李 慧,張 婉,李 靜,朱景樂,陳夢(mèng)嬌,唐 駿,孟益德,劉 丹
(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué),河南 鄭州 450002;2.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 a.經(jīng)濟(jì)林研究所;b.經(jīng)濟(jì)林種質(zhì)創(chuàng)新與利用國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河南 鄭州 450003;3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 果樹研究所,遼寧 興城 125100;4.國(guó)有信陽市平橋區(qū)天目山林場(chǎng),河南 信陽 464100;5.山東省林草種質(zhì)資源中心,山東 濟(jì)南 250102)
杜仲Eucommia ulmoidesOliv.為杜仲科杜仲屬單科單屬植物,是一種名貴的中藥材和重要的經(jīng)濟(jì)樹種。杜仲多以皮入藥,但有關(guān)研究結(jié)果表明,其葉片與樹皮有著相似的化學(xué)成分和抗氧化活性,且杜仲葉片的再生能力強(qiáng),葉片資源更加豐富也更容易采取[1]。黃酮類物質(zhì)具有抗氧化、抗癌、增強(qiáng)免疫力等多種功效,是杜仲葉中一類重要的活性成分,其在杜仲葉片和樹皮中的含量相近,因此,亦可以葉片代替樹皮作為藥源[2-5]?!A仲12 號(hào)’杜仲Eucommia ulmoides‘Huazhong No.12’是葉片變異型的杜仲品種,其葉片呈現(xiàn)紅色,與葉片呈綠色的杜仲相比,‘華仲12 號(hào)’杜仲表現(xiàn)出更加優(yōu)良的園林觀賞價(jià)值[2]。有關(guān)研究結(jié)果表明,黃酮類物質(zhì)在組成和含量上的差異是影響植物葉色表現(xiàn)的重要因素,對(duì)于不同品種杜仲來說,其葉色的不同與黃酮類物質(zhì)的組成和含量都有一定的相關(guān)性[6-10]。為了進(jìn)一步了解‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片呈現(xiàn)紅色的現(xiàn)象與黃酮類物質(zhì)組成和含量之間的相關(guān)性,以葉片呈綠色的‘華仲11 號(hào)’為對(duì)照,檢測(cè)并分析‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組成和含量,以期為后期關(guān)于‘華仲12 號(hào)’杜仲合理定向化利用的研究奠定基礎(chǔ)。
近些年來,針對(duì)杜仲葉片中生物活性物質(zhì)的提取方法、藥理分析、活性物質(zhì)與其生態(tài)因子間的相關(guān)性等方面的研究不斷深入[11-14],但有關(guān)‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組成成分及含量的分析鮮見報(bào)道。常用于檢測(cè)黃酮類物質(zhì)的方法有超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法、紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法等,與后兩種方法相比,超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法具有自動(dòng)化程度高、分離速度快、定性準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)[15-17]。黃酮類物質(zhì)是以2-苯基色原酮(圖1)為母核的化合物,其組分復(fù)雜,本研究運(yùn)用UPLC-PDA-MS/MS 法,通過將其與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì),采用色譜與質(zhì)譜信息分析、數(shù)據(jù)分析等方法,對(duì)‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)分別進(jìn)行定性與定量分析,并選取葉色呈綠色的葉用型良種‘華仲11 號(hào)’杜仲Eucommia ulmoides‘Huazhong No.11’葉片作為對(duì)照材料,比較分析兩種杜仲無性系葉片中黃酮類物質(zhì)組成與含量的差異情況,以期為 ‘華仲12 號(hào)’杜仲合理的定向化利用的研究奠定理論基礎(chǔ)。
圖1 2-苯基色原酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of 2-phenyl-chromone
