復合添加劑對寧都黃雞生長性能、血清免疫和抗氧化功能以及腸道健康的影響

宋瓊莉 宋文靜 鄒志恒 陳小連 韋啟鵬 劉林秀 熊平文 楊 亭 饒煜玲

我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求自2020年7月1日起，飼糧中禁止使用除中草藥外的促生長類藥物飼料添加劑。在“禁抗”的大背景下，尋找綠色、安全和高效的抗生素替代品成為研究熱點。丁酸鈉是一種有機酸鹽，無污染、無有害殘留，能夠刺激腸上皮細胞增殖和分化，并增強腸道屏障功能[1]，具有維持腸道完整性、改善腸道形態(tài)以及提高免疫力和抗病力的作用[2]。黃芪素為黃芪提取物，其有益成分為黃芪多糖和黃芪甲苷等，具有多種生物活性，可提高巨噬細胞活性，具有抗衰老、抗氧化、抗病毒、抗菌和抗癌等功效[3]，且作為飼料添加劑使用時具有增強動物機體免疫力、提高成活率以及促進動物生長發(fā)育等功能[4]。益生菌是一類有活性的微生物，與使用抗生素不同，適度使用益生菌可使動物的非特異性免疫力增強，飼料利用率提高，動物的健康水平和生長性能得以改善，并減少環(huán)境污染[5]。目前，丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌分別作為單一的添加劑在肉仔雞飼糧中的應(yīng)用研究報道較多，但對聯(lián)合添加及不同添加量、添加形式等協(xié)同作用的相關(guān)研究相對匱乏，很難在生產(chǎn)實踐中提出具體的方案。鑒于此，本試驗選用1日齡寧都黃雞母雞為試驗對象，研究籠養(yǎng)條件下在基礎(chǔ)飼糧中聯(lián)合添加丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌作為抗生素替代品，評價其對寧都黃雞生長性能、血清免疫和抗氧化功能以及腸道健康的影響，為丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌在寧都黃雞生產(chǎn)中的聯(lián)合應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1日齡寧都黃雞雛雞購自寧都縣麒麟禽業(yè)有限公司；金霉素(純度98%)購自江西某獸藥有限公司；丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌均為市售商品，其中丁酸鈉由江西某農(nóng)牧發(fā)展有限公司提供，黃芪素由湖北某生物科技有限公司提供，復合益生菌由宜春某生物科技有限公司提供。丁酸鈉為丁酸鈉純粉(含量≥99%)；黃芪素為黃芪提取物，有效成分為黃芪多糖，含量≥60%；復合益生菌主要為乳酸片球菌、枯草芽孢桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母菌，總有效活菌數(shù)>6×109CFU/g。

1.2 試驗設(shè)計和飼糧

試驗選取1日齡健康、體重相近的寧都黃雞母雞648只，隨機分成6個組，每組6個重復，每個重復18只。Ⅰ組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ組為抗生素組，飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加150 mg/kg金霉素的飼糧；Ⅲ組為丁酸鈉和黃芪素復合組，飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加500 mg/kg丁酸鈉和500 mg/kg黃芪素的飼糧；Ⅳ組為丁酸鈉和復合益生菌復合組，飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加500 mg/kg丁酸鈉和200 mg/kg復合益生菌的飼糧；Ⅴ組為黃芪素和復合益生菌復合組，飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加500 mg/kg黃芪素和200 mg/kg復合益生菌的飼糧；Ⅵ組為丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌復合組，飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加500 mg/kg丁酸鈉、500 mg/kg黃芪素和200 mg/kg復合益生菌的飼糧。試驗期56 d?；A(chǔ)飼糧參照我國《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)[6]配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗于2021年10月至2021年12月在江西省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所試驗基地進行，試驗前28 d在層疊式育雛籠內(nèi)完成，試驗后28 d轉(zhuǎn)入育成舍在3層重疊式育成籠內(nèi)進行。所有試驗雞的飼養(yǎng)環(huán)境一致，免疫、衛(wèi)生消毒等程序按照標準養(yǎng)殖制度進行。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能指標

