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    HE4和T淋巴細(xì)胞亞群在上皮性卵巢癌化療前后的變化及其診斷價(jià)值

    2022-11-26 08:31:44古麗加那提蔣麗萍趙紹杰
    中國婦幼健康研究 2022年12期
    關(guān)鍵詞:亞群卵巢癌外周血

    古麗加那提,袁 華,蔣麗萍,趙紹杰,楊 蕊

    (無錫市婦幼保健院婦科,江蘇 無錫 214000)

    上皮性卵巢癌是卵巢癌中最常見的類型,目前腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)后輔以鉑類化療是其治療的主要方法,但大多數(shù)患者會(huì)在治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)及耐藥的情況[1]。研究表明血清人附睪分泌蛋白4(human epididymis protein-4,HE4)是近年來發(fā)現(xiàn)的敏感卵巢癌腫瘤標(biāo)志物之一,其血清水平可作為監(jiān)測(cè)卵巢癌患者化療后復(fù)發(fā)情況的預(yù)測(cè)指標(biāo)[2]。同時(shí),卵巢癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)也可反應(yīng)腫瘤的進(jìn)展情況[3]。本研究比較了卵巢癌患者化療前及不同療程化療后血清HE4水平及血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá),旨在探究HE4和T淋巴細(xì)胞亞群在卵巢癌患者治療過程中的應(yīng)用價(jià)值,以期為患者的治療效果評(píng)估及預(yù)后的判斷提供幫助。

    1 資料與方法

    1.1 研究對(duì)象

    選擇2019年2月至2020年12月在無錫市婦幼保健院收治的經(jīng)手術(shù)和病理檢查確診的68例卵巢癌患者為觀察組,其中卵巢漿液性癌31例,粘液性腺癌9例,子宮內(nèi)膜樣癌8例,其他卵巢惡性腫瘤20例。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合上皮性卵巢癌診斷標(biāo)準(zhǔn);②無其他基礎(chǔ)性疾病;③臨床和CT影像資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①病理診斷結(jié)果為交界性腫瘤的患者;②合并其他惡性腫瘤的患者;③合并有嚴(yán)重的心臟、肝、腎功能障礙的患者;④對(duì)本研究所用藥物過敏或不耐受的患者。本研究根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟制定的分期標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者進(jìn)行分期,其中I期14例,II期9例,III期33例,IV期12例。患者的年齡為36~75歲,平均年齡為(53.47±12.18)歲。所有入組患者在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)后兩個(gè)月內(nèi)予以化療,化療方案為鉑類+紫杉醇類的一線化療,每3周為一個(gè)療程。另選取在我院門診進(jìn)行體檢的66例健康女性作為對(duì)照組,其年齡為35~77歲,平均年齡為(54.78±11.69)歲,兩組研究對(duì)象年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有患者均簽署了知情同意書。

    1.2 標(biāo)本的采集與處理

    所有研究對(duì)象于術(shù)后及每個(gè)化療周期入院前后在空腹?fàn)顟B(tài)下采集靜脈血3~5mL。在室溫下靜置30min,并于3 000r/min離心15min后收集上血清,將血清置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3 血清HE4檢測(cè)

    使用酶聯(lián)免疫試劑盒(LD公司,德國)檢測(cè)血清樣本中HE4的濃度,實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格按照試劑盒的說明進(jìn)行,陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為HE4>150pmol/L。

    1.4 外周血T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)

    將2mL的靜脈血注入到淋巴細(xì)胞分離液中,并于1 500r/min離心10min后收集淋巴細(xì)胞層,用PBS緩沖液漂洗、離心2次后將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為106個(gè)/mL,備用。取100μL淋巴細(xì)胞液,向其中加入10μL的相應(yīng)抗體液,于1 500r/min離心15min后用PBS緩沖液漂洗、離心1次,接著向其中加入500μL PBS,并通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+、CD4+及CD8+的細(xì)胞水平。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 術(shù)后化療前患者血清HE4水平

    與對(duì)照組相比,觀察組患者術(shù)后化療前的血清HE4水平顯著升高(t=5.078,P=0.012),見圖1。

    2.2 術(shù)后化療前患者外周血T細(xì)胞亞群水平

    與對(duì)照組相比,觀察組患者術(shù)后化療前的外周血T淋巴細(xì)胞CD4亞群顯著減少,CD8亞群顯著增加,CD4+/CD8+比值顯著下降(t值分別為-2.371、-5.064、-3.823,P<0.05),見表1。

