蠕形螨和角膜上皮樹突狀細胞與瞼緣炎相關(guān)性研究

崔兵杰，鄒媛媛，張敬一，張慧芹，韓風梅，梁沛

蠕形螨是人類最常見的寄生蟲，可見于眼瞼、纖毛、瞼板腺、面部及外耳道，其身體透明，形狀細長，分為頭頸部和尾部，身體前部有八條短腿[1]。蠕形螨主要感染途徑是接觸傳播，人類對其普遍易感[2]。由于眼瞼解剖學特征，常清潔不到位，這為蠕形螨的傳播和繁衍提供了良好的環(huán)境。已有研究[3]報道了蠕形螨與瞼緣炎之間存在重要關(guān)系。同時，瞼緣炎會影響到淚膜的功能，與眼表炎癥、干眼和免疫細胞相關(guān)，角膜上皮樹突狀細胞為抗原提呈細胞，其與干眼和眼表炎癥的發(fā)生密切相關(guān)[4]?；罨慕悄ど掀渫粻罴毎憩F(xiàn)在體積增大和樹突增多[5]。因此，本研究目的是定量檢測瞼緣炎患者睫毛毛囊內(nèi)的蠕形螨和角膜上皮樹突狀細胞，為瞼緣炎的診斷和治療提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2020 年3 月—2020 年12 月就診于滄州市中心醫(yī)院眼科門診的50 例(50 只眼)瞼緣炎患者，設(shè)為試驗組，年齡與性別相匹配的健康志愿者50例(50 只眼)為對照組。試驗組：男性20 例，女性30例，年齡25～76 歲，平均年齡（51.86±12.28）歲。對照組：男性28例，女性22例，年齡21～71歲，平均年齡（48.62±13.16）歲。2 組的年齡及性別差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。本研究已經(jīng)滄州市中心醫(yī)院倫理委員會審核并批準[批準號：2021-213-02（z）]。

1.2 診斷標準及排除標準

瞼緣炎診斷標準[6]：（1）有以下1 種或幾種眼表不適的表現(xiàn)，有眼紅、眼癢、異物感、眼瞼部有燒灼感等；（2）瞼緣充血、肥厚、瞼緣皮膚潮紅，有鱗屑或痂皮、糜爛等改變。

排除標準：（1）Stevens-Johnson 綜合征、類風濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾?。唬?）化學、熱或輻射損傷；（3）圓錐角膜、感染性角膜炎史；（4）眼部手術(shù)史；（5）過去3個月佩戴隱形眼鏡或藥物使用會改變眼表的患者。

1.3 研究方法

由同一位有經(jīng)驗的技師對所有患者進行活體共聚焦顯微鏡（in vivo confocal microscopy，IVCM）檢查，IVCM（德國海德堡公司，HRT-3）由Rostock 角膜模塊組件和海德堡視網(wǎng)膜激光斷層掃描系統(tǒng)Ⅲ代(HRT-Ⅲ)組成。檢測放大倍數(shù)為800 倍，激光波長670 nm，接觸式技術(shù)中掃描范圍400 μm×400 μm，軸向分辨率為1μm。

操作步驟：（1）向受檢者的結(jié)膜囊內(nèi)滴入鹽酸奧布卡因1滴行表面麻醉。（2）調(diào)好儀器、設(shè)好參數(shù)，受檢者注視固視燈，選取角膜中央?yún)^(qū)，預(yù)設(shè)置物鏡接觸與角膜的焦平面深度為0 μm，深度約為50～70 μm 處，能清晰顯示角膜上皮樹突狀細胞，無褶皺，并且對比度良好。（3）選擇有價值的3 張圖像并存盤，使用軟件自帶的細胞計數(shù)工具對角膜上皮樹突狀細胞進行計數(shù)，得出其密度，取平均值，并觀察其形態(tài)。（4）讓無菌接觸帽接觸受檢者下瞼睫毛根部，檢查者用棉簽輕按壓受試者下眼瞼來改變睫毛的方向，依次掃描顳側(cè)、中央和鼻側(cè)各3 根睫毛根部，共計9根睫毛，調(diào)整焦距以評估整個毛囊和睫毛根部，保存圖片。統(tǒng)計每個毛囊內(nèi)的蠕形螨數(shù)量，并合計總量，總量計為眼瞼毛囊蠕形螨數(shù)量（圖1）。

