羊腸毒血癥的流行特點、實驗室診斷和防控措施

熊彬欣

(云南省蒙自市動物疫病預防控制中心，云南 蒙自 661100)

0 引言

在我國養(yǎng)殖業(yè)現(xiàn)代化規(guī)模和發(fā)展的過程中，羊作為一種主要的養(yǎng)殖群體，傳染病的發(fā)病概率顯著提高，羊腸毒血癥是羊群感染了D型魏氏梭菌所引發(fā)的急性傳染病，易感群體以綿羊為主。D型魏氏梭菌通過羊只腸道進行大量繁殖，釋放出大量的毒素?；疾∩窖蛟谂R床中會出現(xiàn)腎臟軟化、腹瀉、麻痹等一系列的癥狀。羊腸毒血癥病發(fā)帶有明顯的季節(jié)性特點，對我國養(yǎng)羊業(yè)的健康發(fā)展造成了嚴重的威脅。本文通過探討羊腸毒血癥的流行病學特點、實驗室診斷和防控措施，以便為今后我國羊腸毒血癥的診斷治療以及防控提供參考。

1 羊腸毒血癥的病原體特征及病發(fā)機理分析

1.1 病原體特征

魏氏梭菌在生物學上被稱為產氣莢膜梭菌，本質上是一種厭氧性質的革蘭陽性粗短大桿菌[1]。動物感染魏氏梭菌之后，可以在機體內形成莢膜，且病菌的芽孢位于菌體的中央位置。結合魏氏梭菌在動物體內繁殖過程中產生的外毒素類型的差異，可以將魏氏梭菌劃分為A、B、C、D、E 5個類型。引發(fā)羊腸毒血癥的魏氏梭菌是D型魏氏梭菌，這種致病菌可以在羊只的腸道內形成芽孢，并且消化道是病菌的主要傳播途徑。各類較為常用的消毒劑對于D型魏氏梭菌均具備良好的殺菌效果，但在芽孢形成之后的D型魏氏梭菌，因其抗逆性得到了明顯增強，需要在90℃的環(huán)境下進行150 min的滅菌處理，而繁殖體內的病菌則需要在60℃的環(huán)境條件下進行15 min的消殺處理。

1.2 病發(fā)機理

D型魏氏梭菌在水源、土壤中分布較為廣泛，并且能在飼養(yǎng)的草料、健康生羊的消化道和分泌物中存活。在羊群免疫水平相對較高的情況下，D型魏氏梭菌在進入腸道之后，病原菌被胃內的胃酸殺死，只有很少的一部分會進入腸道，但這些病原菌在繁殖過程中產生的毒素數(shù)量十分有限，并不會對羊只的健康產生影響，最終會以腸內容物的形式排放到自然環(huán)境中。但在羊群飼養(yǎng)草料突然變更，尤其是從之前的干草料轉變?yōu)榍嗑G多汁草料，或者是草料的蛋白質含量較高時，則會導致羊群瘤胃內的酸堿度數(shù)值有所下降，絕大部分尚未經過消化的淀粉顆粒會進入小腸。在這種情況下，腸道內部的D型魏氏梭菌就會快速繁殖并產生大量的毒素，在進入血液之后會引發(fā)羊只腸道的溶血、壞死，最終會出現(xiàn)休克、死亡的現(xiàn)象。

2 羊腸毒血癥的流行病學分析

羊腸毒血癥常見于成年階段的羊群，并且綿羊是其中的重要發(fā)病群體。D型魏氏梭菌能夠在動物的腸道以及生活和工業(yè)污水中長時間存在[2]。羊只在食用這些含有病原菌的食物或者是污水之后，則會順著消化系統(tǒng)進入到腸道的內部，在破壞原有的消化機能的同時，出現(xiàn)病菌快速繁殖并分泌出數(shù)量較多的各類毒素。羊腸毒血癥具有明顯的群發(fā)性和散發(fā)性并存的特點，D型魏氏梭菌可以在羊群體內持續(xù)存活30～50 d。近些年，我國養(yǎng)殖業(yè)的病原菌污染水平有所提升，羊腸毒血癥可能發(fā)生在任何年齡階段的健康羊只身上，尤其是以6～24月齡的羊只感染之后死亡率最高[3]。羊腸毒血癥在春秋季節(jié)較為流行，尤其是在氣候驟變的潮濕地區(qū)發(fā)病率更高。羊腸毒血癥的顯著特點之一便是與羊圈的突然更換有著較為緊密的關聯(lián)。

3 羊腸毒血癥的臨床癥狀表現(xiàn)

