艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測HIV抗體影響因素研究

林婉珍

（連江縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，福建 福州 350500）

艾滋病是HIV病毒感染引起的人體免疫功能缺陷疾病，HIV病毒會(huì)攻擊人體CD4T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致患者的機(jī)體免疫力下降。由于存在嚴(yán)重的免疫功能缺陷，艾滋病患者機(jī)體容易受到各種病原微生物的侵襲，引發(fā)嚴(yán)重感染，并會(huì)增加惡性腫瘤疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，危及生命安全[1]。目前艾滋病無法根治，難以通過有效的治療方法，將患者體內(nèi)的HIV病毒完全清除，主要采取抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法，通過控制病毒復(fù)制的方式，延緩病情的進(jìn)展，降低疾病的危害性[2]。艾滋病的防治，需要根據(jù)HIV病毒的主要傳播途徑，采取針對性的阻斷措施，防止HIV病毒的傳播，保護(hù)自身及他人的健康[3]。人體在感染HIV病毒后，由無癥狀病毒攜帶者發(fā)展為艾滋病患者，往往會(huì)經(jīng)歷較為漫長的時(shí)間，難以根據(jù)患者的癥狀表現(xiàn)做出判斷。為了提高艾滋病的防治效果，降低疾病的傳播風(fēng)險(xiǎn)，尤其是存在高危性行為、同性戀人群、藥品依賴人群等這些特殊群體，應(yīng)該盡早進(jìn)行艾滋病篩查[4]。在艾滋病的篩查過程中，主要通過HIV抗體的檢測來判斷患者是否感染HIV病毒，將HIV抗體陽性檢出結(jié)果作為艾滋病初步診斷的重要依據(jù)[5]。在艾滋病初篩的實(shí)驗(yàn)室檢查中，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，進(jìn)行HIV抗體的檢測，能夠高效的完成檢測過程，快速篩出疑似結(jié)果，為進(jìn)一步地確診做準(zhǔn)備，便于及時(shí)、有效的展開治療。但是在HIV抗體檢測期間，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)受到多方面因素的干擾和影響，出現(xiàn)誤差的情況[6]。為了保障艾滋病篩查結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要密切關(guān)注酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的每個(gè)步驟、環(huán)節(jié)，嚴(yán)格進(jìn)行管理，規(guī)避任何細(xì)微的疏漏、差錯(cuò)，降低HIV抗體檢測結(jié)果的誤差。考慮到影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的相關(guān)因素，有針對性的加以防控，獲得更為精準(zhǔn)的艾滋病初篩結(jié)果。本研究選取2010年8月至2019年12月期間，在我單位參加自愿咨詢檢測（VCT）人群，娛樂場所人群及其他羈押人員共8 385例接受HIV抗體檢測作為研究對象。探討艾滋病初篩的檢測結(jié)果的影響因素，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 N一般資料 研究對象選取2010年8月至2019年12月在我單位參加自愿咨詢檢測（VCT）人群，娛樂場所人群及其他羈押人員共接受HIV抗體檢測的 8 385例作為研究對象。男性4 226例，女性4 159例，年齡23～65歲，平均年齡（45.07±6.81）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①資料完整。②自愿參與本研究，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并免疫系統(tǒng)疾病。②認(rèn)知障礙或精神疾病。③合并惡性腫瘤疾病。見表1。

表1 一般資料表

1.2 方法 在這10年期間，采集上述人群8 385例靜脈血，進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。期間用過廈門新創(chuàng)，珠海麗珠和北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司的ELISA試劑盒；酶標(biāo)儀和洗板機(jī)由帝肯生產(chǎn)，型號(hào)分別為sunrise，ydroflex.。試驗(yàn)嚴(yán)格按試劑說明書上操作，將96孔微孔板放置于酶標(biāo)儀板支架上，經(jīng)過加樣、孵育、洗板、加入底物溶液（A、B）等流程，加入終止液后，測量吸光度（OD）值，分析檢測結(jié)果。