試驗第56天08：00，以重復為單位對試驗雞進行空腹稱重，試驗期間記錄耗料量，計算各組平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

1.4.2 血清免疫和抗氧化指標

試驗第56天，雞只禁食12 h，每個重復隨機選取2只健康且接近平均體重的寧都黃雞，翅靜脈采集5 mL血樣，3 000 r/min離心15 min制備血清，于-20 ℃保存待測。

血清免疫指標：血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-2(IL-2)和白細胞介素-4(IL-4)含量采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒進行測定，試劑盒購自北京華英生物技術(shù)研究所，測定儀器為DR-200BS酶標分析儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司)。

血清抗氧化指標：血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量采用比色法進行測定，測定試劑盒購自北京華英生物技術(shù)研究所，所用儀器為BS-420全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

1.4.3 腸道組織形態(tài)學指標

試驗結(jié)束時，每重復隨機選取2只寧都黃雞屠宰，剖開腹部，分離出十二指腸、空腸和回腸，迅速截取各腸段中段約2 cm，用生理鹽水把腸道內(nèi)容物沖洗干凈，再放到4%甲醛溶液中固定，經(jīng)沖水、梯度酒精脫水、二甲苯透明和石蠟包埋等處理后，以5 μm的厚度切片，并進行常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色。采用光學顯微鏡(Eclipse Ci，Nikon)觀察絨毛形態(tài)，使用Image-Pro plus 6.0軟件測量絨毛高度(VH)和隱窩深度(CD)，并計算絨毛高度/隱窩深度(V/C)值。

1.4.4 盲腸微生物區(qū)系

試驗結(jié)束時，每重復隨機選取2只寧都黃雞屠宰，剖開腹部，分離出盲腸，用滅菌線將盲腸結(jié)扎，確保腸道內(nèi)容物充足，剪下結(jié)扎的盲腸段，立即將內(nèi)容物轉(zhuǎn)入2 mL凍存管，置于-80 ℃冰箱保存。樣品送北京諾禾致源科技股份有限公司進行16S rDNA測序，基于Illumina NovaSeq測序平臺對V3～V4高變區(qū)進行雙末端測序，以分析盲腸菌群豐富度和多樣性。

1.5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2007進行初步整理后，采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法進行多重比較，P<0.05表示差異顯著，0.05

2 結(jié) 果

2.1 復合添加劑對寧都黃雞生長性能的影響

由表2可知，各組寧都黃雞初始體重差異不顯著(P>0.05)。與Ⅰ組相比，Ⅳ組、Ⅴ組和Ⅵ組寧都黃雞56日齡體重和ADG顯著提高(P<0.05)，Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組和Ⅵ組F/G顯著降低(P<0.05)，各組ADFI之間無顯著差異(P>0.05)。此外，與Ⅱ組相比，Ⅵ組寧都黃雞F/G顯著降低(P<0.05)。

2.2 復合添加劑對寧都黃雞血清免疫指標的影響

由表3可知，與Ⅰ組相比，Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組和Ⅵ組寧都黃雞血清IgG、IgA、IgM、和IL-4含量均顯著提高(P<0.05)，血清IL-2、TNF-α和IFN-γ含量均顯著降低(P<0.05)。與Ⅱ組相比，Ⅳ組、Ⅴ組和Ⅵ組寧都黃雞血清IgG、IgA和IL-4含量均顯著提高(P<0.05)；Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組和Ⅵ組血清IgM含量均顯著提高(P<0.05)，血清IL-2、TNF-α及IFN-γ含量均顯著降低(P<0.05)。

2.3 復合添加劑對寧都黃雞血清抗氧化指標的影響

由表4可知，與Ⅰ組和Ⅱ組相比，Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組和Ⅵ組寧都黃雞血清GSH-Px、SOD活性和T-AOC顯著提高(P<0.05)，Ⅳ組、Ⅴ組和Ⅵ組血清MDA含量顯著降低(P<0.05)。

