減少?；肥褂眉拔U品產(chǎn)生的探索與實(shí)踐
——以生物學(xué)基礎(chǔ)課實(shí)驗(yàn)教學(xué)為例

周杰，王文燕，劉雙青，張芬，林愛華

（1.中南民族大學(xué) 實(shí)驗(yàn)教學(xué)與工程訓(xùn)練中心，湖北 武漢 430074；2.中南民族大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢 430074）

“倡導(dǎo)綠色實(shí)驗(yàn)，減少實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)化學(xué)品的使用”是實(shí)驗(yàn)室改革與發(fā)展的基本理念，也是實(shí)驗(yàn)教學(xué)始終面臨的一項(xiàng)需要不斷探索的重要課題。如何積極主動優(yōu)化實(shí)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備方法，不斷探索減少實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)化學(xué)品使用及危廢品的產(chǎn)生，確保實(shí)驗(yàn)室生物化學(xué)安全始終是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作的一項(xiàng)重要內(nèi)容。中南民族大學(xué)2014 年成立實(shí)驗(yàn)教學(xué)與實(shí)驗(yàn)室管理中心，將全校的基礎(chǔ)課程進(jìn)行整合，生命科學(xué)、藥學(xué)、生物醫(yī)學(xué)及資源與環(huán)境4個學(xué)院的基礎(chǔ)課程共計(jì)41 門歸類到基礎(chǔ)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室開設(shè)。經(jīng)過幾年的探索與實(shí)踐，生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容不斷改革、創(chuàng)新和發(fā)展，危險(xiǎn)化學(xué)品的使用量在不斷減少。但是作為具體配制使用生物學(xué)危化品的實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員，在長期的實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中深刻體會到關(guān)于生物學(xué)?；肥褂玫母母镞€有很大空間，如何積極主動地優(yōu)化實(shí)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備方法，不斷探索減少實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)化學(xué)品使用及危廢品的產(chǎn)生，確保實(shí)驗(yàn)室生物化學(xué)安全，始終是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作的一項(xiàng)重要內(nèi)容。

1 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中?；肥褂眉拔U品產(chǎn)生中的問題與矛盾

1.1 在?；瘜W(xué)品的使用及危廢品的產(chǎn)生中，實(shí)驗(yàn)老師和實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員關(guān)注的側(cè)重點(diǎn)不同

傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法是實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員根據(jù)實(shí)驗(yàn)老師提供的教學(xué)大綱，提前準(zhǔn)備好每一個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目需要試劑、耗材及儀器設(shè)備。這其中存在一個問題是，首先教學(xué)大綱是實(shí)驗(yàn)老師獨(dú)立于實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員之上的獨(dú)立決策，實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員無權(quán)參與，實(shí)驗(yàn)老師主要關(guān)注實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的完整性及培養(yǎng)方案中學(xué)生學(xué)時數(shù)的完成度，容易忽視危險(xiǎn)化學(xué)品的使用；而實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員關(guān)注的則是危險(xiǎn)化學(xué)品的使用情況，期待盡量少用或不用危險(xiǎn)化學(xué)品。例如分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，對于實(shí)驗(yàn)要求較高的《動物肝臟RNA 提取實(shí)驗(yàn)》，為了降低RNA 酶污染，實(shí)驗(yàn)老師要求實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員用DEPC 水(有致癌性）對所有的實(shí)驗(yàn)材料、工具、儀器設(shè)備等進(jìn)行徹底的RNA 酶處理，達(dá)到極致的要求。但是由于實(shí)驗(yàn)結(jié)果受多方面因素的影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果非常不穩(wěn)定。對待這一個問題，老師更多關(guān)注實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作是否到位，較少關(guān)注學(xué)生實(shí)驗(yàn)過程RNA 酶污染，而實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員則更多關(guān)注到學(xué)生實(shí)驗(yàn)過程中的RNA 酶污染；其次每個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目需要提前配制的危化品數(shù)量如何確定，實(shí)驗(yàn)老師關(guān)注實(shí)驗(yàn)的方便快捷和學(xué)生的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因而希望試劑配制數(shù)量多多益善，而實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員則需要嚴(yán)格訂購、保存、使用、管理危化品，認(rèn)真考慮存在的危險(xiǎn)性以及需要承擔(dān)的風(fēng)險(xiǎn)和責(zé)任，因而從自身安全及實(shí)驗(yàn)室安全考慮，則更為關(guān)注在實(shí)驗(yàn)教學(xué)課堂中盡量少用危險(xiǎn)化學(xué)品[1,2]。