結(jié)合HIV抗體確證檢測結(jié)果，認(rèn)真分析檢測操作、試劑選取、標(biāo)本質(zhì)量等方面的情況，從中找尋問題，得出相關(guān)的結(jié)論。

2 結(jié)果

2.1 艾滋病初篩陽性結(jié)果與確證結(jié)果 分析艾滋病初篩陽性結(jié)果與確證結(jié)果，在8 385例體檢者中篩查，艾滋病初篩結(jié)果為陽性47例，確證陽性32例，15例為陰性，準(zhǔn)確率為68.09%。

2.2 艾滋病初篩結(jié)果準(zhǔn)確性分析 在艾滋病初篩陽性的47例標(biāo)本中，確證陽性32例，分析艾滋病初篩結(jié)果準(zhǔn)確性的影響因素。檢測結(jié)果易受多種因素影響：①試劑：HIV試劑盒由上級(jí)單位（福州市疾控中心）中領(lǐng)取，均是經(jīng)過招標(biāo)的優(yōu)質(zhì)試劑盒。②標(biāo)準(zhǔn)化儀器：由上級(jí)單位使用艾滋病專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)采購的酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、溫控水浴箱、生物安全柜等標(biāo)準(zhǔn)配置。移液器準(zhǔn)確性每年由第三方檢測單位檢定。③規(guī)范操作方法，所有操作流程均按儀器，試劑說明書操作。④標(biāo)本質(zhì)量：溶血標(biāo)本的初篩假陽性率會(huì)增高。通常認(rèn)為，酶聯(lián)免疫法檢測陽性的準(zhǔn)確率在90%以上，但從這10年8 385例的HIV抗體抗體篩查檢測中回顧性分析發(fā)現(xiàn)，實(shí)際操作中準(zhǔn)確率約68.09%。

3 討論

3.1 艾滋病的發(fā)病機(jī)制及危害性 艾滋病是一種危害性極高的傳染性疾病，目前尚無有效的根治方法。不健康的性行為、不規(guī)范的輸血，均會(huì)增加艾滋病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。艾滋病的發(fā)生與進(jìn)展過程中，HIV病毒侵襲人體，嚴(yán)重?fù)p害患者的免疫系統(tǒng)，會(huì)破壞T淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞免疫缺陷[7]。在機(jī)體免疫功能顯著下降的情況下，患者發(fā)生機(jī)會(huì)性感染、罹患惡性腫瘤疾病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，對于全身多個(gè)系統(tǒng)的器官組織形成損害，進(jìn)而加重疾病的危害性。病情發(fā)展至晚期階段，患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)較高。艾滋病的發(fā)生，極大的威脅著患者的生存質(zhì)量。

HIV攜帶者以及艾滋病患者屬于傳染源，與他人存在性行為、血液接觸的情況下，傳播HIV病毒的風(fēng)險(xiǎn)較高[8]。艾滋病的潛伏期較長，患者在感染HIV病毒后，早期無顯著癥狀表現(xiàn)，病情的持續(xù)進(jìn)展，患者的機(jī)體免疫功能持續(xù)下降，引發(fā)多系統(tǒng)癥狀，疾病的危險(xiǎn)程度顯著增加。

3.2 艾滋病初篩對于疾病防治的重要性 艾滋病患者的治療中，主要采取抗病毒治療方法，核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白質(zhì)抑制劑均是常用的治療藥物，能夠產(chǎn)生抑制HIV病毒復(fù)制的作用，進(jìn)而延緩病情進(jìn)展。但由于無法徹底清除病毒，疾病仍存在持續(xù)傳播的風(fēng)險(xiǎn)，患者需要終身接受治療[9]。