表2 復合添加劑對寧都黃雞生長性能的影響

表3 復合添加劑對寧都黃雞血清免疫指標的影響

表4 復合添加劑對寧都黃雞血清抗氧化指標的影響

2.4 復合添加劑對寧都黃雞腸道組織形態(tài)的影響

由表5可知，各組寧都黃雞十二指腸VH和CD之間均無顯著差異(P>0.05)；Ⅲ組和Ⅳ組十二指腸V/C值顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，與Ⅱ組無顯著差異(P>0.05)。各組寧都黃雞空腸VH之間無顯著差異(P>0.05)；Ⅳ組和Ⅴ組空腸CD顯著低于Ⅰ組(P<0.05)，與Ⅱ組無顯著差異(P>0.05)；Ⅲ組、Ⅳ組和Ⅴ組空腸V/C值顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，與Ⅱ組無顯著差異(P>0.05)。各組寧都黃雞回腸VH、CD和V/C值之間均無顯著差異(P>0.05)。

2.5 復合添加劑對寧都黃雞盲腸微生物區(qū)系的影響

2.5.1 寧都黃雞盲腸微生物alpha多樣性分析

由表6可知，各組有效序列數(shù)較高，均在68 000以上，且各組覆蓋度均在0.998以上，說明測序結(jié)果已經(jīng)基本覆蓋樣本的物種多樣性。與Ⅱ組相比，Ⅲ組和Ⅵ組Shannon指數(shù)顯著提高(P<0.05)，Simpson指數(shù)有提高的趨勢(P=0.054)；各組操作分類單元(OTU)數(shù)、Chao1指數(shù)和Ace指數(shù)之間均無顯著差異(P>0.05)。

表6 復合添加劑對寧都黃雞盲腸微生物alpha多樣性的影響

2.5.2 寧都黃雞盲腸菌群結(jié)構(gòu)

由圖1和表7可知，各組樣品中厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidota)都為其主要的菌門，其中厚壁菌門相對豐度為44.53%～66.53%，并以Ⅴ組最高，且Ⅲ組和Ⅴ組厚壁菌門相對豐度顯著高于Ⅱ組(P<0.05)；擬桿菌門相對豐度為22.39%～39.06%，并以Ⅱ組最高，且Ⅲ組和Ⅴ組擬桿菌門相對豐度顯著低于Ⅱ組(P<0.05)。各組其他菌門相對豐度之間均無顯著差異(P>0.05)，但分布變異較大。脫硫桿菌門(Desulfobacterota)相對豐度以Ⅱ組和Ⅵ組較高；Ⅰ組變形菌門(Proteobacteria)相對豐度最高為3.33%，其他組變形菌門相對豐度變化不大均在3.00%以下；酸桿菌門(Acidobacteriota)相對豐度以Ⅱ組和Ⅳ組較高；藍藻菌門(Cyanobacteria)相對豐度以Ⅱ組最高；放線菌門(Actinobacteria)、黏細菌門(Myxococcota)和疣微菌門(Verrucomicrobiota)相對豐度以Ⅰ組最高。

由圖2和表8可知，在屬水平上，各組均以擬桿菌屬(Bacteroides)的相對豐度最高，占21.02%～37.47%。其中，Ⅳ組擬桿菌屬相對豐度與Ⅱ組無顯著差異(P>0.05)，Ⅲ組、Ⅴ組和Ⅵ組擬桿菌屬相對豐度顯著低于Ⅱ組(P<0.05)。各組其他菌屬的相對豐度均無顯著差異(P>0.05)，但分布差異較大。羅姆布茨菌屬(Romboutsia)、蘇黎世桿菌屬(Turicibacter)和CHKCI001相對豐度以Ⅴ組最高；嗜膽菌屬(Bilophila)相對豐度以Ⅱ組最高；糞桿菌屬(Faecalibacterium)、乳桿菌屬(Lactobacilus)和發(fā)酵乳桿菌屬(Limosilactobacillus)相對豐度以Ⅱ組最低。