羊腸毒血癥病發(fā)時間相對較快、病程較短，在臨床治療中部分病羊甚至在未出現(xiàn)任何臨床癥狀的情況下，便會迅速死亡。在病發(fā)之后，患病羊只會出現(xiàn)獨自離群、奔跑、臥地不起等癥狀，并且在臨死之前出現(xiàn)腹瀉，糞便呈現(xiàn)出水樣的黃褐色稀糞狀[4]。此外，部分患病羊只也會出現(xiàn)頭部后仰、磨牙、全身顫抖，隨后陷入休克并死亡。結合病羊在發(fā)病之后的癥狀差異，可以將羊腸毒血癥的臨床癥狀劃分為抽搐型和昏厥型，這也是由患病山羊體內產生毒素的數(shù)量決定的。出現(xiàn)抽搐性臨床癥狀表現(xiàn)的山羊通常會因為腹部脹痛而出現(xiàn)全身性的顫抖、磨牙、口流白沫，隨后頭部和頸部會出現(xiàn)嚴重的抽搐現(xiàn)象，會在病發(fā)3 d左右死亡?；柝市团R床癥狀的發(fā)病羊只主要的臨床癥狀表現(xiàn)就是流口水，走路時明顯呈現(xiàn)出體力不支的狀態(tài)，并且羊的眼角膜反射會消失，部分患病羊只會出現(xiàn)腹瀉癥狀。在針對患病死亡的羊只進行剖檢時發(fā)現(xiàn)，即便其營養(yǎng)狀況良好的昏厥型臨床癥狀的山羊，死后的尸體也會迅速膨脹并快速腐敗。

4 羊腸毒血癥的實驗室診斷分析

4.1 觸片鏡檢

在實驗室內無菌環(huán)境的條件下，可以適當取樣患病山羊的腎臟、心臟和肝臟組織直接進行觸片鏡檢，隨后經過革蘭氏染色以及顯微鏡檢查之后，可以發(fā)現(xiàn)數(shù)量較多的粗大桿菌，細菌的兩端呈現(xiàn)出鈍圓狀態(tài)并帶有莢膜。

4.2 分離培養(yǎng)檢測

在實驗室的無菌環(huán)境下，檢測人員需要使用接種環(huán)將患病山羊的肝臟、腎臟適當進行取樣，隨后分別在肝片肉湯和葡萄糖血液瓊脂平板上進行接種，并將其放入37°的恒溫箱環(huán)境下進行8～24 h的厭氧培養(yǎng)操作，最后觀察培養(yǎng)出的細菌特性。肝片肉湯培養(yǎng)基在經過8 h的培養(yǎng)之后，會逐漸轉變?yōu)榛鞚釥顟B(tài)，并產生一定數(shù)量的氣泡。在經過24 h培養(yǎng)之后，底部會出現(xiàn)明顯的白色沉淀物。葡萄糖血液瓊脂平板的培養(yǎng)基經過8 h培養(yǎng)之后，會長出呈現(xiàn)淺灰色的圓形或者是圓盤型的菌落，且菌落的中間部位會逐漸凸起，并最終形成溶血環(huán)或者是雙溶血環(huán)[5]。在挑去菌落的培養(yǎng)物進行涂片、染色、顯微鏡檢查之后可以發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽性大桿菌，且這類細菌的形態(tài)與之前羊只病料組織直接涂片檢測所發(fā)現(xiàn)的細菌完全相同。

4.3 生化實驗培養(yǎng)

在實驗室內檢測D型魏氏梭菌的過程中，生化實驗方式可以利用葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖等材料，隨后便可以生成硫化氫氣體，經過甲基紅實驗、尿素試驗之后便可得出是否患病的結論，需要注意的是，枸椽酸鹽無法應用到D型魏氏梭菌的生化檢驗中。

4.4 腸毒素檢查

在實驗室檢查病羊腸毒素的過程中，需要取50 mL病死羊只的回腸內容物，并向其中添加150 mL的滅菌生理水進行稀釋，在經過均勻混合之后，需要以3 000 r/min的速度進行10 min的離心處理，隨后取離心液上清液針對健康家兔進行接種，并同時針對健康的家兔進行同等數(shù)量的滅菌生理水注射。在經過一段時間之后可以發(fā)現(xiàn)，注射病死羊回腸內容物稀釋上清液的家兔出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，而注射滅菌生理鹽水的家兔依舊存活，這也證明病死羊只的腸道內確實出現(xiàn)了數(shù)量較多的腸毒素。

4.5 毒素的測定

在確定腸道內存在著大量毒素之后，需要取經過稀釋的病死羊回腸內容物稀釋上清液1.5 mL，分別與滅菌生理鹽水、C型和D型的產氣莢膜梭菌抗毒血清，分別取0.5 mL進行全面混合，之后放置在37℃環(huán)境條件下進行40 min的綜合處理，分別針對家兔進行注射。經過12 h之后可以發(fā)現(xiàn)，注射C型抗毒血清以及病死羊回腸內容稀釋上清液的家兔先后死亡，其余的注射滅菌生理鹽水、D型抗毒血清、回腸內容物稀釋上清液混合液的家兔全部存活，由此也不難看出回腸的內容稀釋物的上清液中確實含有D型魏氏梭菌在繁殖過程中分泌的毒素。