    注:*P<0.05圖1 術(shù)后化療前患者血清HE4水平與對(duì)照組的比較Fig.1 Comparison of serum HE4 level between the patients before postoperative chemotherapy and the control group

    表1 術(shù)后化療前患者血清T細(xì)胞亞群水平與對(duì)照組的對(duì)比Table 1 Comparison of serum T cell subsets levels between the patients before postoperative chemotherapy

    2.3 術(shù)后各化療周期患者血清HE水平的變化

    與術(shù)后化療前相比,卵巢癌患者血清中HE4水平隨化療次數(shù)的增加而顯著降低(t值為2.453~6.785,P<0.05),在第5次化療后基本可恢復(fù)至正常,見圖2。

    注:*與術(shù)后化療前比較,P<0.05;#與第1療程結(jié)束比較,P<0.05;&與第2療程結(jié)束比較,P<0.05;△與第3療程結(jié)束比較,P<0.05;@與第4療程結(jié)束比較,P<0.05圖2 術(shù)后各化療周期患者血清HE水平的變化Fig.2 Changes of serum HE level in patients with various chemotherapy cycles after operation

    2.4 術(shù)后各化療周期患者外周血T細(xì)胞亞群水平的變化

    與術(shù)后化療前相比,術(shù)后化療第1~4療程結(jié)束時(shí)CD4+和CD4+/CD8+的水平顯著降低(t值為2.546~5.908,P<0.05),而CD8+的水平顯著升高(t值為2.219~5.304,P<0.05)。從第5療程結(jié)束開始,患者的CD4+、CD8+和CD4+/CD8+等細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)水平有所恢復(fù),見表2。

    表2 術(shù)后各化療周期患者血清T細(xì)胞亞群水平的變化Table 2 Changes of serum T cell subsets in patients with various chemotherapy cycles after

    2.5 HE4及CD4+/CD8+診斷卵巢癌的效能

    ROC曲線顯示,血清HE4診斷卵巢癌的曲線下面積(area under the curve,AUC)為0.964(95%CI:0.938~0.985),CD4+/CD8+診斷卵巢癌的AUC為0.887(95%CI:0.829~0.945),二者聯(lián)合診斷卵巢癌的AUC為0.988(95%CI:0.974~1.000),這提示聯(lián)合檢測(cè)有助于提高診斷效能。進(jìn)一步分析HE4、CD4+/CD8+及二者聯(lián)合對(duì)卵巢癌診斷的特異性和敏感性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HE4的敏感度和特異度分別為94.1%和90.0%,血清CD4+/CD8+的敏感度和特異度分別為82.4%和86.4%,二者聯(lián)合的敏感度和特異度分別為98.5%和92.4%,見圖3。

    圖3 血清HE4、CD4+/CD8+及二者聯(lián)合診斷卵巢癌的ROC曲線Fig.3 ROC curves of serum HE4,CD4+/CD8+ and their combination in the diagnosis of ovarian cancer

    3 討論

    3.1 HE4在卵巢癌中的應(yīng)用

    上皮性卵巢癌主要包括漿液性腺癌、粘液性腺癌、子宮內(nèi)膜樣腺癌、透明細(xì)胞癌等類型。HE4是近年來發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤標(biāo)志物,具有高靈敏度和高特異性等特點(diǎn)。已有研究表明HE4在檢測(cè)惡性腫瘤疾病狀態(tài)、觀察患者療效及反映復(fù)發(fā)情況等方面起著重要的作用[4-5]。Yang等[6]在一項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)血清HE4濃度在卵巢癌患者中顯著升高,其可與CA125互補(bǔ)用于早期上皮性卵巢癌的診斷。Scaletta等[7]的一項(xiàng)meta分析則發(fā)現(xiàn)HE4在卵巢癌患者血清中的表達(dá)與腫瘤分期和復(fù)發(fā)有密切關(guān)系。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組相比,卵巢癌患者術(shù)后化療前的血清HE4水平顯著升高,且與術(shù)后化療前相比,其血清中HE4水平隨化療次數(shù)的增加而顯著降低,在第5次化療后基本可恢復(fù)至正常,提示HE4可作為幫助評(píng)判療效的有效血清學(xué)生物標(biāo)志物。