圖1 寧都黃雞盲腸菌群在門水平上的分布

表7 寧都黃雞盲腸菌群在門水平上的相對豐度

圖2 寧都黃雞盲腸菌群在屬水平上的分布

表8 寧都黃雞盲腸菌群在屬水平上的相對豐度

3 討 論

3.1 復合添加劑對寧都黃雞生長性能的影響

生長性能是反映肉雞生長最直接的指標，提高生長性能是增加經(jīng)濟效益的關(guān)鍵[7]。已有研究表明，飼糧單獨添加丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌均能夠提高家禽的生長性能[8-10]。王永芬等[11]研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖和益生菌聯(lián)合添加比例適當時對提高肉仔雞的生長性能具有較好的協(xié)同作用，益生菌可促進黃芪多糖的吸收和利用，黃芪多糖中的生物堿、甙類和揮發(fā)油等活性物質(zhì)對益生菌又具有促菌作用。范秋麗等[12]研究發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉和益生菌聯(lián)合使用對1～63日齡黃羽肉雞后期的ADG提升效果顯著高于抗生素組。本試驗結(jié)果表明，飼糧聯(lián)合添加丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌能夠顯著提高寧都黃雞末重和ADG，并顯著降低F/G，對提高寧都黃雞的生長性能有顯著影響。這一試驗結(jié)果證明了飼糧聯(lián)合添加丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌對寧都黃雞的促生長作用。這可能與丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌都能夠促進消化酶的分泌，從而提高飼料轉(zhuǎn)化率有關(guān)。丁酸鈉可通過刺激膽囊收縮素的釋放來促進胰腺分泌胰液和胰肽酶E，提高胰肽酶E的活性[13]；且丁酸鈉水解后的丁酸能夠修復受損腸道組織，促進雞小腸黏膜發(fā)育以及胃腸道細胞增殖成熟和消化液的分泌，提高飼料轉(zhuǎn)化率。而黃芪素中的有益成分黃芪多糖是一種天然活性物質(zhì)[14]，可通過促進免疫器官發(fā)育和增強T細胞、B細胞和自然殺傷細胞等免疫細胞功能來提高動物免疫調(diào)節(jié)能力，改善腸道健康，提高動物生長性能。復合益生菌進入胃腸道后迅速增殖，產(chǎn)生多種抑菌代謝產(chǎn)物如過氧化氫和乳酸等，能夠抑制病原菌繁殖，調(diào)節(jié)胃腸菌群，使動物腸道pH下降，促進胃腸吸收，提高飼料的消化率[15]。丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌都具有提高腸道消化吸收的能力。通過本試驗研究發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合添加同時也具有較好的協(xié)同作用，提高了1～56日齡寧都黃雞的生長性能。