艾滋病的早期治療，可以有效提高病情的控制效果，降低機(jī)會(huì)性感染、惡性腫瘤疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而減輕疾病的危害性，延長患者的生存時(shí)間。艾滋病的初篩為艾滋病的確診提供了非常好的前提條件。在HIV抗體檢測中，采集受檢者的靜脈血，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，可以高效、迅速的完成對血液樣本的HIV抗體初篩檢測。再經(jīng)確證實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)HIV抗體陽性時(shí)，說明患者感染HIV病毒，隨著病程的進(jìn)展而成為艾滋病患者[10]。

3.3 影響酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測結(jié)果的相關(guān)因素 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測HIV抗體為艾滋病的篩查提供可靠的參考依據(jù)，在臨床上足以體現(xiàn)它的應(yīng)用價(jià)值。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的過程較為復(fù)雜，任何步驟、環(huán)節(jié)出現(xiàn)差錯(cuò)，均會(huì)影響最終的檢測結(jié)果，導(dǎo)致假陽性結(jié)果或假陰性結(jié)果的產(chǎn)生，從而影響艾滋病的篩查。

3.3.1 血液樣本的質(zhì)量 血液樣本的質(zhì)量直接影響酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。在采血不當(dāng)或血樣未及時(shí)進(jìn)行分離，或在運(yùn)輸過程當(dāng)中發(fā)生了劇烈的振蕩等都會(huì)增加溶血的風(fēng)險(xiǎn)，就會(huì)影響血液樣本質(zhì)量。發(fā)生溶血后，實(shí)施酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行檢測，難以獲得準(zhǔn)確的HIV抗體檢測結(jié)果。溶血標(biāo)本初篩的結(jié)果與再次正常血樣送檢的確證結(jié)果相比，陽性率明顯增高，體現(xiàn)在“其他羈押人群”這模塊中，由于對此群體人員的采血，需外出至看守所，可能由于采血后運(yùn)輸不當(dāng)或是抽藥品依賴人員的血不順利而溶血所導(dǎo)致的檢測結(jié)果假陽性偏高。所以在送檢前，嚴(yán)格檢查血液質(zhì)量，存在溶血、污染的血液樣本，無法及時(shí)送檢，需要重新進(jìn)行采血。

3.3.2 不規(guī)范操作 相關(guān)工作人員未能嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，或加樣時(shí)使用帶有滑石粉手套等導(dǎo)致樣本受到污染，HIV抗體檢測結(jié)果會(huì)產(chǎn)生假陽性，就無法反應(yīng)樣本的真實(shí)與準(zhǔn)確性，在這一點(diǎn)上，我們曾用重復(fù)試驗(yàn)進(jìn)行排除得以證實(shí)使用帶有滑石粉的手套對試驗(yàn)的干擾造成假陽性率增高。在儲(chǔ)存血液樣本時(shí)，溫度的控制十分關(guān)鍵，對于HIV抗體檢測結(jié)果產(chǎn)生著重要的影響[11]。

3.3.3 試劑的選擇與儲(chǔ)存 在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測HIV抗體的過程中，試劑的選擇也是影響檢測結(jié)果的重要因素。選購靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時(shí)的優(yōu)良檢測試劑至關(guān)重要。如使用過期的試劑，試劑的運(yùn)輸、儲(chǔ)存未滿足2～8 ℃恒定條件的情況下，均會(huì)導(dǎo)致HIV抗體檢測結(jié)果出現(xiàn)誤差。在使用移液器時(shí)，未按照要求加入標(biāo)本和試劑，導(dǎo)致產(chǎn)生氣泡等、試驗(yàn)中溫度控制不佳，未能恒定保持37 ℃、在配制洗液、洗板等操作中，未嚴(yán)格遵循試劑說明書，出現(xiàn)錯(cuò)誤的操作、若纖維吸附現(xiàn)象的產(chǎn)生，導(dǎo)致洗板不干凈、HIV抗體檢測結(jié)果就會(huì)表現(xiàn)為假陽性，進(jìn)而影響準(zhǔn)確性。在加入顯色液時(shí)，避光措施不到位，出現(xiàn)陽光直射的情況，容易導(dǎo)致假陽性結(jié)果的產(chǎn)生[12]。