1.2 實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員的勞動強(qiáng)度與實(shí)驗(yàn)課堂產(chǎn)生危廢品數(shù)量之間的矛盾

目前生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室每學(xué)年要面向全校4 個學(xué)院的本科生開設(shè)近6000 人次的生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，要使用大量的危險(xiǎn)化學(xué)品，同時產(chǎn)生大量的危廢品。因?yàn)樯飳W(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目多，需要使用的危險(xiǎn)化學(xué)品相對也較多，所以實(shí)驗(yàn)室要配制大量的有毒有害試劑（化生藥實(shí)驗(yàn)室的教學(xué)和科研都涉及到類似的情況）。但是有毒有害試劑的配制有一個特殊性：比如按照實(shí)驗(yàn)教案要求一堂實(shí)驗(yàn)課需要4 升有毒有害試劑，如果一次配制10 升的話，就能夠充分保證學(xué)生實(shí)驗(yàn)課堂的安全用量，應(yīng)付任何意外（學(xué)生操作失誤及重復(fù)實(shí)驗(yàn)等），一堂課下來實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員就可以輕輕松松過關(guān)、減少了很多的工作量。但是如果一次只配制5升的話，實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員就需要主動到實(shí)驗(yàn)課堂上指導(dǎo)學(xué)生危化品的使用及注意事項(xiàng)，并隨時關(guān)注實(shí)驗(yàn)教學(xué)課堂上學(xué)生實(shí)驗(yàn)動態(tài)以及是否會發(fā)生意外及重做的情況，時刻準(zhǔn)備重新熟練配制，以補(bǔ)充不足，保證實(shí)驗(yàn)課的順利進(jìn)行。這樣一來，對實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員來說必須參與到學(xué)生的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中去，整個實(shí)驗(yàn)課堂是緊張而忙綠的，而且要增加一倍的工作量，甚至受到老師和學(xué)生的誤解，但是結(jié)果是減少5 升“有毒有害廢液”的產(chǎn)生。每學(xué)期學(xué)校都要處理幾次危化品，數(shù)量也是觸目驚心的。這是一個很現(xiàn)實(shí)的但是又不容易引起注意和重視的問題。

1.3 實(shí)驗(yàn)老師對學(xué)生的管理難度與產(chǎn)生危廢品數(shù)量之間的矛盾

實(shí)驗(yàn)教學(xué)課堂的方便、快捷、安全和對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的追求是實(shí)驗(yàn)老師和學(xué)生關(guān)注的重點(diǎn)，但是如果單純追求方便、快捷，容易忽視實(shí)驗(yàn)過程中對實(shí)驗(yàn)學(xué)生的管理，實(shí)驗(yàn)教學(xué)課堂就容易產(chǎn)生大量的危廢品。比如在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，每個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的完成需要大量不同的試劑，在實(shí)驗(yàn)的過程中試劑的量取是使用移液器還是玻璃移液管，在實(shí)驗(yàn)老師、實(shí)驗(yàn)學(xué)生與實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員之間存在一個很大的分歧。傳統(tǒng)的方法是使用玻璃移液管，每取完一種試劑清洗一下移液管即可繼續(xù)使用，不產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)垃圾廢品，但是需要學(xué)生具備耐心、細(xì)心和較高的操作水平，而且在操作中有更多時間對實(shí)驗(yàn)原理和實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行思考。但是近幾年隨著實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)的提高和實(shí)驗(yàn)條件改善，實(shí)驗(yàn)老師和學(xué)生對實(shí)驗(yàn)設(shè)備和耗材的使用也提出了更高的要求。目前生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室面向3 個學(xué)院開設(shè)的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，許多實(shí)驗(yàn)老師就提出了要求使用移液器。移液器的使用的確方便、快捷，但是移液器價格昂貴，使用要求高，需要定期校準(zhǔn)，如果學(xué)生不能規(guī)范使用，不僅容易損壞而且很容易污染，而且進(jìn)一步造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確，無形之中又增加了危廢品的產(chǎn)生；每取完一種試劑就要更換一次塑料槍頭，一堂課下來就會產(chǎn)生大量的塑料槍頭垃圾，每學(xué)年僅塑料垃圾就幾十箱。