供試的‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片均采自于河南省新鄉(xiāng)市原陽杜仲良種繁育圃。標(biāo)準(zhǔn)品分別為矢車菊素-3-O 葡萄糖苷、槲皮素-蕓香糖苷、槲皮素-3-O-半乳糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、蘆丁、山柰酚-葡萄糖苷,均為美國(guó)Sigma-Aldrich 公司生產(chǎn)。
將采集的‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片迅速地分別置于液氮中冷凍,并利用冷凍研磨機(jī)(SPEX 公司)研磨成粉,分別稱取約為1.0 g 的樣品,加入10 mL 的甲醇(HPLC 級(jí),美國(guó)Fisher公司),以超聲波超聲提取20 min,然后置于高速冷凍離心機(jī)(CF16RXII 式,日本日立公司)中,以10 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心5 min,分別取上清液(提取液)以備用。參照相關(guān)文獻(xiàn)[18]中說明的方法分別進(jìn)行純化,對(duì)其中的部分步驟有所改進(jìn),將所用的樣品提取液、淋洗所用的甲醇、最終定容體積均改為5.0 mL,淋洗固相萃取小柱的水體積為2.5 mL,純化后再上機(jī)檢測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)品的制備:每種標(biāo)準(zhǔn)品各準(zhǔn)確稱取5.0 mg,以甲醇溶解并定容至10 mL,得到500 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,根據(jù)需要配置成適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液使用液。
UPLC 條件:柱溫40 ℃,進(jìn)樣量2.0 μL,流速0.3 mL·min-1。流動(dòng)相A、B 分別為乙腈(HPLC 級(jí),美國(guó)Fisher 公司生產(chǎn))和0.5%的甲酸(LCMS 級(jí),美國(guó)Anaqura Chemicals Supply 公司生產(chǎn))。A 液的洗脫梯度為:0%,0 min;10%,1 min;20%,10 min;25%,16 min;80%,18 min;洗脫20 min后回到初始狀態(tài),平衡5 min。
MS/MS 條件:參考有關(guān)文獻(xiàn)[19]進(jìn)行設(shè)定。
因?yàn)椴荒艽_認(rèn)兩種杜仲葉片中所含有的黃酮類物質(zhì)的具體組成,無法獲取全部相應(yīng)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)于有標(biāo)準(zhǔn)品的物質(zhì),可以利用標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和MS/MS 質(zhì)譜信息,結(jié)合其相對(duì)分子質(zhì)量及二級(jí)質(zhì)譜碎片離子進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析,完成對(duì)該黃酮類物質(zhì)的定性分析;而對(duì)于未獲得相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的物質(zhì),則可結(jié)合其苷元及糖基等信息進(jìn)行鑒定。
采用相對(duì)定量的分析方法,采用正離子MRM模式,將標(biāo)準(zhǔn)品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液使用液,用外標(biāo)法準(zhǔn)確測(cè)定杜仲葉片提取液中相應(yīng)物質(zhì)的含量,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積及含量、從提取液中測(cè)得的其他黃酮類物質(zhì)的峰面積,運(yùn)用公式(1)計(jì)算出各黃酮類物質(zhì)的含量。因?yàn)闊o法得到全部相應(yīng)黃酮類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品,無法準(zhǔn)確確定黃酮類物質(zhì)的質(zhì)譜響應(yīng)差異,所以先假設(shè)各種黃酮類物質(zhì)的質(zhì)譜響應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品一致,即Fj=1,F(xiàn)j表示相同摩爾質(zhì)量的化合物j與標(biāo)準(zhǔn)品i在相同試驗(yàn)條件下檢測(cè)信號(hào)的比值,然后按式(1)計(jì)算各黃酮類組分的含量。所有的測(cè)定結(jié)果均以3 次測(cè)定值的(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)來表示。
