司，動物許可證號：SCXK(川)2020-063。飼養(yǎng)于云南中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗室，飼養(yǎng)條件：溫度(22±2)℃，日差小于4 ℃，相對濕度40%～70%，光照明暗交替(12 h/12 h)，所有大鼠均自由進(jìn)食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d。

1.2實驗藥物 調(diào)胃消痞方(由黨參、炒川楝子、白術(shù)、茯苓、延胡索、炒枳殼、紫蘇梗、炒神曲、蒲公英、竹茹、薏苡仁、甘草組成)，購于云南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房，由中藥房代煎，每劑煎煮3次，每次15～20 min，過濾、濃縮藥液；枸櫞酸莫沙必利片劑(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格：5.00 mg/片)，購于云南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院西藥房。參照《藥理實驗方法學(xué)》[4]，將調(diào)胃消痞方濃縮、調(diào)配成含生藥濃度為5.00 g/mL的藥液；枸櫞酸莫沙必利片劑研磨，以蒸餾水調(diào)配成濃度為0.50 mg/mL的藥液，以上藥液均滅菌，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3實驗主要試劑及儀器 大鼠干細(xì)胞生長因子(SCF)和白細(xì)胞介素-6(IL-6) ELISA試劑盒(江蘇卡爾文生物有限公司)；移液槍(德國Eppendorf)；ASP300S全自動脫水機(jī)、RM2235輪轉(zhuǎn)切片機(jī)、EG1150H+EG1130C組織包埋機(jī)、DM2500正置顯微鏡+圖文系統(tǒng)(德國 Leica)；高速離心機(jī)(德國Thermo Scientific Heraeus)；半固體營養(yǎng)糊(羧甲基纖維素鈉5 g、淀粉4 g、奶粉8 g、糖4 g、墨汁2 mL、蒸餾水125 mL，濃度為1.00 g/mL)。

1.4實驗方法 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后，隨機(jī)分為空白組、模型組、莫沙必利組、調(diào)胃消痞方組，每組10只。除空白組外，其余組大鼠采用國內(nèi)外公認(rèn)的“夾尾刺激聯(lián)合不規(guī)則喂食”[5]方法建立功能性消化不良模型。具體造模方法：大鼠采取自由進(jìn)水、單日進(jìn)食、雙日禁食喂養(yǎng)，喂養(yǎng)期間聯(lián)合進(jìn)行夾尾刺激，即以長鉗夾住大鼠尾部遠(yuǎn)端1/3處(力度適中，以不夾破大鼠尾部皮膚為度)，激怒其與同籠大鼠撕打，每天刺激3次，每次30 min，連續(xù)刺激7 d。若大鼠尾部出現(xiàn)夾破或在與同籠大鼠撕打過程中出現(xiàn)傷口，可予0.15%碘伏涂擦，以防止因大鼠皮膚破損處感染而干擾實驗數(shù)據(jù)。造模結(jié)束后，調(diào)胃消痞方組給予5.00 g/mL調(diào)胃消痞方藥液灌胃，莫沙必利組給予0.50 mg/mL枸櫞酸莫沙必利片劑藥液灌胃，空白組與模型組均給予等體積生理鹽水灌胃，均2 mL/次，每日1次，連續(xù)灌胃14 d。

1.5觀察指標(biāo)及方法

1.5.1大鼠一般情況 實驗過程中觀察并記錄各組大鼠精神狀態(tài)、活動、進(jìn)水、進(jìn)食、體重、排便等情況。

1.5.2胃排空率及小腸推進(jìn)率 灌胃結(jié)束后，各組大鼠禁食不禁水飼養(yǎng)，24 h后各組大鼠給予常溫半固體營養(yǎng)糊2 mL灌胃，30 min后予10%水合氯醛麻醉并處死大鼠。分離大鼠胃體，用潔凈濾紙拭干，稱重后沿胃大彎剪開胃體，充分洗凈胃體殘留營養(yǎng)糊，取潔凈濾紙拭干后再次稱重，兩次稱重的差值為胃內(nèi)殘留物重，計算胃內(nèi)殘留率(胃內(nèi)殘留率=胃內(nèi)殘留物重/灌胃營養(yǎng)糊重×100%)；分離大鼠小腸，測量小腸總長度及小腸推進(jìn)長度(黑色營養(yǎng)糊移行距離)，計算小腸推進(jìn)率(小腸推進(jìn)率=小腸推進(jìn)長度/小腸總長度×100%)。

1.5.3胃竇部組織病理學(xué)形態(tài) 選取各組大鼠一段胃竇部組織，采用HE染色法對胃竇部組織進(jìn)行固定、脫水、包埋、切片、染色等操作后，鏡下觀察胃竇部組織病理學(xué)形態(tài)。