因?yàn)榻巧鸵暯堑牟煌?，?dǎo)致實(shí)驗(yàn)老師、實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員和實(shí)驗(yàn)學(xué)生之間矛盾的產(chǎn)生，進(jìn)而導(dǎo)致大量不必要危險(xiǎn)化學(xué)品但的使用及危廢品的產(chǎn)生，不僅造成了環(huán)境污染，也對廣大師生的身心健康帶來了一定的危害。是對于這一問題，無法完全從規(guī)章制度上對危險(xiǎn)化學(xué)品的使用及危廢品的產(chǎn)生進(jìn)行精準(zhǔn)的量化考核。首先這是一個“責(zé)任心”的問題，“責(zé)任心”是無法量化考核的；其次，還會引起更多的問題，比如導(dǎo)致危廢品直接進(jìn)下水道和垃圾箱。

2 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中生物化學(xué)安全現(xiàn)狀及采取的措施和方法

目前生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室每年訂購使用的?；芳跋鄳?yīng)危廢品的產(chǎn)生主要來自生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，生物化學(xué)的安全隱患也主要來自該實(shí)驗(yàn)室。我們從生物化學(xué)和分子生物學(xué)兩門實(shí)驗(yàn)教學(xué)課程入手，針對大量使用?；返膶?shí)驗(yàn)項(xiàng)目和大量產(chǎn)生危廢品的操作過程進(jìn)行梳理、討論，提出優(yōu)化方案，以實(shí)驗(yàn)教學(xué)課堂為平臺，通過學(xué)生的實(shí)驗(yàn)室開放，設(shè)計(jì)一系列實(shí)驗(yàn)對照，經(jīng)過全體師生全員參與進(jìn)行課堂驗(yàn)證，主動引導(dǎo)實(shí)驗(yàn)老師及實(shí)驗(yàn)學(xué)生不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)過程和實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備條件，在落小、落細(xì)、落實(shí)上下功夫，最大限度地減少?；返氖褂煤臀U品的產(chǎn)生。因此，需要實(shí)驗(yàn)老師和實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員及實(shí)驗(yàn)學(xué)生達(dá)成共識，共同制定一套完整的關(guān)于優(yōu)化實(shí)驗(yàn)教學(xué)和實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備方法、減少危險(xiǎn)化學(xué)品的使用和危廢品產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)教學(xué)方案，并在日后的實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中不斷進(jìn)行優(yōu)化改革[3-5]。

2.1 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)

2.1.1 現(xiàn)狀

（1）?；返氖褂?/p>

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中《糖的呈色反應(yīng)》涉及全校三個學(xué)院共10 個專業(yè)約600 個學(xué)生，是使用?；泛彤a(chǎn)生危廢品最多的實(shí)驗(yàn)，用到7 種?；罚ò饬蛩?、濃鹽酸、1-萘酚、蒽酮、間苯二酚、3,5-二羥基甲苯、乙酸），其中濃硫酸、濃鹽酸的用量很大，危險(xiǎn)性也最大。盡管各種預(yù)案及注意事項(xiàng)反復(fù)強(qiáng)調(diào)，但是由于實(shí)驗(yàn)學(xué)生數(shù)量龐大且學(xué)生的實(shí)際操作能力的局限等各種因素影響，各種事故時有發(fā)生。如由于試驗(yàn)品容易濺到學(xué)生皮膚上，給廣大師生造成了較大的恐慌；同時因?yàn)槭褂玫幕瘜W(xué)試劑較多，實(shí)驗(yàn)課堂學(xué)生數(shù)量爆滿，盡管開啟了通風(fēng)系統(tǒng)，但是在整個實(shí)驗(yàn)過程中，危險(xiǎn)化學(xué)品的氣味彌漫教室，空氣污濁，給廣大師生的身心健康帶來了一定的危害。由于儲存、配制、管理及實(shí)驗(yàn)廢液處理都有很大的危險(xiǎn)性，影響到實(shí)驗(yàn)室的安全；大量的廢液產(chǎn)生也造成了一定的社會危害，給實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員造成了一定的心理陰影。