式(1)中:j表示利用標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定其含量的某種黃酮類物質(zhì),Cj表示其含量;i為標(biāo)準(zhǔn)品;A為某種黃酮類物質(zhì)的峰面積;M為某種黃酮類物質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。
使 用Microsoft Excel 2016 和SPSS 25.0 軟 件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖。
‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中15 種黃酮類物質(zhì)的色譜圖如圖2所示,各類黃酮類物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖3所示,圖2和圖3中的數(shù)字均表示峰號(hào);15 種黃酮類物質(zhì)的保留時(shí)間、分子離子的質(zhì)荷比(m∶z)、碎片離子質(zhì)荷比及物質(zhì)組成與含量見表1,表1中的峰號(hào)分別與2 和圖3中的數(shù)字相對(duì)應(yīng)。
表1 ‘華仲12 號(hào)’杜仲和‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)組成及含量(n=3)Table 1 Composition and content of flavonoids in leaves of E.ulmoides ‘Huazhong No.12’ and ‘Huazhong 11’ (n=3)
圖2 ‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中15 種黃酮類物質(zhì)的色譜圖Fig.2 Chromatogram of 15 flavonoids in leaves of E.ulmoides ‘Huazhong No.12’
圖3 ‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中各類黃酮類物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.3 Chemical structure of flavonoids in leaves of E.ulmoides ‘Huazhong No.12’
由表1可知,‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中共檢測(cè)出15 種黃酮類物質(zhì),根據(jù)其苷元結(jié)構(gòu)可將15 種黃酮類物質(zhì)劃分為3 類:槲皮素糖苷類有10 種,分別為槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖、槲皮素-戊糖酰-己糖酰-己糖、槲皮素-己糖-己糖、槲皮素-戊糖酰-蕓香糖苷、槲皮素-戊糖-己糖、槲皮素-脫氧己糖-己糖、槲皮素-蕓香糖苷、槲皮素-3-O-半乳糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-丙二酰-葡萄糖苷;山柰酚糖苷類有3 種,分別為山柰酚-蕓香糖苷、山柰酚-葡萄糖苷、山柰酚-丙二酰-葡萄糖苷;矢車菊素糖苷類有2 種,分別為矢車菊素-3-桑布糖苷和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷。在相同的試驗(yàn)條件下,‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中共檢測(cè)出12 種黃酮類物質(zhì),包括槲皮素糖苷類的9 種和山柰酚糖苷類的3 種。比較分析可知,槲皮素-3-O-半乳糖苷、矢車菊素-3-O 桑布糖苷、矢車菊素-3-O 葡萄糖苷此3 種物質(zhì)都是‘華中12 號(hào)’杜仲葉片獨(dú)有的。
圖2A 顯示,在相同的試驗(yàn)條件下,峰號(hào)分別為7、8、9 和11 的保留時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比(m∶z)與其對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的均相似,據(jù)此可識(shí)別出其對(duì)應(yīng)的黃酮類化合物可能分別為蘆丁、槲皮素-3-O-半乳糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷和山柰酚-蕓香糖苷。