3.2 復合添加劑對寧都黃雞血清免疫功能的影響

IgA、IgG、IgM這3種免疫球蛋白是介導體液免疫的主要抗體，也是衡量免疫功能的重要指標[16]。Fang等[17]報道，飼糧中添加丁酸鈉(1 g/kg)可以顯著提高斷奶仔豬血清IgG和IgA含量，降低腹瀉率，增強機體免疫功能。Zhang等[18]研究發(fā)現(xiàn)，復合益生菌(由嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌組成)可以顯著提高肉仔雞血清IgA和IgM含量。本試驗結(jié)果顯示，飼糧聯(lián)合添加丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌可以提高寧都黃雞血清免疫球蛋白含量。其中，復合益生菌分別與丁酸鈉和黃芪素聯(lián)合使用的血清IgM含量顯著高于丁酸鈉與黃芪素聯(lián)合使用，且三者聯(lián)合使用的血清IgA、IgG和IgM含量顯著高于其他組合，達到了替代抗生素的效果，能夠有效提高寧都黃雞血清免疫功能。分析原因可能是丁酸鈉和黃芪素中的主要成份黃芪多糖都有促進免疫器官發(fā)育，提高小腸黏膜抗體分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的分泌，增強免疫球蛋白含量的作用，而益生菌本身是非特異性免疫調(diào)節(jié)因子，可以有效調(diào)節(jié)機體的免疫系統(tǒng)，促進免疫球蛋白的合成[19]；也可能是復合益生菌分別與丁酸鈉和黃芪素的協(xié)同作用導致其代謝產(chǎn)物，在腸道具有抗原識別部位的淋巴組織集合發(fā)揮免疫佐劑作用，活化腸黏膜內(nèi)的相關(guān)淋巴組織，使sIgA分泌增強，而sIgA能預(yù)防腸道蛋白酶的分解，形成黏膜上的抗體，從而刺激機體免疫系統(tǒng)，使更多的淋巴細胞分化成漿細胞產(chǎn)生抗體[11]。

細胞因子是炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)和調(diào)節(jié)劑。各種促炎性細胞因子(IL-2、IFN-γ和TNF-α等)與抗炎性細胞因子[白細胞介素-4(IL-4)、白細胞介素-5(IL-5)和白細胞介素-10(IL-10)等]之間的協(xié)同作用是調(diào)節(jié)機體炎癥發(fā)展的關(guān)鍵。本研究中，飼糧聯(lián)合添加丁酸鈉、黃芪素和益生菌可以顯著降低寧都黃雞血清IL-2、IFN-γ和TNF-α含量，并顯著提高血清IL-4含量，這一試驗結(jié)果表明丁酸鈉、黃芪素和益生菌聯(lián)合添加能顯著抑制機體炎性因子(IL-2、IFN-γ和TNF-α)的產(chǎn)生，減緩炎癥反應(yīng)，保障寧都黃雞的健康生長，發(fā)揮積極的抗炎作用。各試驗組合均能在一定程度上促進機體免疫系統(tǒng)生長發(fā)育，使肉仔雞始終保持良好的免疫狀態(tài)，而在調(diào)節(jié)細胞免疫及抗炎癥作用方面要以益生菌與丁酸鈉、黃芪素的互作效應(yīng)較優(yōu)，分析原因可能是益生菌或片段被吞噬細胞和樹突狀細胞吞噬后，誘導產(chǎn)生TNF-α、IFN-γ等細胞因子，增強腸道黏膜上皮細胞的興奮；同時還刺激肥大細胞產(chǎn)生IL-4來增強細胞因子網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)細胞免疫應(yīng)答[20]。本試驗中，益生菌對胃腸道免疫系統(tǒng)的刺激強度要優(yōu)于黃芪素和丁酸鈉，其中三者聯(lián)用抗炎效果更為明顯，可能與三者之間在細胞免疫、細胞因子調(diào)節(jié)等方面存在顯著的互作協(xié)同效應(yīng)，目前聯(lián)合使用的研究較少，具體機制需要開展進一步深入研究。