    3.2 T淋巴細(xì)胞亞群與卵巢癌患者療效關(guān)系

    在腫瘤發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移的過程中,機(jī)體的免疫功能扮演著重要角色。研究顯示,在機(jī)體對(duì)抗腫瘤的免疫反應(yīng)中,由T淋巴細(xì)胞主導(dǎo)的細(xì)胞免疫發(fā)揮了重要作用[8-9]。T淋巴細(xì)胞是淋巴細(xì)胞中數(shù)量最多且功能最為復(fù)雜的一類細(xì)胞,主要通過胸腺的淋巴干細(xì)胞分化而來[10]。其主要分為兩類亞群,一類是MHC-I類抗原限制的CD8+T細(xì)胞,其可抑制抗體的合成與分泌,使腫瘤逃脫免疫體統(tǒng)的攻擊;另一類是MCH-II類抗原限制的CD4+T細(xì)胞,其數(shù)量可反映機(jī)體抗腫瘤免疫功能的變化;而CD3+T細(xì)胞則反映了CD4+和CD8+T細(xì)胞的整體水平。CD4+和CD8+T細(xì)胞之間相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)是機(jī)體能進(jìn)行正常免疫應(yīng)答的關(guān)鍵,其比率對(duì)患者預(yù)后情況的預(yù)測(cè)具有重要的意義[11]。本研究結(jié)果顯示,卵巢癌患者在腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)后的化療第1療程結(jié)束時(shí),外周血T淋巴細(xì)胞CD4亞群顯著減少,CD8亞群顯著增加,CD4+/CD8+比值顯著下降。此外,術(shù)后化療第1~4療程結(jié)束時(shí)CD4+和CD4+/CD8+的水平顯著降低,而CD8+的水平顯著升高,從第5療程結(jié)束開始,患者的CD4+、CD8+和CD4+/CD8+等細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)水平有所恢復(fù),提示化療在抑制機(jī)體免疫的同時(shí)還可恢復(fù)及平衡患者的免疫功能,隨著化療周期的延長(zhǎng),其對(duì)機(jī)體免疫的促進(jìn)作用開始逐步顯現(xiàn)。

    3.3 HE4水平及T淋巴細(xì)胞亞群在診斷卵巢癌中的價(jià)值

    卵巢癌屬于女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤之一,發(fā)病率雖低于宮頸癌和子宮體癌,但其復(fù)發(fā)率和死亡率極高,致死率位居生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位[12]。由于卵巢癌的早期臨床癥狀不典型,故難以被發(fā)現(xiàn),80%患者就診時(shí)已是晚期,常出現(xiàn)腹盆腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[13]。因此,當(dāng)前需要尋找一種靈敏、準(zhǔn)確的診療評(píng)估手段,以對(duì)卵巢癌患者術(shù)后的化療療效進(jìn)行評(píng)估。本研究分析了HE4、CD4+/CD8+及二者聯(lián)合診斷卵巢癌的效能,結(jié)果顯示血清HE4的曲線下面積為0.964,敏感度和特異度分別為94.1%和90.0%;外周血CD4+/CD8+的曲線下面積為0.887,敏感度和特異度分別為82.4%和86.4%;二者聯(lián)合的曲線下面積為0.988,敏感度和特異度分別為98.5%和92.4%,提示聯(lián)合檢測(cè)有助于提高診斷價(jià)值,其效能優(yōu)于單獨(dú)使用的預(yù)測(cè)價(jià)值。健康女性血清中HE4的水平為60~150 pmol/L,其在上皮性卵巢癌患者中顯著升高。研究表明HE4在鑒別卵巢良惡性腫瘤的特異性甚至高于CA125,且其與卵巢癌惡性特征及預(yù)后相關(guān),可用于患者臨床療效的預(yù)測(cè)[14]。

    綜上所述,本研究通過對(duì)化療前后卵巢癌患者血清HE4的濃度變化及T細(xì)胞亞群的變化進(jìn)行分析,為患者臨床療效的監(jiān)測(cè)及預(yù)后的判斷提供了參考。但本研究的樣本量較少,且受到回顧性研究的限制,使結(jié)果具有一定的局限性。今后我們?nèi)孕钄U(kuò)大樣本量以進(jìn)一步觀察。

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