由圖2A 可知,峰號(hào)1、2、3 對(duì)應(yīng)的化合物分子離子的質(zhì)荷比分別為773、759、627,據(jù)此可以初步判斷,峰號(hào)1、2、3 對(duì)應(yīng)的物質(zhì)可能分別為槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖、槲皮素-戊糖酰-己糖酰-己糖、槲皮素-己糖-己糖,測(cè)得的其相對(duì)分子質(zhì)量與其對(duì)應(yīng)的理論相對(duì)分子質(zhì)量都相匹配。對(duì)照?qǐng)D3中黃酮類物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式分析可知,峰號(hào)1 對(duì)應(yīng)的特征子離子碎片的質(zhì)荷比分別為627、465、303,其代表的物質(zhì)可能分別為槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖失去一分子脫氧己糖(其質(zhì)荷比為627)、槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖失去一分子脫氧己糖和一分子己糖(其質(zhì)荷比為465)、槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖失去一分子脫氧己糖和兩分子己糖(其質(zhì)荷比均為303)的碎片離子;峰號(hào)1 對(duì)應(yīng)的碎片離子的質(zhì)荷比為611,其可能是槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖失去一分子己糖的碎片離子。峰號(hào)2 對(duì)應(yīng)的特征子離子碎片的質(zhì)荷比分別為627、465、303,其可能分別為槲皮素-戊糖酰-己糖酰-己糖失去一分子戊糖(其質(zhì)荷比為627)、一分子戊糖和一分子己糖(其質(zhì)荷比均為465)、一分子戊糖和兩分子己糖(其質(zhì)荷比均為303)的碎片離子;峰號(hào)3 對(duì)應(yīng)的特征子離子碎片的質(zhì)荷比分別為465、303,其可能分別為槲皮素-己糖-己糖失去一分子己糖、失去兩分子己糖的碎片離子。
峰號(hào)4 對(duì)應(yīng)的分子離子的質(zhì)荷比為 743,初步判斷其代表的物質(zhì)為槲皮素-戊糖酰-蕓香糖苷,其特征碎片離子的質(zhì)荷比分別為611、465、303,其可能分別為槲皮素-戊糖酰-蕓香糖苷失去一分子戊糖(其質(zhì)荷比為611)、失去一分子戊糖和一分子鼠李糖(其質(zhì)荷比均為465)、失去一分子戊糖和蕓香糖(葡萄糖+鼠李糖)(其質(zhì)荷比均為303)的碎片離子。峰號(hào)5 和6 對(duì)應(yīng)的分子離子的質(zhì)荷比分別為 597 與611,可初步判斷其代表的物質(zhì)分別為槲皮素-戊糖-己糖和槲皮素-脫氧己糖-己糖;峰號(hào)5 對(duì)應(yīng)的特征碎片離子的質(zhì)荷比分別為465 與303,其代表的物質(zhì)可能為槲皮素-戊糖-己糖失去戊糖和失去戊糖及己糖的碎片離子;峰號(hào)6 對(duì)應(yīng)的特征碎片離子的質(zhì)荷比分別為465與303,其代表的物質(zhì)可能分別為槲皮素-脫氧己糖-己糖失去一分子脫氧己糖和失去脫氧己糖和己糖的碎片離子。
峰號(hào)10 和13 對(duì)應(yīng)的分子離子的質(zhì)荷比分別為551 與535,初步判斷其代表的物質(zhì)分別為槲皮素-丙二酰葡萄糖苷和山柰酚-丙二酰葡萄糖苷,且測(cè)定的相對(duì)分子質(zhì)量與其對(duì)應(yīng)的理論相對(duì)分子質(zhì)量相匹配。其碎片離子的質(zhì)荷比分別為303 與287,其可能分別是槲皮素-丙二酰葡萄糖苷和山柰酚-丙二酰-葡萄糖苷失去丙二酰葡萄糖的碎片離子。
峰號(hào)12 對(duì)應(yīng)的分子離子的質(zhì)荷比為443,初步判斷其代表的物質(zhì)為山柰酚-葡萄糖苷,測(cè)定的相對(duì)分子質(zhì)量與其對(duì)應(yīng)的理論相對(duì)分子質(zhì)量一致;其碎片離子質(zhì)荷比為287,其可能是山柰酚-葡萄糖苷失去一分子葡萄糖的碎片離子。
對(duì)于‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中矢車菊素糖苷類物質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果,可以通過將其與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比對(duì)而確認(rèn)。根據(jù)圖2B 中杜仲葉片提取液在510 nm 波長(zhǎng)下的譜圖中的保留時(shí)間,可初步判斷‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中含有矢車菊素-3-O 桑布糖苷和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷。由表1可知,峰號(hào)14 和15 分別代表矢車菊素-3-O-桑布糖苷與矢車菊素-3-O-葡萄糖苷,其碎片離子的質(zhì)荷比分別為287 與287,推測(cè)其分別為矢車菊素-3-O 桑布糖苷失去一分子桑布糖和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷失去葡萄糖的碎片離子(圖3C)。