（2）危廢品的產(chǎn)生

為了滿足實(shí)驗(yàn)老師及實(shí)驗(yàn)學(xué)生對實(shí)驗(yàn)試劑多多益善的要求，同時也減少實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員自身的工作量，試劑配制量一般在1.5～2.0 倍之間。特別是在危化品的配制方面，為保證不需要第二次配制，一般的配制余量都較大，這樣實(shí)驗(yàn)老師和實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員可以不深入課堂，不必為課堂是否出現(xiàn)重做情況而擔(dān)心，更不存在重新配制試劑的情況，既受到老師和學(xué)生的歡迎又減少了工作量，但結(jié)果是產(chǎn)生了大量的危廢品。

2.1.2 采取的措施及方法

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程關(guān)聯(lián)生科院、藥學(xué)院，生醫(yī)學(xué)院三個學(xué)院12 個專業(yè)共30 名老師和800 名學(xué)生，加上實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員，共隸屬4 個不同的行政單位。實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員作為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程教學(xué)團(tuán)隊(duì)的紐帶，必須自覺把握生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)?；返氖褂们闆r，提出合理可行的方案，通過與課程負(fù)責(zé)人及全體老師溝通協(xié)商，不斷改進(jìn)方案，并自覺作為方案實(shí)施的負(fù)責(zé)人，積極推動實(shí)施。

（1）促進(jìn)《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)》全體實(shí)驗(yàn)老師溝通交流

目前生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室已配合生科院完成了《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程》視頻錄制工作，內(nèi)容涵蓋3 個學(xué)院開設(shè)的《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程》的共10 個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，并在中南民族大學(xué)課程學(xué)習(xí)中心上線。生科院的學(xué)生統(tǒng)一進(jìn)入學(xué)習(xí)通進(jìn)行學(xué)習(xí)，通過碎片化時間進(jìn)行課前預(yù)習(xí)，提前了解實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)中?；返奈ｋU(xiǎn)性和注意事項(xiàng)，為減少課堂危化品的傷害起到了積極的作用。

在此基礎(chǔ)上，開展下一步工作，首先促成其他學(xué)院的學(xué)生統(tǒng)一進(jìn)入學(xué)習(xí)通進(jìn)行學(xué)習(xí)；其次組織參加開放實(shí)驗(yàn)的學(xué)生完成《糖的呈色反應(yīng)》實(shí)驗(yàn)中用到濃硫酸的毛利氏反應(yīng)和蒽酮反應(yīng)錄制短視頻，在課堂課件PPT 中演示，實(shí)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)教學(xué)課堂具體的實(shí)驗(yàn)操作中學(xué)生用水代替濃硫酸的試劑進(jìn)行假想模擬該實(shí)驗(yàn)，與視頻演示相配合，既實(shí)踐了一種操作方法，又避免使用濃硫酸，使得實(shí)驗(yàn)真實(shí)有趣、科學(xué)安全。

通過以上措施的實(shí)施，率先在生科院的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)《糖的呈色反應(yīng)》這一實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目中，去掉毛利氏反應(yīng)和蒽酮反應(yīng)的實(shí)際操作，減少實(shí)驗(yàn)室濃硫酸的使用。通過生科院學(xué)生實(shí)驗(yàn)效果考察及與其他學(xué)院實(shí)驗(yàn)老師的溝通交流進(jìn)一步推廣應(yīng)用其它學(xué)院的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，實(shí)現(xiàn)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室去濃硫酸實(shí)驗(yàn)的目的。

（2）實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員主動打造“綠色實(shí)驗(yàn)室”

結(jié)合歷年實(shí)驗(yàn)教學(xué)的課堂經(jīng)驗(yàn)，對需要配制的?；?，特別是《糖的呈色反應(yīng)》實(shí)驗(yàn)中需要的危化品試劑，由原來的1.5～2.0倍配制量降低到1.2 倍配制量，這樣實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員必須和實(shí)驗(yàn)老師一起深入課堂，指導(dǎo)學(xué)生正確量取?；吩噭?，既可以有效防止危險(xiǎn)發(fā)生，又能及時及時掌握試劑使用情況，如果出現(xiàn)重新實(shí)驗(yàn)的情況，實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員可以根據(jù)具體情況快速在各個小組之間調(diào)劑試，互補(bǔ)使用或快速重新熟練配制試劑，以保證學(xué)生實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。雖然實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員無形中增加了工作量，但是最大限度降低了危化品的使用和危廢品的產(chǎn)生。

