菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊生長性能、瘤胃發(fā)酵和細(xì)菌菌群的影響

畢夢凡 王 平 王利軍 劉超齊 左瑞雨 朱湲湲 尹清強(qiáng) 寧長申 常 娟*

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，鄭州 450046；2.河南省畜牧總站，鄭州 450008)

益生菌、酶制劑等具有促進(jìn)反芻動物瘤胃微生態(tài)系統(tǒng)發(fā)育、提高瘤胃消化能力和腸道營養(yǎng)物質(zhì)吸收、恢復(fù)胃腸道微生物群落、抑制病原菌定植以及增強(qiáng)黏膜免疫力的作用，從而能夠提高反芻動物生長性能，維持瘤胃內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[1]。米曲霉是曲霉屬真菌中的一種絲狀真菌，具有產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶等復(fù)合酶類的作用，其代謝產(chǎn)物可以刺激纖維素分解菌的生長，提高飼糧中纖維的消化率，改善瘤胃發(fā)酵功能[2]。產(chǎn)朊假絲酵母不僅具有氨基酸組成平衡、蛋白質(zhì)含量高的特點(diǎn)，而且其細(xì)胞壁中含有的β-葡聚糖、葡甘露聚糖和甘露糖蛋白具有抑制細(xì)胞DNA損傷、抗氧化、抗突變和抗毒活性的作用[3-4]。纖維素酶主要是由細(xì)菌和真菌發(fā)酵產(chǎn)生的一種高活性的微生態(tài)制劑，可以降解植物性飼糧中粗纖維、植酸等難降解的物質(zhì)，提高飼糧利用率，提高反芻動物生長性能[5-6]。Zerby等[7]研究表明，在綿羊飼糧中添加1 g/d的米曲霉培養(yǎng)物可有效提高綿羊的平均日增重(ADG)。丁洪濤等[8]研究發(fā)現(xiàn)，添加產(chǎn)朊假絲酵母可以提高奶牛瘤胃氨態(tài)氮(NH3-N)和總揮發(fā)性脂肪酸含量，改善瘤胃發(fā)酵。肖杰等[9]在育肥湖羊飼糧中添加0.1%的纖維素酶顯著提高了湖羊ADG，降低了料重比(F/G)，改善了育肥湖羊生長性能。姜碧薇等[10]研究表明，纖維素酶與復(fù)合益生菌(主要成分為酵母菌、枯草芽孢桿菌和乳酸菌)混合處理稻草和苜蓿干草可顯著提高灘羊ADG，降低F/G，改善瘤胃細(xì)菌多樣性。由此可見，米曲霉、產(chǎn)朊假絲酵母及纖維素酶具有提高動物生長性能、促進(jìn)瘤胃發(fā)酵、改善瘤胃細(xì)菌豐富度及多樣性的作用，但三者復(fù)合對反芻動物的研究相對較少。因此，本研究用菌酶復(fù)合制劑飼喂育肥湖羊，探究對其生長性能、瘤胃發(fā)酵參數(shù)和細(xì)菌菌群的影響，并篩選出適宜的添加水平，為菌酶復(fù)合制劑在育肥湖羊生產(chǎn)的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用菌酶復(fù)合制劑由河南某生物制品有限公司提供，由米曲霉(孢子數(shù)5×109個/g)、產(chǎn)朊假絲酵母(活菌數(shù)5×109CFU/g)及纖維素酶(15 000 FPU/g DM)組成。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇156只60日齡、體重在17 kg左右且健康狀況良好的雄性育肥湖羊，隨機(jī)分為4個組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)13只羊。對照組(A組)飼喂基礎(chǔ)飼糧(全價(jià)顆粒飼糧)，試驗(yàn)組飼喂在基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上分別添加0.1%(B組)、0.2%(C組)和0.3%(D組)菌酶復(fù)合制劑的飼糧。菌酶復(fù)合制劑在每次飼喂時按照質(zhì)量比混于基礎(chǔ)飼糧中進(jìn)行飼喂。