這一結(jié)果表明,在相同的試驗(yàn)條件下,杜仲葉片中矢車菊素-3-O-葡萄糖苷的色譜保留時(shí)間、二級(jí)質(zhì)譜碎片離子與其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品均一致;杜仲葉片中矢車菊素-3-O-桑布糖苷的色譜保留時(shí)間、二級(jí)質(zhì)譜碎片離子與其對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜分析參數(shù)也都一致。根據(jù)上述分析結(jié)果可以鑒別,‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中很可能含有矢車菊素-3-O-葡萄糖苷和矢車菊素-3-O-桑布糖苷。
圖4 華仲12 號(hào)’杜仲和‘華仲11 號(hào)’杜仲葉中15 種黃酮類物質(zhì)的含量分布情況Fig.4 Content distribution of 15 flavonoids in leaves of E.ulmoides ‘Huazhong No.12’ and ‘Huazhong 11’
兩種杜仲葉片中各種黃酮類物質(zhì)的含量見表1。由表1可知,‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中12 種黃酮類化合物的總含量為4.136 6 g·kg-1,‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-丙二酰-葡萄糖苷、槲皮素-戊糖-己糖、槲皮素-蕓香糖苷的含量均相對(duì)較高,其含量與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中其他黃酮類物質(zhì)的含量均有顯著差異。
從表1中還可看出,‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中共檢測(cè)到15 種黃酮類物質(zhì),其總含量為36.732 3 g·kg-1,約為‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)總含量的8.88 倍。其中,槲皮素糖苷類(10 種)、山柰酚糖苷類(3 種)、花色苷類(2 種)物質(zhì)的含量分別占其黃酮類物質(zhì)總含量的94.33%、4.39%、1.29%。槲皮素-戊糖-己糖和槲皮素-3-O-葡萄糖苷都是‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中的主要黃酮類物質(zhì),其含量分別占其組分總含量的48.80%與27.67%,此二者與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中對(duì)應(yīng)組分含量的差異均顯著,且與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中其他黃酮類組分的含量相比亦有顯著差異。作為‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中獨(dú)有的物質(zhì),槲皮素-3-O-半乳糖苷、矢車菊素-3-O-桑布糖苷、矢車菊素-3-O-葡萄糖苷含量分別為0.494 9、0.440 0、0.035 1 g·kg-1。比較分析‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組分與含量可知,除了‘華仲12 號(hào)’獨(dú)有的3 種物質(zhì)及槲皮素-脫氧己糖-己糖-己糖、槲皮素-丙二酰-葡萄糖苷、山柰酚-蕓香糖苷、山柰酚-丙二酰-葡萄糖苷外,‘華仲12 號(hào)’與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片間對(duì)應(yīng)的其他黃酮類物質(zhì)的含量均表現(xiàn)出顯著差異。
在反相液相色譜分離過程中,含有葡萄糖的黃酮醇糖苷類化合物的色譜保留時(shí)間一般長(zhǎng)于含有半乳糖的[20]。槲皮素-3-O-葡萄糖苷與槲皮素-3-O-半乳糖苷均屬于異構(gòu)體,結(jié)合保留時(shí)間及二級(jí)質(zhì)譜碎片離子分析后判斷,峰號(hào)8 和9 所代表的物質(zhì)分別為槲皮素-3-O-半乳糖苷與槲皮素-3-O-葡萄糖苷。