目前三個學(xué)院開設(shè)的《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》有的學(xué)院操作使用玻璃移液管量取試劑，有的學(xué)院學(xué)院是使用移液槍。首先完成移液器和玻璃移液管的使用方法及使用注意事項(xiàng)錄制短視頻，在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)第一堂課的課件PPT 中演示，通過比較兩者使用的優(yōu)缺點(diǎn)，使學(xué)生形成感性認(rèn)識，并在實(shí)驗(yàn)開始前進(jìn)行移液器和玻璃移液管的使用練習(xí)；其次，逐步推進(jìn)使用玻璃移液管，生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)開設(shè)的特點(diǎn)是同一個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目分別在3 個不同的教室同時開設(shè)。首先在一個教室率先改用玻璃移液管，其他教室繼續(xù)對比使用移液槍，通過現(xiàn)場試驗(yàn)結(jié)果對照，用事實(shí)說話，促成老師和學(xué)生互相交流對比，最后達(dá)成共識，統(tǒng)一使用玻璃移液管。從源頭上減少危廢品的產(chǎn)生[5,6]。

2.2 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

2.2.1 現(xiàn)狀

（1）?；返氖褂?/p>

DNA、RNA 的相關(guān)內(nèi)容是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中必學(xué)知識點(diǎn)，每年要面向生命科學(xué)學(xué)院、藥學(xué)院、生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院有近八百名本科生開設(shè)相關(guān)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。但是目前實(shí)驗(yàn)室開設(shè)的《動物肝臟總RNA 提取實(shí)驗(yàn)》準(zhǔn)備工作相當(dāng)麻煩、工作量巨大，用到大量有毒有害的試劑（DEPC 水等），而且實(shí)驗(yàn)用到的試劑盒價值昂貴，加上實(shí)驗(yàn)結(jié)果受多方面的影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果很不穩(wěn)定。這個問題一直困擾實(shí)驗(yàn)老師、實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員和實(shí)驗(yàn)學(xué)生。其中如何降低RNA 酶污染，防止RNA 降解是該實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，是實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作的核心目標(biāo)和宗旨，也是實(shí)驗(yàn)課堂上實(shí)驗(yàn)老師科學(xué)指導(dǎo)與學(xué)生規(guī)范操作的根本任務(wù)。如何真正優(yōu)化RNA 提取實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作、實(shí)驗(yàn)過程及實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員和實(shí)驗(yàn)老師需要積極解決的問題[7,8]。

（2）危廢品的產(chǎn)生

為了防止實(shí)驗(yàn)過程中RNA 酶污染，實(shí)驗(yàn)老師要求1.5 mL Ep管及槍頭、槍頭盒必須用無RNase 的新購專用管，因此產(chǎn)生大量的塑料垃圾。實(shí)驗(yàn)老師鼓勵學(xué)生全程帶手套和口罩，整個實(shí)驗(yàn)課堂一個學(xué)生要更換幾次手套和口罩，產(chǎn)生大量的實(shí)驗(yàn)垃圾。

2.2.2 采取的措施及方法

RNA 酶是一類生物活性非常穩(wěn)定的酶類，除了細(xì)胞內(nèi)源RNA 酶外，外界環(huán)境中均存在RNA 酶，嚴(yán)格的RNA 提取實(shí)驗(yàn)必須在無RNase 的環(huán)境中進(jìn)行。但是由于實(shí)驗(yàn)條件所限，實(shí)驗(yàn)只能在教室的露天空氣中進(jìn)行，增加了外源RNA 酶污染潛在危險(xiǎn)，也給實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性帶來了一定的困難。

總結(jié)多年《動物總RNA 提取實(shí)驗(yàn)》課堂經(jīng)驗(yàn)，由于實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員準(zhǔn)備方法的不同，老師與學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作水平的不同，導(dǎo)致了實(shí)驗(yàn)過程及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的巨大差異?？偨Y(jié)發(fā)現(xiàn)，抑制細(xì)胞內(nèi)源RNA酶是順利產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵，抑制外源RNA 酶是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基本保證，但是實(shí)驗(yàn)操作速度及操作方法是控制外源RNA 酶的關(guān)鍵因素。

（1）關(guān)于細(xì)胞內(nèi)源RNA 酶抑制

①使用Trizol 試劑，已有文獻(xiàn)記載，Trizol 試劑中含有強(qiáng)烈的RNA 酶抑制劑，組織樣品用Trizol 充分研磨不用擔(dān)心RNA 的降解。②實(shí)驗(yàn)過程中用無Rnase 的0.1%DEPC 水（從生物公司購買）直接溶解RNA。③用75%乙醇（0.1%DEPC 水）做進(jìn)一步的處理，以上3 個措施已經(jīng)能夠充分抑制細(xì)胞內(nèi)源RNA 酶，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的合理性。

