槲蕨（骨碎補(bǔ)）根莖繁殖技術(shù)研究

劉燕琴，肖 忠，韓蓉蓉,*，劉春雷，王 黎，吳廷和

（1.重慶市藥物種植研究所，重慶南川 408435；2.特色生物資源研究與利用川渝共建重點(diǎn)實驗室，重慶南川 408435；3.酉陽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會，重慶酉陽 409800）

骨碎補(bǔ)入藥早期記載于《開寶本草》，后收錄入《本草綱目》；現(xiàn)《中國藥典》2020版（一部）的水龍骨科植物槲蕨[Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm.][1]，即是《中國植物志》記載的水龍骨科槲蕨屬植物槲蕨（Drynaria roosiiNakaike）[2]，其以干燥根狀莖入藥，柚皮苷（C27H32O14）≥0.50%為控制指標(biāo)。骨碎補(bǔ)性苦、溫；歸肝、腎經(jīng)；具有療傷止痛、補(bǔ)腎強(qiáng)骨、消風(fēng)祛斑，治療跌撲閃挫、筋骨折傷、腎虛腰痛、筋骨痿軟、耳鳴耳聾、牙齒松動及斑禿、白癜風(fēng)的功效[3-4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，骨碎補(bǔ)在抗炎癥、預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松[5-6]、促進(jìn)骨折愈合[7-9]、預(yù)防牙齒松動[10-11]、改善記憶力[12-13]等方面藥理效果顯著。槲蕨因野生資源采集、破壞嚴(yán)重，資源銳減，已于2002年被建議列入珍稀植物三級保護(hù)[14]，發(fā)展育苗、人工種植成為必然趨勢；根莖育苗技術(shù)具有生長周期短、易于推廣等優(yōu)勢，研究根莖繁殖技術(shù)對發(fā)展槲蕨人工種植具有重要意義[15]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料采自于重慶市南川區(qū)水江鎮(zhèn)樂村石壁（海拔1 386 m，經(jīng)緯度N29° 09.4734′、E107°05.9559′），經(jīng)重慶市藥物種植研究所植物資源專家劉正宇鑒定，為《中國藥典》（2020 年版）中藥材骨碎補(bǔ)基原植物。

1.2 試驗地點(diǎn)

重慶市南川區(qū)華爾寺種植園（海拔701 m，經(jīng)緯度為N 29°05.4104′、E 107°03.1580′），環(huán)境郁閉度為0.5～0.6。

1.3 試驗方法

1.3.1 材料前處理及定植方法

選取生長齡為2～3 年的健壯根莖，剪去孢子葉，保留營養(yǎng)葉、毛狀鱗片和須根，切成長度為8～12 cm的根狀莖段，作為繁殖材料；切斷口用0.2%～0.3%的高錳酸鉀水溶液噴濕創(chuàng)口消毒，待表面水分風(fēng)干備用。

樹上定植法：選取樹皮緊致、胸徑在5 cm 以上的香樟樹、櫟樹、青岡樹等的樹干為附著物，將根莖須根貼在樹皮上，用帶狀布條纏繞固定，單株間距5～6 cm處綁縛苔蘚，呈0.2～0.5 m2小片定植。

基質(zhì)扦插法（壟栽）：選取林下郁閉度為0.5～0.6、土壤類型為棕色壤土的坡地（坡度≥15°），起高約40 cm、寬30～50 cm 的壟。以V(粗泥炭土)∶V(粗河沙)=2∶3 為基質(zhì)鋪厚約10 cm，根莖插入基質(zhì)3～4 cm深，株間距8～10 cm，行間距10～12 cm。

1.3.2 定植時間篩選

在2021 年2—11 月，每月以樹、壟定植，觀測其生根、葉片生長、新根莖生長等情況。

1.3.3 藥劑篩選

于2021 年4 月，以NAA+6-BA+GA 組合[1#，50 mg∶5 mg∶1 mg (為NAA、6-BA、GA 之比，下同)；2#，90 mg∶5 mg∶1 mg；3#，130 mg∶5 mg∶1 mg；4#，清水對照組]噴濕根莖并風(fēng)干表面水分，定植，每個處理3個重復(fù)，研究藥劑對根莖繁殖的影響。