1.5.4血清SCF、IL-6水平 各組大鼠完成麻醉后，腹主動脈采血4 mL，靜置30 min，以3 000 r/min離心15 min，取上清液，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒操作步驟檢測SCF、IL-6水平。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠一般情況比較 造模各組大鼠在造模前期均表現(xiàn)出驚恐、亂竄、抬高前肢等行為，進(jìn)食水量較適應(yīng)性喂養(yǎng)時有所減少；造模中期，大鼠煩躁，易被激怒，經(jīng)長鉗夾尾時抗拒性強(qiáng)，出現(xiàn)撞籠、啃咬長鉗及籠壁等應(yīng)激行為，夾尾結(jié)束后，與同籠大鼠撕打劇烈，進(jìn)食水量進(jìn)一步減少；造模后期，大鼠進(jìn)食水量明顯減少，精神狀態(tài)較差，毛色少澤，逐漸枯黃，糞便不成形，且伴有酸臭，夾尾刺激時反抗程度降低。灌胃期間，模型組大鼠上述表現(xiàn)無緩解，莫沙必利組和調(diào)胃消痞方組大鼠進(jìn)食水量有所增加，糞便逐漸成形。

2.2各組大鼠造模前后及干預(yù)后體重比較 各組大鼠造模前體重比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；造模后，各造模組大鼠體重均較空白組明顯降低(P均<0.05)；灌胃14 d后，與模型組比較，莫沙必利組、調(diào)胃消痞方組大鼠體重均明顯高于模型組(P均<0.05)，莫沙必利組與調(diào)胃消痞方組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 空白組和功能性消化不良各組大鼠造模前后及干預(yù)后體重比較

2.3各組大鼠胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率比較 與空白組比較，模型組大鼠胃內(nèi)殘留率明顯升高(P<0.05)，小腸推進(jìn)率明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，莫沙必利組、調(diào)胃消痞方組大鼠胃內(nèi)殘留率均明顯降低(P均<0.05)，小腸推進(jìn)率均明顯升高(P均<0.05)；調(diào)胃消痞方組大鼠小腸推進(jìn)率明顯高于莫沙必利組(P<0.05)，胃內(nèi)殘留率與莫沙必利組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 空白組和功能性消化不良各組大鼠胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率比較

2.4各組大鼠胃竇部組織病理學(xué)比較 模型組大鼠胃竇黏膜腺體排列正常，黏膜腺體中可見少量炎性細(xì)胞浸潤；空白組、莫沙必利組、調(diào)胃消痞方組大鼠胃壁組織結(jié)構(gòu)完整，胃竇黏膜無病理學(xué)變化，未見萎縮、糜爛、潰瘍、增生等，未見明顯炎性細(xì)胞浸潤。見圖1。

圖1 空白組和功能性消化不良各組大鼠胃竇部組織病理學(xué)形態(tài)(HE染色，×100)

2.5各組大鼠血清SCF、IL-6含量比較 與空白組比較，模型組大鼠血清SCF水平明顯降低(P<0.05)，血清IL-6水平明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，莫沙必利組、調(diào)胃消痞方組大鼠血清SCF水平均明顯升高(P均<0.05)，血清IL-6水平均明顯降低(P均<0.05)；調(diào)胃消痞方組大鼠血清IL-6水平明顯低于莫沙必利組(P<0.05)，血清SCF水平與莫沙必利組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 空白組和功能性消化不良各組大鼠血清SCF、IL-6水平比較

3 討 論

功能性消化不良屬中醫(yī)學(xué)“胃痞”“胃脘痛”“積滯”等范疇，新版功能性消化不良中醫(yī)診療指南中指出其多因脾胃功能受損，影響中焦氣機(jī)升降而發(fā)病[6]。云南省名中醫(yī)龍祖宏教授認(rèn)為，脾胃運(yùn)化失常、中焦氣機(jī)不暢是功能性消化不良發(fā)病的基本病機(jī)[7]，而“肝主疏泄”與“脾主運(yùn)化”密切相關(guān)，肝失疏泄可加重功能性消化不良患者早飽、腹脹、惡心等氣機(jī)不暢的表現(xiàn)；此外，功能性消化不良患者脾胃功能長期受損，體內(nèi)水濕無以運(yùn)化，郁而生熱，最終形成以脾虛為本，氣滯、濕熱并存的本虛標(biāo)實之證。