（2）關(guān)于外源RNA 酶抑制

設(shè)計(jì)一系列對照實(shí)驗(yàn)：①不同層次學(xué)生分三組進(jìn)行對照實(shí)驗(yàn)，A.參加湖北省生物學(xué)競賽的同學(xué)競賽前的實(shí)驗(yàn)室開放性訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)；B.已經(jīng)出色做過《動物總RNA 提取實(shí)驗(yàn)》的學(xué)生進(jìn)行第二次開放實(shí)驗(yàn)；C.隨機(jī)抽取第一次進(jìn)行《動物總RNA 提取實(shí)驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)課堂上的部分同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。每一組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的學(xué)生部分同學(xué)全程戴口罩手套、部分同學(xué)全程不戴口罩手套。②相同的實(shí)驗(yàn)條件下不同課堂進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對照。③不同實(shí)驗(yàn)條件下不同課堂進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對照。

2.2.3 實(shí)驗(yàn)效果比對

通過學(xué)生的開放實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證對照發(fā)現(xiàn)：①對實(shí)驗(yàn)耗材和玻璃器皿采用121℃、40min 高壓滅菌能夠滿足抑制外源RNA 酶的要求，達(dá)到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的合理性，與DEPC 水進(jìn)行處理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相差無幾，所以不需要延續(xù)多年傳統(tǒng)的方法使用大量的DEPC水進(jìn)行處理及采取一些極致措施來消除外源RNA 酶；②抑制外源RNA 酶的關(guān)鍵因素是學(xué)生的實(shí)際操作能力、實(shí)驗(yàn)操作速度和操作方法。

因此，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果對照，引導(dǎo)老師和學(xué)生把保證《動物肝臟總RNA 提取實(shí)驗(yàn)》成功的關(guān)注重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到加強(qiáng)課堂管理、提高學(xué)生操作技能培養(yǎng)上來。通過減少DEPC 水等危險(xiǎn)化學(xué)品的使用及塑料危廢品的產(chǎn)生，從根本上實(shí)現(xiàn)了“優(yōu)化《動物肝臟總RNA 提取實(shí)驗(yàn)》的實(shí)驗(yàn)過程及實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備方法，減少實(shí)驗(yàn)室危害”。

3 結(jié)語

高校生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室在開展實(shí)驗(yàn)教學(xué)活動過程中不可避免地要用到危險(xiǎn)化學(xué)品并產(chǎn)生危廢品，由于參與教學(xué)科研的人數(shù)眾多，高校生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室?；泛蛯?shí)驗(yàn)廢棄物已經(jīng)成為一個不容忽視的小型污染源，是實(shí)驗(yàn)室安全管理的一大隱患。而危廢品自行處理困難，都是由實(shí)驗(yàn)室自行回收后交專業(yè)公司進(jìn)行處理，不但影響環(huán)境而且花費(fèi)大量的處理費(fèi)。所以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備方法，從源頭上減少?；返氖褂煤臀U品的產(chǎn)生，是從根本上解決這一問題的關(guān)鍵。作者所在的中南民族大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，通過對大量使用危險(xiǎn)化學(xué)品的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目和大量產(chǎn)生危廢品的操作過程進(jìn)行梳理、討論并提出優(yōu)化方案，制定了一套完整的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)教學(xué)和實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備方法、減少危險(xiǎn)化學(xué)品的使用和危廢品產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)教學(xué)方案，并在具體的實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中進(jìn)行實(shí)施；實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員通過自覺行動和主動作為減少危化品的配制數(shù)量，并積極深入課堂指導(dǎo)監(jiān)督學(xué)生對?；返氖褂茫I(lǐng)老師和學(xué)生養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。通過上述一系列措施的實(shí)施，生物化學(xué)和分子生物學(xué)兩門實(shí)驗(yàn)課的?；肥褂昧亢臀U品的產(chǎn)生量都明顯降低，逐步實(shí)現(xiàn)了建設(shè)節(jié)能環(huán)保綠色實(shí)驗(yàn)室的管理理念，并在日后的實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中不斷進(jìn)行優(yōu)化改革[9，10]。