3.3 復合添加劑對寧都黃雞血清抗氧化功能的影響

動物機體的抗氧化反應(yīng)是對外界異物入侵發(fā)出的積極反應(yīng)，通過提高抗氧化相關(guān)酶含量或者活力來清除異物氧化損傷產(chǎn)生的自由基，也間接提高機體免疫水平[21]。劉明生等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飼糧中添加0.1%黃芪多糖和0.1%的益生菌，提高了血清SOD、GSP-Px活性和T-AOC，降低了血清MDA含量，增強了機體的抗氧化能力和抗病力。本研究中，復合益生菌分別與丁酸鈉和黃芪素組合及三者聯(lián)用對寧都黃雞血清MDA含量的降低效果顯著低于對照組和抗生素組及丁酸鈉與黃芪素聯(lián)合使用組，且三者聯(lián)用組血清MDA含量顯著低于復合益生菌與丁酸鈉和黃芪素聯(lián)合使用組；復合益生菌與丁酸鈉和黃芪素聯(lián)用組及三者聯(lián)用試驗組血清SOD、GSH-Px活性和T-AOC顯著高于對照組和抗生素組，且三者聯(lián)用組血清SOD、GSH-Px活性和T-AOC顯著高于丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合使用組。這可能與益生菌作為一種抗原物質(zhì)，能夠刺激胃腸道免疫系統(tǒng)的發(fā)育，增強機體對抗原物質(zhì)的刺激，促進機體特異性體液的免疫應(yīng)答[23]；而黃芪多糖本身也具有抗原的特性，能夠促進免疫細胞的增殖，激發(fā)相應(yīng)的免疫反應(yīng)[24]；丁酸鈉也具有促進機體抗氧化酶相關(guān)基因的表達，增強機體對自由基的清除能力，改善機體的抗氧化功能等特性[25]。這三者的協(xié)同作用機理可能通過刺激機體免疫系統(tǒng)，提高SOD、GSH-Px活性和T-AOC等，增強機體對多種活性氧(ROS)的清除，有效抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生，因此對寧都黃雞發(fā)揮良好的抗氧化功能起了關(guān)鍵作用。本試驗結(jié)果同時也表明，飼糧中聯(lián)合添加丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌可以有效調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)，促進機體分泌免疫球蛋白，提高抗氧化酶SOD、GSH-Px活性和T-AOC，減少炎癥相關(guān)因子IL-2、IFN-γ和TNF-α的釋放量，可見寧都黃雞在免疫抗體水平、抗氧化和抗炎功能上存在密切的交互關(guān)系。

3.4 復合添加劑對寧都黃雞腸道組織形態(tài)的影響

腸道上皮結(jié)構(gòu)是營養(yǎng)物質(zhì)被消化和吸收的基礎(chǔ)，腸道的形態(tài)變化可以揭示腸道的健康狀況，評估腸道營養(yǎng)效果[26]，同時它的VH、CD及V/C值是反映腸道結(jié)構(gòu)完整性的重要指標[27]。王繼鳳等[28]在肉仔雞飼糧中添加0.05%～0.10%的丁酸鈉，能顯著提高其小腸VH和V/C值。Shan等[29]在雛雞飼糧中添加一定量的黃芪多糖，發(fā)現(xiàn)雛雞的小腸V/C值顯著提高。田浪等[30]研究發(fā)現(xiàn)，復合益生菌在添加量為300 g/t時，可顯著提高50日齡黃羽肉雞十二指腸VH和V/C值。本試驗結(jié)果表明，飼糧聯(lián)合添加丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌可以顯著降低空腸隱窩深度，并顯著提高空腸和十二指腸V/C值。這一試驗結(jié)果證明，丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合添加對寧都黃雞空腸和十二指腸的腸道形態(tài)有改善作用，但對回腸各項指標沒有顯著影響，原因可能是由于在添加粉狀丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌時，在消化道前段吸收較多，隨著腸段的后移，腸絨毛逐漸變短萎縮，腸絨毛表面積減小導致復合添加劑被腸絨毛細胞吸收減少。向仕權(quán)等[31]和劉銳鋼等[32]報道，丁酸鈉能提高腸道上皮細胞中閉合蛋白-1(occludin-1)、封閉蛋白-1(claudin-1)以及三葉因子3(TFF3)基因的表達，促使細胞緊密連接，促進腸道受損黏膜的修護，從而改善腸道黏膜形態(tài)。黃玉章[33]研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖能夠增加腸道黏液細胞和上皮淋巴細胞數(shù)量，保護腸黏膜上皮，從而改善腸道絨毛形態(tài)。謝文惠[34]研究發(fā)現(xiàn)，復合益生菌還能改善腸道黏液分泌，增強腸道上皮細胞的緊密連接，調(diào)節(jié)腸道上皮細胞增殖與分化，修復受損腸道，降低CD，改善腸道黏膜形態(tài)。以上研究結(jié)果說明，丁酸鈉、黃芪多糖和復合益生菌都具有促進腸道發(fā)育的能力，增強腸道吸收，維持腸道黏膜的完整性。聯(lián)系本試驗1～56日齡寧都黃雞的生長性能結(jié)果，進一步表明丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合添加在一定程度上改善了寧都黃雞的腸道形態(tài)發(fā)育，從而促進了寧都黃雞的健康生長。