1.3 試驗(yàn)飼糧及飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)于2020年9月至2020年11月在河南省漯河市某養(yǎng)殖場進(jìn)行，預(yù)試期7 d，正試期60 d。每天于06:00和16:00進(jìn)行飼喂，自由采食，自由飲水，其他飼養(yǎng)管理按養(yǎng)殖場規(guī)定執(zhí)行。基礎(chǔ)飼糧按照我國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 816—2004《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》和場區(qū)生產(chǎn)實(shí)踐配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 指標(biāo)測定及方法

1.4.1 生長性能測定

正試期第1天、第30天及第60天早晨對每只試驗(yàn)羊空腹稱重，計(jì)算每只羊第1～30天、第31～60天及第1～60天的ADG。以重復(fù)為單位每天記錄喂料量及剩料量，計(jì)算第1～30天、第31～60天及第1～60天的平均日采食量(ADFI)。根據(jù)ADG及ADFI計(jì)算F/G。

1.4.2 養(yǎng)分表觀消化率測定

正試期結(jié)束前3 d，每組隨機(jī)選擇3只試驗(yàn)羊進(jìn)行消化試驗(yàn)，采用全收糞法且每只羊單欄飼喂，于每日06:00和16:00飼喂后采集全部糞樣并稱重，連續(xù)采集3 d，同時記錄采食量。按照每天采集的鮮糞重的10%加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的稀硫酸固氮，混勻，最后1 d采集結(jié)束后將采集的所有糞樣以重復(fù)為單位混勻，按總重的5%取樣，于65 ℃條件下烘干后置于室溫回潮24 h，粉碎過40目篩，裝于自封袋中備用；同時采集飼糧樣品。飼糧和糞樣中干物質(zhì)(DM)、有機(jī)物(OM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、粗脂肪(EE)、鈣(Ca)、磷(P)含量分別采用GB/T 6435—1986、GB/T 6434—2006、GB/T 6432—2018(凱氏定氮法)、GB/T 6433—2006、GB/T 6436—2002和GB/T 6437—2018方法測定，中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量測定參照Van Soest等[11]的方法。養(yǎng)分表觀消化率計(jì)算公式如下：

養(yǎng)分表觀消化率(%)=100×[(攝入養(yǎng)分量-
排出養(yǎng)分量)/攝入養(yǎng)分量]。

1.4.3 瘤胃液的采集與處理

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每個重復(fù)隨機(jī)挑選2只羊，使用瘤胃液采集管空腹采集瘤胃液，采集的第1管先棄掉，繼續(xù)采集并于4層紗布過濾后分別裝于50 mL離心管及5 mL凍存管中。50 mL離心管置于冰盒中保存，回到實(shí)驗(yàn)室后轉(zhuǎn)移至-20 ℃冰箱保存，用于瘤胃pH、NH3-N及揮發(fā)性脂肪酸(VFA)含量的測定；5 mL凍存管置于液氮中保存，回到實(shí)驗(yàn)室后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存，用于瘤胃細(xì)菌菌群的測定。其中，NH3-N含量采用苯酚-次氯酸鈉比色法[12]測定；瘤胃VFA含量采用離子色譜法測定[13]。

1.4.4 瘤胃細(xì)菌菌群測序

瘤胃細(xì)菌菌群測序由上海派森諾生物科技股份有限公司完成，采用16S rRNA進(jìn)行測序，擴(kuò)增區(qū)域?yàn)閂3～V4區(qū)，引物對為338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)，擴(kuò)增片段長度為480 bp。首先按照基因組DNA提取試劑盒提取樣品總DNA，采用Illumina NovaSeq測序平臺根據(jù)序列質(zhì)量進(jìn)行初步篩查；對問題樣本進(jìn)行重測、補(bǔ)測。通過質(zhì)量初篩的原始序列按照index和barcode信息，進(jìn)行文庫和樣本劃分，并去除barcode序列。之后按照DADA2分析流程進(jìn)行序列去噪得到操作分類單元(OTU)代表序列，使用QIIME2軟件進(jìn)行alpha多樣性分析、物種分類學(xué)注釋及物種組成分析。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel 2016進(jìn)行整理，采用SPSS 26.0軟件對所測數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏法多重比較，A組和D組瘤胃細(xì)菌菌群差異采用t檢驗(yàn)，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊生長性能的影響