1.3.4 田間管理及觀測

根莖定植后，定期用噴霧器噴水（10～20 d 噴水1次）保持濕度。

觀測統(tǒng)計指標(biāo)包括生根時間、新生須根數(shù)、新葉生長情況、新根莖生長情況、成活率、植株生長勢。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用Excel與SPSS 23.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 定植時間對槲蕨根莖繁殖的影響

由表1、表2可知，在不同定植時間下，槲蕨根莖的生根時間、生根數(shù)、新根莖萌發(fā)時間及增殖系數(shù)、成活率有顯著差異，其中以2—8月扦插繁殖的效果較好；樹上定植、基質(zhì)扦插法在2—8月時間段成活率均可達(dá)到78%以上，其中4—6月扦插繁殖的生根、新根莖生長數(shù)、成活率方面表現(xiàn)最好。

表1 不同定植時間對樹上定植槲蕨繁殖的影響

表2 不同定植時間對基質(zhì)扦插槲蕨繁殖的影響

可以看出，樹上定植與基質(zhì)扦插的成活率隨定植時間呈現(xiàn)相似的趨勢，并均在4—6月達(dá)到最高。

2.2 藥劑處理對槲蕨根莖繁殖的影響

由表3、表4可知，藥劑處理對扦插根莖生長有一定的促進(jìn)作用，如對新生須根數(shù)、新生根莖數(shù)有促進(jìn)作用，但對孢子葉的萌發(fā)有延緩效果。本試驗中，1#、2#、3#藥劑的6-BA 和GA 濃度相同，只是NAA濃度隨編號擴(kuò)大而逐漸增大，可見隨著NAA 濃度增加其啟動效果呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，2#藥劑處理在兩種定植方法中均表現(xiàn)較好。

表3 藥劑處理對樹上定植槲蕨根莖繁殖的影響

表4 藥劑處理對基質(zhì)扦插槲蕨繁殖的影響

3 討論與小結(jié)

3.1 討論

3.1.1 槲蕨根莖繁殖時間與其生物學(xué)特性有較大關(guān)系

槲蕨為附生蕨類植物，附著在樹皮、石壁等地方生長，生物學(xué)特性及生境特別[4]。目前槲蕨資源大都是野生孢子繁殖，但是孢子繁殖周期長，成本高，限制了人工種植。采用樹上定植、基質(zhì)扦插可以有效地模擬槲蕨附生特性，實現(xiàn)其快速人工繁殖。

根據(jù)西南地區(qū)槲蕨生長周期及特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)在10—12 月及次年1 月溫度較低、空氣濕度低，不利于槲蕨生長，生長緩慢；在溫度較高、空氣濕度高的7—8月，也不利于槲蕨生長。而在溫度、濕度適宜的2—6月，其單株平均新生根數(shù)、新生塊莖數(shù)、成活率等方面均呈現(xiàn)出優(yōu)勢。

3.1.2 藥劑處理對槲蕨根莖繁殖的影響

藥劑處理槲蕨根莖，對槲蕨新根生長、新根莖萌發(fā)等有一定的促進(jìn)作用。文偉等以槲蕨的莖、葉片、葉柄等為外植體，研究不同培養(yǎng)基對其生根效果的影響，發(fā)現(xiàn)以1/2MS+NAA0.1 mg·L－1培養(yǎng)基的生根效果最好[16]；嚴(yán)福林等研究發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)?shù)乃巹┨幚?、扦插基質(zhì)對槲蕨的扦插繁殖有促進(jìn)作用[17]；這些研究結(jié)果與本研究結(jié)果相似。

3.2 小結(jié)

本試驗結(jié)果表明，在西南地區(qū)4—6月，采用組合藥劑NAA90 mg +6-BA5 mg +GA1 mg 噴施，槲蕨（骨碎補(bǔ)）根莖在樹上定植和基質(zhì)扦插均可實現(xiàn)有效的繁殖。