3.5 復合添加劑對寧都黃雞盲腸微生物區(qū)系的影響

腸道微生態(tài)系統(tǒng)是影響動物消化吸收能力的重要因素，腸道菌群平衡有助于提高動物的消化吸收能力，保障動物健康[35]。盲腸是腸道細菌的主要集中部位，具有最高的細菌多樣性[36]。在alpha多樣性分析中發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合添加在飼糧中都能夠?qū)γつc微生物的多樣性有一定的改善作用，且丁酸鈉、黃芪素組合和三者聯(lián)合添加的Shannon指數(shù)顯著高于抗生素組，有較高的群落多樣性。雞的盲腸微生物在門水平上，厚壁菌門和擬桿菌門構(gòu)成了大多數(shù)微生物群落，能夠抵抗外來細菌的定殖，在能量的產(chǎn)生和代謝中起著重要作用[37]，這與本研究結(jié)果一致。本試驗結(jié)果表明，厚壁菌門和擬桿菌門是寧都黃雞腸道內(nèi)相對豐度比例較高的菌群，相對豐度占80%以上，為絕對優(yōu)勢菌群，與前人研究結(jié)果[38]一致。大部分研究都表明，丁酸鈉和益生菌等可以改善腸道微生物組成[39-40]，但是當動物處于非健康狀態(tài)時，腸道菌群急劇改變會擾亂腸道菌群，導致腸道功能失調(diào)，增加腸道外疾病發(fā)生幾率[41]。本研究中，復合添加劑能夠提高厚壁菌門相對豐度，一定程度降低腸道變形菌門相對豐度。厚壁菌門發(fā)酵能力較強，可以促進機體脂肪的沉積，能夠發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸，維持機體腸道健康[42]。變形菌門為革蘭氏陰性菌，其中包括很多病原菌，如大腸桿菌、沙門氏菌等，易引起消化不良[43]。因此，本試驗結(jié)果提示，復合添加劑能夠通過促進寧都黃雞腸道有益菌的增殖，抑制有害菌或殺滅病原菌來調(diào)節(jié)腸道微生物環(huán)境，緩解腸道菌群失衡。不過，在屬水平上沒有達到顯著水平，這可能與肉雞品種、飼養(yǎng)環(huán)境和添加劑量有關(guān)，但本研究復合添加劑能夠在一定程度上提高瘤胃球菌屬和罕見小球菌屬相對豐度。有研究發(fā)現(xiàn)，瘤胃球菌具有抗炎性的功能，能起到降低和改善腸道炎癥的作用[44]，罕見小球菌屬通過發(fā)酵反應(yīng)產(chǎn)生丁酸、乳酸等，維持腸道黏膜屏障、緩解腸道炎癥，調(diào)節(jié)腸道環(huán)境[45]，這也說明復合添加劑能起到改善寧都黃雞腸道微生態(tài)平衡，維持腸道微生物穩(wěn)態(tài)，促進腸道健康的作用。

4 結(jié) 論

① 丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合添加可以提高寧都黃雞生長性能。

② 丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合添加可以提高寧都黃雞血清免疫和抗氧化功能，降低炎癥反應(yīng)，效果優(yōu)于抗生素組，有替代抗生素的潛質(zhì)。

③ 丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合添加可以改善寧都黃雞小腸腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，維持腸道微生物穩(wěn)態(tài)，促進腸道健康。