圖1 IVCM觀察睫毛毛囊內(nèi)蠕形螨感染情況

由另一位醫(yī)師對所有圖片進行分析。觀察并記錄患者的睫毛根部毛囊內(nèi)的蠕形螨數(shù)量和角膜上皮樹突狀細胞密度（圖2）。

圖2 IVCM觀察角膜上皮樹突狀細胞

1.4 統(tǒng)計學方法

使用SPSS23.0 軟件對數(shù)據(jù)進行分析。各測試數(shù)據(jù)以（）表示。2 組蠕形螨數(shù)量、角膜上皮樹突狀細胞密度的比較以及年齡的匹配均采用獨立樣本t檢驗，蠕形螨陽性率的比較和性別的匹配采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 2組蠕形螨感染率

試驗組蠕形螨感染（46/50）,陽性率為92%，對照組蠕形螨感染(34/50)，陽性率為68%。2組差異有統(tǒng)計學意義(χ2=9.000，P=0.003)。試驗組平均每個眼瞼感染蠕形螨數(shù)量(7.28±3.86)只，顯著高于對照組(4.02±3.79)只，差異有統(tǒng)計學意義(t=4.260，P=0.000)。試驗組平均每個毛囊感染蠕形螨數(shù)量(0.81±0.43)只，也顯著高于對照組(0.45±0.42)只，差異有統(tǒng)計學意義(t=4.260，P=0.000)。

2.2 角膜上皮樹突狀細胞密度分析

試驗組角膜上皮樹突狀細胞密度（53.44±11.55）個/mm2顯著高于對照組（20.28±6.96），差異有統(tǒng)計學意義(t=17.388，P=0.000)。

3 討論

蠕形螨有許多種，然而寄生在人體的蠕形螨只有毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨[7]。毛囊蠕形螨生活在睫毛的毛囊中，長時間會導致睫毛毛囊根部增生和過度角質(zhì)化，睫毛根部出現(xiàn)袖套狀分泌物，造成睫毛倒睫和脫落等病變；皮脂蠕形螨則寄居在瞼板腺和睫毛皮脂腺，長時間寄居會使瞼板腺口堵塞，導致淚液脂質(zhì)層缺少，破壞淚膜結(jié)構(gòu)，引起干眼癥[3,8]。近年來，瞼緣炎患者蠕形螨的診治越來越得到重視。最近，WANG 等[9]發(fā)表了一篇關(guān)于IVCM 的研究，IVCM 對蠕形螨感染的診斷準確率高達100%，而拔取睫毛在顯微鏡下觀察技術(shù)是有創(chuàng)的、不能重復進行。IVCM 與拔取睫毛在顯微鏡下觀察技術(shù)相比有很多優(yōu)點，它具有非侵入性，無需拔取睫毛，減少患者檢查痛苦，能夠?qū)Χ鄠€毛囊進行蠕形螨的檢測和計數(shù)，而且檢出率高，即使患者存在睫毛缺失，也能對殘存的毛囊進行檢查，由于它的可重復性好，能定期復查，所以可在最大程度上確保消除蠕形螨。目前IVCM 已成為診斷瞼緣蠕形螨感染的可靠工具。