由表2可知，與A組相比，D組育肥湖羊第60天體重顯著提高(P<0.05)；且D組第31～60天及第1～60天ADG顯著提高了14.89%和11.13%(P<0.05)，F(xiàn)/G顯著降低了12.54%和9.51%(P<0.05)。B組和C組育肥湖羊第60天體重及整個試驗(yàn)期的ADG和F/G與A組相比均無顯著差異(P>0.05)。各組育肥湖羊各階段ADFI之間均無顯著差異(P>0.05)。

2.2 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響

由表3可知，與A組相比，B組、C組和D組ADF表觀消化率顯著提高(P<0.05)，分別提高了15.08%、14.95%和9.73%，且各試驗(yàn)組間差異不顯著(P>0.05)。與A組相比，B組、C組和D組NDF表觀消化率分別提高了5.16%(P<0.05)、4.76%(P<0.05)和1.43%(P>0.05)。各組其他養(yǎng)分表觀消化率之間均無顯著差異(P>0.05)。

2.3 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

由表4可知，D組育肥湖羊瘤胃pH顯著低于A組、B組和C組(P<0.05)，且A組、B組和C組3組之間瘤胃pH差異不顯著(P>0.05)。與A組相比，B組、C組和D組瘤胃NH3-N含量分別顯著提高了54.72%、76.38%和66.13%(P<0.05)。VFA含量方面，與A組相比，B組、C組和D組瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸、丙酸和異丁酸含量顯著降低(P<0.05)；B組和D組瘤胃丁酸含量顯著降低(P<0.05)。

表2 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊生長性能的影響

表3 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響

2.4 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群的影響

與A組相比，D組育肥湖羊生長性能顯著提高，因此，隨機(jī)選擇A組和D組4個重復(fù)的瘤胃液樣品進(jìn)行16S rRNA測序分析。

2.4.1 育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群alpha多樣性分析

通過對A組和D組的8個瘤胃液樣品進(jìn)行測序共獲得683 155條序列，經(jīng)質(zhì)量過濾、去噪后共獲得594 522條有效序列，每個樣品至少產(chǎn)生67 798條有效序列，平均產(chǎn)生74 315條有效序列。由圖1可知，隨著測序深度的增加，稀釋曲線末端均趨于平緩，表明測序結(jié)果已足夠反映當(dāng)前樣本的多樣性，繼續(xù)增加測序深度已無法檢測到新的OTU。

通過對A組和D組瘤胃細(xì)菌菌群進(jìn)行alpha多樣性分析(表5)可知，2組之間反映物種豐富度的Chao1指數(shù)、OTU數(shù)量以及反映物種多樣性的Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)均差異不顯著(P>0.05)，這表明飼糧添加0.3%菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群豐富度和多樣性均無顯著影響；且2組的覆蓋度都達(dá)到了99%以上，這說明樣本中未被檢測出的物種所占的比例較低。

表4 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

A1、A2、A3和A4分別為A組的4個樣品；D1、D2、D3和D4分別為D組的4個樣品。A1, A2, A3 and A4 were 4 samples in group A, respectively; D1, D2, D3 and D4 were 4 samples in group D, respectively.