調(diào)胃消痞方是龍祖宏教授治療肝郁脾虛兼濕熱型功能性消化不良的自擬方，方中黨參益氣健脾，炒川楝子疏肝行氣，二者共為君藥；白術(shù)、茯苓加強(qiáng)黨參健脾之效，延胡索入肝脾兩經(jīng)，助君藥疏肝氣、行土氣，兼可止痛，三者共為臣藥；炒枳殼、紫蘇梗、炒神曲行中焦脾胃之氣，增強(qiáng)脾胃運(yùn)化消食功能，解決功能性消化不良中焦氣滯的問題，蒲公英、竹茹、薏苡仁是龍老清熱除濕的常用組合，用以解決功能性消化不良濕熱郁阻的問題，此六者共為佐藥；甘草調(diào)和諸藥為使藥。全方用藥精煉，具有疏肝健脾、清熱消痞的功效。且現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，蒲公英、薏苡仁清除濕熱的作用可減輕炎癥反應(yīng)[8-9]；炒川楝子、延胡索、紫蘇梗行氣解郁之效可調(diào)節(jié)患者焦慮抑郁等不良情緒[10]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，胃腸道運(yùn)動功能障礙及胃腸道局部炎癥反應(yīng)是功能性消化不良發(fā)病的重要機(jī)制。在胃腸運(yùn)動的調(diào)節(jié)過程中，Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICCs)及SCF/干細(xì)胞生長因子受體(c-kit)信號通路起到重要作用。ICCs是調(diào)控胃腸運(yùn)動的關(guān)鍵細(xì)胞，其能產(chǎn)生胃腸道平滑肌起步的慢波電位，形成慢波頻率，控制胃腸道活動進(jìn)行的時間、位置、頻率及走向，對胃腸道平滑肌的收縮起到?jīng)Q定性作用[11]。c-kit是ICCs的特異性標(biāo)志物，參與調(diào)節(jié)ICCs生長、發(fā)育、增殖、表型維持等過程。研究表明，失去c-kit陽性表達(dá)的ICCs不能誘導(dǎo)平滑肌產(chǎn)生收縮運(yùn)動[12]。SCF是c-kit的天然配體，二者結(jié)合后可調(diào)節(jié)ICCs增殖分化及結(jié)構(gòu)完整。實驗研究發(fā)現(xiàn)，SCF和c-kit含量降低可導(dǎo)致大鼠體內(nèi)SCF/c-kit信號通路受損，影響大鼠胃腸道ICCs增殖分化，誘導(dǎo)ICCs數(shù)量、形態(tài)及功能出現(xiàn)異常[13]。Kwon等[14]研究指出，隨著人或哺乳動物生理性衰老的發(fā)生，其消化道中SCF及c-kit表達(dá)會逐漸減少，ICCs也會隨之減少，導(dǎo)致胃腸道運(yùn)動功能減退，這已經(jīng)成為老年性功能性消化障礙重要的病理生理學(xué)基礎(chǔ)之一。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠造模后胃腸運(yùn)動明顯減弱，血清SCF水平較空白組明顯降低；調(diào)胃消痞方組大鼠胃腸運(yùn)動較模型組明顯改善，血清SCF水平較模型組明顯升高。考慮這或許是由于調(diào)胃消痞方升高大鼠血清SCF水平，通過參與調(diào)控ICCs及SCF/c-kit信號通路，以促進(jìn)大鼠胃腸運(yùn)動。

胃腸道黏膜局部受損，可促使炎性細(xì)胞浸潤并分泌大量炎性介質(zhì)，參與機(jī)體炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)胃腸黏膜通透性，誘導(dǎo)胃腸道局部炎癥反應(yīng)，引發(fā)胃腸功能紊亂[15]。IL-6是一種具有較強(qiáng)致炎作用的炎性因子，主要由T細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分泌，其可通過激活胃腸道黏膜下神經(jīng)元，影響胃腸道運(yùn)動功能，誘導(dǎo)功能性消化不良發(fā)生，其水平持續(xù)升高可明顯加重胃腸黏膜炎癥反應(yīng)，加重病情[16]。趙云準(zhǔn)等[17]研究發(fā)現(xiàn)，功能性消化不良患者血清IL-6水平遠(yuǎn)高于健康人群，經(jīng)奧美拉唑治療后，患者相關(guān)癥狀得到明顯緩解，血清IL-6水平明顯降低。Mac Giollabhui等[18]研究發(fā)現(xiàn)，IL-6表達(dá)升高與功能性消化不良患者焦慮抑郁等負(fù)面情緒的產(chǎn)生有關(guān)，且與劑量呈正相關(guān)，尤其在長期存在IL-6高表達(dá)的患者中，其不良情緒發(fā)生率更高，考慮與IL-6基于腦-腸軸雙向調(diào)節(jié)有關(guān)。對伴有焦慮抑郁的功能性消化不良患者采用精神類藥物治療后發(fā)現(xiàn)，功能性消化不良患者癥狀得到緩解的同時，血清IL-6水平也有所降低[19]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠血清IL-6水平較空白組明顯升高；予調(diào)胃消痞方灌胃后，血清IL-6水平明顯降低。說明血清IL-6水平與功能性消化不良發(fā)病有關(guān)，調(diào)胃消痞方可通過降低血清IL-6水平而減輕功能性消化不良大鼠胃腸黏膜炎癥反應(yīng)。

綜上所述，調(diào)胃消痞方可能通過升高血清SCF水平調(diào)節(jié)功能性消化不良大鼠胃腸運(yùn)動，通過降低血清IL-6水平減輕胃腸黏膜炎癥反應(yīng)。但功能性消化不良的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，調(diào)胃消痞方的作用機(jī)制還有待深入研究探討，以為臨床應(yīng)用提供更可靠的依據(jù)。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。