3.4 風(fēng)險(xiǎn)防控 艾滋病初篩的過程中，需要考慮到血液樣本質(zhì)量、試劑選擇以及試驗(yàn)操作等多方面因素對于HIV抗體檢測結(jié)果的影響，為了獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，需要盡量避免酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中的疏漏和差錯(cuò)。加強(qiáng)對風(fēng)險(xiǎn)因素的防控：首先，應(yīng)該充分保障血液樣本的質(zhì)量。采集血液樣本時(shí)，按照規(guī)范進(jìn)行采血操作，避免血液樣本受到污染。完成采血后，盡量立即送檢。無法立即送檢的情況下，需要在4 ℃的條件下保存。在運(yùn)輸血液樣本時(shí)，應(yīng)保持平穩(wěn)，避免出現(xiàn)強(qiáng)烈的振蕩而出現(xiàn)溶血。

進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，在保障血液樣本質(zhì)量的基礎(chǔ)上，還需要加強(qiáng)對試劑應(yīng)用的管理。根據(jù)試驗(yàn)的實(shí)際需要，選用相關(guān)試劑，并需要對試劑的保質(zhì)期進(jìn)行檢查。按照規(guī)定要求，對試劑進(jìn)行儲(chǔ)存、運(yùn)輸[13]。使用試劑時(shí)，在室溫條件下靜置，恢復(fù)至室溫后，再進(jìn)行檢測。針對酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的每一個(gè)步驟、環(huán)節(jié)，需要嚴(yán)格進(jìn)行監(jiān)管。相關(guān)工作人員需要嫻熟規(guī)范的操作各種儀器和設(shè)備，嚴(yán)格遵循各項(xiàng)操作規(guī)程，按照規(guī)定的溫度條件進(jìn)行試驗(yàn)[14]。加強(qiáng)對試驗(yàn)儀器、設(shè)備的日常維護(hù)，使用前檢查其運(yùn)行狀態(tài)，保障其安全、穩(wěn)定運(yùn)行，避免故障問題的發(fā)生。在溫育操作中，密切進(jìn)行溫度監(jiān)測，保持恒溫37 ℃。在避光條件下，加入顯色液。減少酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中的操作失誤，保障試驗(yàn)過程安全、順利的完成，避免各種因素的干擾和影響，可以進(jìn)一步提高HIV抗體監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性，進(jìn)而為艾滋病確診提供有價(jià)值的參考依據(jù)，便于及早進(jìn)行治療，有助于控制病情的穩(wěn)定，對于提高患者的生存質(zhì)量有著積極的影響。

綜上所述，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法進(jìn)行HIV抗體的檢測，為艾滋病的初篩提供可行性方法。我們需要考慮會(huì)影響酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測結(jié)果的相關(guān)因素，工作中，要求嫻熟地采集、運(yùn)輸、離心、保存血樣以避免溶血，保證血液樣本質(zhì)量、杜絕污染血樣對于檢測結(jié)果的影響。合理選用試劑，進(jìn)行規(guī)范化操作，正確地使用儀器，避免其中的疏漏和差錯(cuò)，進(jìn)而獲得精準(zhǔn)的檢測結(jié)果，為艾滋病的早期治療提供有價(jià)值的參考依據(jù)。當(dāng)然，根據(jù)國家檢測HIV策略，為了不漏檢HIV抗體陽性者，酶聯(lián)免疫試劑必須有較高的敏感性，使試劑檢測限度有一定的寬幅，這樣HIV抗體初篩就會(huì)存在一定假陽性。所以，初篩陽性結(jié)果與確證陽性結(jié)果不相符并不存在矛盾性。