5 羊腸毒血癥的防治策略

5.1 病羊的治療措施

在羊只出現(xiàn)羊腸毒血癥臨床癥狀表現(xiàn)之后，如果病羊的病程發(fā)展進程相對較為緩慢，可以使用80萬～160萬IU的青霉素進行肌肉注射治療，2次/d。同時也需要針對患病羊只進行8～12 g磺胺脒的配合內服，第1天的藥物服用治療需要使用一次性的灌服，在第2天之后則可以將之分為2次進行灌服[6]。養(yǎng)殖人員也可以向患病山羊體內灌服濃度為10%的石灰水，石灰水的具體用量需要結合患病羊只的體重進行變更。羔羊的石灰水用量維持在50～80 mL，成年羊只的用量則需要提高到200 mL，連續(xù)治療1～2次。在對病程進展緩慢的羊只進行臨床治療的過程中，需要結合其臨床表現(xiàn)針對性地采取鎮(zhèn)靜、強心、補液等輔助治療方式。

在患病羊只臨床癥狀表現(xiàn)和發(fā)病較為嚴重的情況下，需要進一步采取對癥治療的方法。通常而言，需要使用500 mL的生理鹽水、10 mL的VC、20萬IU的青霉素8～10支、4萬IU的慶大霉素4～6只以及1支20 mL氰化可的松所組成的藥液進行靜脈注射，2次/d。在羊只同時伴隨有酸中毒癥狀的情況下，需要使用500 mL 5%碳酸氫鈉溶液進行靜脈注射治療，并配合適當數(shù)量鏈霉素的口服治療，通常需要連續(xù)治療3～5 d。

因為羊腸毒血癥的病發(fā)相對較快，并且?guī)в袠O強的傳染性。在養(yǎng)殖人員發(fā)現(xiàn)羊只患病之后，需要立即進行隔離處理，并對羊舍內的其他羊只進行隔離排查，可有效防止疾病的快速擴散。對于確認狀態(tài)健康的羊群需要立即進行羊圈的更換，并進行緊急的預防疫苗接種措施。

5.2 預防措施

1)在預防羊群感染羊腸毒血癥時，養(yǎng)殖場管理人員要對病羊糞便污染的區(qū)域進行統(tǒng)一清掃再消毒，避免各種垃圾、雜物影響到消毒效果，可以使用2%的火堿溶液進行噴灑消毒。在日常的羊群養(yǎng)殖管理中，養(yǎng)殖人員要在降溫之前為羊群提供保暖措施。冬季氣溫過低的情況下，需要在地面上鋪上墊草，確保羊群在臥地時不會與地面直接接觸。另外，羊群感染羊腸毒血癥的主要病因還有應激使機體免疫力下降，管理人員需要做好防應激工作，部分羔羊在斷乳之后需要長途運輸進行售賣，在這之前需要保障羊只擁有充足的飲水，并在水中加入電解多維和礦物微量元素，可有效避免應激反應。平日羊群放牧時，養(yǎng)殖人員需要避開地勢低洼的潮區(qū)以及沼澤地帶，選擇干燥、向陽的高地進行放牧。

2)養(yǎng)殖人員可以使用微生態(tài)制劑進行該病的預防。目前益生菌和益生元的飼料添加劑是應用較為廣泛的微生態(tài)制劑。從功能上看，益生菌能夠和D型魏氏梭菌進行空間以及營養(yǎng)的競爭，對其繁殖進行有效抑制，確保羊只胃腸道內微生態(tài)環(huán)境的平衡。給羊只服用益生元可有效利用有害菌無法利用的物質，在羊只口服之后促進其體內益生菌的繁殖，確保在微環(huán)境競爭過程中始終處于優(yōu)勢地位，在促進羊只健康生長的同時，降低羊腸毒血癥的發(fā)病概率。

3)在預防健康羊群感染羊腸毒血癥的過程中，疫苗接種是最為有效的方法，養(yǎng)殖人員需要定期針對健康的羊群進行羊腸毒血癥疫苗的接種。在接種疫苗之后的1～2周之內就能夠產生抗體，3周之后抗體的含量達到高峰，能夠有效抵抗各種病菌的感染。需要注意的是，在進行免疫接種的過程中，養(yǎng)殖管理人員要在接種前后的7 d內停止使用免疫抑制藥物，如糖皮質激素、解熱鎮(zhèn)痛消炎類的藥物，避免對疫苗接種時抗體的生成產生不良影響。

6 結語

羊腸毒血癥有著較高的發(fā)病率以及致死率，對我國羊養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展產生十分不利的影響。D型魏氏梭菌能夠廣泛地存在于自然界的生活以及工業(yè)廢水中，并且能夠在健康羊只的腸道內存活30～50 d。病發(fā)之后的臨床癥狀表現(xiàn)可以分為抽搐性和昏厥型，最終都會導致死亡。飼養(yǎng)管理人員在發(fā)現(xiàn)羊只感染羊腸毒血癥之后，需要及時進行隔離處理，并針對健康的羊只進行免疫接種。同時對患病羊采取針對性治療，提高患病羊只的存活率。在平日的飼養(yǎng)管理過程中，飼養(yǎng)人員需要定期進行羊舍的殺菌消毒處理，并要定期針對健康羊群進行疫苗接種，配合微生態(tài)制劑加入飼料中，能夠顯著提高羊只對羊腸毒血癥的抵抗力。