不同品種的杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的組成有所不同。研究結(jié)果表明,‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中獨(dú)有的3 種黃酮類組分分別為槲皮素-半乳糖苷、矢車菊素-桑布糖苷和矢車菊素-葡萄糖苷。唐芳瑞等[21]從杜仲葉片中鑒定出的8 種黃酮類物質(zhì)中,除了quercetin-3-O-rutinoside、quercetin-3-O-glucoside、quercetin-3-O-galactoside之外,還包括本研究未測(cè)得的槲皮素、quercetin-3-O-sambubioside、kaempherol-3-O-sambubioside 等。閆建昆等[22]從杜仲的干燥葉中分離得到了圣草素、山柰酚-3-Oα-L-鼠李糖苷、山柰酚-3-O-β-D-6’-乙?;拎咸擒盏? 種黃酮類物質(zhì)。在上述已報(bào)道的杜仲葉片中的黃酮類物質(zhì)中,‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中含有的矢車菊素-桑布糖苷和矢車菊素-葡萄糖苷均未見報(bào)道。
本研究從‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中鑒定出的黃酮類物質(zhì)共有15 種,與從‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片中鑒定出的黃酮類物質(zhì)相比,槲皮素-半乳糖苷、矢車菊素-桑布糖苷、矢車菊素-葡萄糖苷均為‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中獨(dú)有的,其含量分別占其組分總含量的1.39%、1.12%、0.10%?!A仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的總含量高達(dá)36.732 3 g·kg-1,約為‘華仲11 號(hào)’杜仲葉中的8.88 倍,說明‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的含量遠(yuǎn)高于‘華仲11 號(hào)’的。且作為‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中黃酮類物質(zhì)的主要組分,槲皮素-戊糖-己糖和槲皮素-3-O-葡萄糖苷的含量分別高達(dá)17.924 0 與10.164 1 g·kg-1,無論是與供試材料中其他黃酮類物質(zhì)相比,還是與‘華仲11 號(hào)’杜仲葉中各對(duì)應(yīng)組分相比,這2 種組分都有顯著差異。路買林等[23]曾報(bào)道,花色苷含量的變化是‘華仲12 號(hào)’杜仲葉色呈現(xiàn)紅色的直接原因。朱景樂等[24]曾以杜仲的3 種優(yōu)良無性系‘華仲11 號(hào)’‘華仲12 號(hào)’和密葉杜仲為試驗(yàn)材料,采用分光光度計(jì)法測(cè)定其葉片中花色苷的含量,結(jié)果表明,‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中花色苷的含量顯著高于‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片的,是‘華仲11 號(hào)’杜仲葉片的1.8 倍,他們指出,葉片中高含量的花色苷是‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片表現(xiàn)出紅色的主要原因。本研究結(jié)果表明,‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片具有3 種獨(dú)有的物質(zhì),其中的矢車菊素-桑布糖苷和矢車菊素-葡萄糖苷均屬于花色苷類,據(jù)此推測(cè),‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片的呈色很可能與其獨(dú)有的物質(zhì)有重要關(guān)系。再者,黃酮類物質(zhì)具有良好的藥用價(jià)值,‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中高含量的黃酮類物質(zhì)使其具有良好的開發(fā)利用前景。
綜上所述,本研究從‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片中共鑒定出15 種黃酮類物質(zhì),包括槲皮素糖苷類(10 種)、山柰素糖苷類(3 種)及花色苷類(2 種)物質(zhì)?!A仲12 號(hào)’杜仲葉片中存在高含量的黃酮類物質(zhì),與‘華仲11 號(hào)’杜仲相比,其多種組分含量也均顯著較高,且其獨(dú)具槲皮素-半乳糖苷、矢車菊素-桑布糖苷和矢車菊素-葡萄糖苷這3 種物質(zhì)。此3 種其獨(dú)有的物質(zhì)及多種高含量黃酮類組分的存在,可能共同影響著‘華仲12號(hào)’杜仲葉片的呈色,也是影響杜仲品種的觀賞價(jià)值、藥用價(jià)值及開發(fā)利用前景的重要因素。此研究結(jié)果對(duì)于 ‘華仲12 號(hào)’杜仲葉片化學(xué)成分的研究、特定組分的高效積累機(jī)理的研究、‘華仲12 號(hào)’杜仲的定向利用研究等方面都具有重要意義。