2.4.2 育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群組成結(jié)構(gòu)分析

由表6可知，A組和D組育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群在門水平前10種菌門中的優(yōu)勢菌門為厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)。與A組相比，D組擬桿菌門和TM7的相對豐度顯著降低(P<0.05)，分別降低了18.57%和39.29%；D組放線菌門(Actinobacteria)和藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)的相對豐度顯著提高(P<0.05)；2組其他菌門的相對豐度之間差異均不顯著(P>0.05)。

由表7可知，在屬水平前10種菌屬中，普雷沃氏菌屬(Prevotella)和瘤胃球菌屬(Ruminococcus)為瘤胃中的優(yōu)勢菌屬。與A組相比，D組歐陸森氏菌屬(Olsenella)的相對豐度顯著提高(P<0.05)，YRC22的相對豐度顯著降低(P<0.05)，其他菌屬的相對豐度差異均不顯著(P>0.05)。

2.4.3 育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群相關(guān)性分析

為了進(jìn)一步探究瘤胃細(xì)菌菌群對育肥湖羊生長性能和瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響，將屬水平前10種的細(xì)菌與育肥湖羊ADG、NDF和ADF表觀消化率以及瘤胃pH、NH3-N、乙酸、丙酸和丁酸含量進(jìn)行相關(guān)性分析，由相關(guān)性熱圖(圖2)可知，在屬水平前10種菌群中，僅有密螺旋體屬(Treponema)和歐陸森氏菌屬相對豐度與這些因素具有顯著相關(guān)性，其中密螺旋體屬相對豐度與NDF表觀消化率和瘤胃NH3-N含量呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)；歐陸森氏菌屬相對豐度與ADF表觀消化率呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，與瘤胃pH和丙酸含量呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

表5 育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群alpha多樣性分析

表6 育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群在門水平上的組成

表7 育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群在屬水平上的組成

3 討 論

3.1 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊生長性能的影響

益生菌及酶制劑等飼料添加劑具有調(diào)控動物胃腸道微生物群落的作用，從而能夠減少致病菌的增殖，提高動物生長性能[14]。Kritas等[15]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加益生菌制劑可以顯著提高羔羊體重。邱玉朗等[16]研究發(fā)現(xiàn)，用復(fù)合益生菌飼喂小尾寒羊可以顯著提高其ADG，降低F/G。本試驗(yàn)在飼糧中添加米曲霉、產(chǎn)朊假絲酵母及纖維素酶復(fù)合的菌酶制劑飼喂育肥湖羊，結(jié)果表明菌酶復(fù)合制劑可以提高育肥湖羊生長性能，其中0.3%菌酶復(fù)合制劑添加組在試驗(yàn)后期和整個試驗(yàn)期的ADG顯著提高，F(xiàn)/G顯著降低，這表明復(fù)合益生菌和纖維素酶復(fù)合制劑對動物的促生長作用需要有一定的過程，長期添加菌酶復(fù)合制劑對提高湖羊的ADG和飼料利用率具有顯著的效果。本試驗(yàn)中，飼糧添加0.3%菌酶復(fù)合制劑對湖羊的促生長效果最優(yōu)，但是否隨著菌酶復(fù)合制劑添加水平的提高會有更優(yōu)的效果，有待進(jìn)一步研究；不過，考慮到實(shí)際生產(chǎn)成本等因素，0.3%菌酶復(fù)合制劑為可接受的最優(yōu)添加水平。菌酶復(fù)合制劑提高了湖羊ADG，降低了F/G，這也與其提高飼糧中纖維的表觀消化率結(jié)果相一致。本試驗(yàn)中，飼糧添加菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊ADFI并無影響，這與Hernández等[17]和李忠玲等[18]的研究結(jié)果一致，但也有研究表明使用菌酶制劑可以提高羔羊采食量[19]。這可能是由于益生菌及酶制劑種類不同，造成的試驗(yàn)結(jié)果也不一致。

“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01?！?” indicated P< 0.05, and “**” indicated P<0.01.