蠕形螨被認為是一種條件性致病螨，其致病性與宿主的體質(zhì)、衛(wèi)生狀況以及螨種、感染度及微生物的協(xié)同作用等多方面因素有關(guān)[10]。正常人群的一般感染率20%～80%，老年人中蠕形螨的感染更加普遍，據(jù)相關(guān)文獻報道，在60 歲人群中蠕形螨的感染率為84%，70 歲以上人群蠕形螨的檢出率甚至可達100%[10-11]。本研究中，試驗組蠕形螨感染率為92%，對照組蠕形螨感染率為68%，試驗組和對照組蠕形螨感染率差異存在統(tǒng)計學意義。試驗組平均每個眼瞼感染蠕形螨數(shù)量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。本研究與RANDON 等[12]和KABATAS等[13]的研究結(jié)果相一致。本研究與BHANDARI等[14]的試驗組蠕形螨感染率相一致，但與對照組感染率差距較大，可能與研究樣本量大小有關(guān)?；铙w共聚焦顯微鏡檢查對蠕形螨感染陽性檢出率顯著高于睫毛采樣直接光鏡檢查，這也是本次試驗蠕形螨檢出率高的一個原因。感染蠕形螨的毛囊可見擴張，有程度不一樣的纖維化和破壞，可產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，睫毛毛囊根部袖套狀分泌物。另外，試驗組眼瞼感染蠕形螨數(shù)量顯著高于對照組，提示睫毛毛囊蠕形螨感染是瞼緣炎的一個重要危險因素。

瞼緣炎是眼瞼的亞急性或慢性炎癥反應(yīng)，病因復雜，如治療不及時，會引發(fā)更嚴重并發(fā)癥[15]。瞼緣炎長期不治愈，會使患者瞼緣變的鈍圓，皮膚黏膜交界線向內(nèi)偏移，反復刺激眼表組織，最終使角膜損傷[16]。角膜上皮樹突狀細胞是角膜重要的抗原提呈細胞，在免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，活化后可以在短時間內(nèi)釋放大量細胞因子，活化的樹突狀細胞能夠攝取和加工抗原，將加工后的抗原復合物提呈給T 細胞，其抗原提呈能力是B 淋巴細胞及巨噬細胞的10～100 倍，從而強烈激活T 細胞，進而引起機體初始以及獲得性免疫反應(yīng)，相反未成熟的樹突狀細胞使T 細胞處于安靜狀態(tài)，誘導免疫耐受[17]。IVCM廣泛應(yīng)用于角膜疾病的診治，它可以進行高分辨率活體角膜觀察，同時可快速、可靠地顯現(xiàn)和評估角膜全層顯微結(jié)構(gòu)，能實時檢測角膜上皮樹突狀細胞的圖像。CRUZAT 等[18-19]發(fā)現(xiàn)，感染性角膜炎的患眼角膜中央?yún)^(qū)角膜上皮樹突狀細胞密度明顯增高，形態(tài)發(fā)生變化，而且對側(cè)健眼的角膜中央?yún)^(qū)樹突細胞密度也增加。本研究結(jié)果基本與上面一致，發(fā)現(xiàn)試驗組角膜上皮樹突狀細胞比對照組的數(shù)量多，胞體較大、樹突增多，從一定程度上可以反映瞼緣炎所造成的眼表炎癥。分析可能原因：（1）瞼緣蠕形螨感染與瞼板腺功能障礙和角膜炎的發(fā)生有相關(guān)[20]，瞼緣炎患者蠕形螨感染率高，感染數(shù)量多，引起瞼板腺功能障礙[21]，從而脂質(zhì)分泌減少，使淚膜穩(wěn)定性下降，形成蒸發(fā)過強型干眼，造成眼表炎癥，在細胞水平主要表現(xiàn)在角膜樹突狀細胞的活化和密度增加[22]；（2）蠕形螨長時間在毛囊內(nèi)會導致毛囊擴張、阻塞，其代謝產(chǎn)物可引起宿主產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應(yīng)，嚴重時會引起蠕形螨相關(guān)的角結(jié)膜炎[23]，使角膜上皮樹突狀細胞密度增多。所以臨床上在治療瞼緣炎的同時，也要關(guān)注瞼緣炎有可能會引起的干眼或眼表炎癥。

綜上所述，IVCM 可以有效的對瞼緣炎患者睫毛毛囊內(nèi)的蠕形螨和角膜上皮樹突狀細胞進行無創(chuàng)、定量檢測，為瞼緣炎的診斷和治療提供依據(jù)。