3.2 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響

反芻動物飼糧中大部分可消化的營養(yǎng)物質(zhì)都在瘤胃內(nèi)被消化，并且瘤胃具有消化纖維素、半纖維素等結(jié)構(gòu)性碳水化合物的能力[20]。米曲霉、產(chǎn)朊假絲酵母及其代謝產(chǎn)物具有促進(jìn)纖維素分解菌生長、提高纖維素酶活性以及提高飼糧中纖維消化率的作用[21]。王紅梅等[22]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加復(fù)合酶制劑可以顯著提高肉羊NDF和ADF的消化率。曾輝等[23]研究發(fā)現(xiàn)，使用酶制劑與乳酸菌復(fù)合發(fā)酵玉米秸稈，顯著提高了玉米秸稈中NDF和ADF的降解率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加不同水平的菌酶復(fù)合制劑均可以提高飼糧中ADF和NDF的表觀消化率，這可能是由于添加的菌酶復(fù)合制劑提高了湖羊瘤胃內(nèi)纖維素分解菌及纖維素酶的活性[24]；同時，NDF和ADF表觀消化率的提高也促進(jìn)了湖羊生長性能的提高。

3.3 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

瘤胃pH穩(wěn)定是瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的基礎(chǔ)，也是瘤胃正常發(fā)揮作用的保證[25]。NH3-N是瘤胃蛋白質(zhì)代謝的中間產(chǎn)物，是瘤胃微生物蛋白合成的主要成分之一，為瘤胃微生物的生長提供氮源[26]。VFA是瘤胃降解飼糧中碳水化合物的產(chǎn)物，為反芻動物的生長發(fā)育提供能量[27]。蘇麗萍等[28]研究表明，飼糧添加復(fù)合酶制劑可以顯著降低青海育肥藏系羔羊瘤胃pH，顯著提高NH3-N含量。牛建康[29]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂活性干酵母可以提高泌乳牛瘤胃中VFA的含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，D組瘤胃pH顯著降低，但各組瘤胃pH測定值總體偏高，這可能一方面與基礎(chǔ)飼糧中添加小蘇打有關(guān)，另一方面與飼喂顆粒飼糧等因素有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)中，與A組相比，B組、C組和D組瘤胃NH3-N含量顯著升高，這可能是由于添加菌酶復(fù)合制劑促進(jìn)了瘤胃中蛋白質(zhì)的降解，從而顯著提高了瘤胃NH3-N的含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與A組相比，B組、C組和D組瘤胃中總揮發(fā)性脂肪酸、丙酸、丁酸及異丁酸的含量降低，這可能是由于菌酶復(fù)合制劑改變了與瘤胃VFA相關(guān)微生物的豐度，從而影響了瘤胃內(nèi)VFA的含量。

3.4 菌酶復(fù)合制劑對育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群的影響

反芻動物瘤胃是一個復(fù)雜的動態(tài)微生態(tài)系統(tǒng)，由大量不同的微生物組成，具有高度的微生物多樣性，且各種微生物處于平衡狀態(tài)，維持瘤胃內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[30]。厚壁菌門和擬桿菌門是反芻動物瘤胃門水平上的優(yōu)勢菌群，占整個瘤胃細(xì)菌的比例較大[31]，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。研究表明，擬桿菌門與厚壁菌門比值降低，有利于營養(yǎng)物質(zhì)吸收以及脂肪沉積[32]，本試驗(yàn)中，D組擬桿菌門相對豐度顯著低于A組，使D組擬桿菌門與厚壁菌門比值降低，這與D組生長性能提高相對應(yīng)。放線菌門是瘤胃中一類重要的革蘭氏陽性菌，是瘤胃微生物生命中的常規(guī)成員[33]。研究發(fā)現(xiàn)，放線菌門占瘤胃細(xì)菌總數(shù)的3%左右[34]，本試驗(yàn)中D組放線菌門相對豐度顯著高于A組，但其值在正常范圍內(nèi)，而A組放線菌門相對豐度值較低，可能是由于A組擬桿菌門相對豐度較高，抑制了放線菌門的生長。鐘港等[35]研究由復(fù)合益生菌發(fā)酵菌糠替代白酒糟對育肥牛瘤胃微生物群落的影響，結(jié)果表明，飼喂發(fā)酵菌糠可以顯著降低TM7的相對豐度。本試驗(yàn)中，D組TM7相對豐度顯著低于A組，但其在瘤胃中的作用尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)藻菌門中具有硝酸鹽還原菌，可以將硝酸鹽以同化或異化的方式還原為氨[36]。本試驗(yàn)中，D組藍(lán)藻菌門相對豐度顯著高于A組，可能是由于菌酶復(fù)合制劑促進(jìn)了瘤胃內(nèi)可利用硝酸鹽的微生物生長，同時也與D組瘤胃NH3-N含量顯著提高相對應(yīng)。

本試驗(yàn)中，育肥湖羊瘤胃細(xì)菌菌群屬水平上占比最大的2種菌屬為普雷沃氏菌屬和瘤胃球菌屬，分別屬于擬桿菌門和厚壁菌門。同時，A組和D組普雷沃氏菌屬和瘤胃球菌屬相對豐度差異均不顯著，這說明飼糧添加菌酶復(fù)合制劑不會影響育肥湖羊瘤胃中優(yōu)勢菌屬的相對豐度。歐陸森氏菌屬屬于放線菌門，研究表明，小鼠在攝入低聚糖后，腸道菌群中歐陸森氏菌屬和放線菌門的相對豐度顯著提高，并提出歐陸森氏菌屬具有利用低聚糖的觀點(diǎn)[37]。Mager等[38]將歐陸森氏菌屬與免疫檢查點(diǎn)抑制劑一起植入無菌小鼠體內(nèi)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)歐陸森氏菌屬在小鼠癌癥模型中可以顯著增強(qiáng)免疫治療的效力。本試驗(yàn)中，與A組相比，D組歐陸森氏菌屬相對豐度顯著提高，說明飼糧添加菌酶復(fù)合制劑可以提高瘤胃對飼糧中低聚糖的分解利用，同時提高動物機(jī)體的免疫能力；同時，D組歐陸森氏菌屬相對豐度的提高也是導(dǎo)致門水平放線菌門相對豐度高于A組的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)，YRC22相對豐度與瘤胃中乙酸含量呈正相關(guān)，但其在瘤胃中的生理功能還有待探究[39]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，D組YRC22相對豐度顯著低于A組，與D組瘤胃乙酸含量低于A組對應(yīng)。

此外，本試驗(yàn)通過研究瘤胃細(xì)菌與環(huán)境因子之間相互影響的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，密螺旋體屬相對豐度與NDF表觀消化率和瘤胃NH3-N含量呈極顯著正相關(guān)，密螺旋體屬屬于厚壁菌門，能夠降解粗飼糧中含有的半纖維素，且能夠幫助纖維分解菌參與纖維素的降解[40]。本試驗(yàn)中，D組瘤胃中密螺旋體屬相對豐度在數(shù)值上大于A組，與D組NDF和ADF表觀消化率以及瘤胃NH3-N含量的提高相對應(yīng)。本試驗(yàn)中，歐陸森氏菌屬相對豐度與ADF表觀消化率呈顯著正相關(guān)，與瘤胃pH和丙酸含量呈顯著負(fù)相關(guān)；與A組相比，D組歐陸森氏菌屬相對豐度顯著提高，這與D組育肥湖羊ADF表觀消化率的提高以及瘤胃pH和丙酸含量的降低相對應(yīng)。

4 結(jié) 論

在育肥湖羊飼糧中添加0.3%的菌酶復(fù)合制劑可以：

① 提高育肥湖羊ADG，降低F/G，提高飼糧ADF表觀消化率；② 降低瘤胃擬桿菌門與厚壁菌門比值，有利于能量利用；同時，提高瘤胃歐陸森氏菌屬相對豐度，其與ADF表觀消化率呈顯著正相關(guān)，有助于提高育肥湖羊?qū)︼暭Z中纖維的消化率。