和厚樸酚糖苷化衍生物的合成及防治結(jié)腸癌作用機(jī)制的預(yù)測(cè)*

吳蘭蝶，黨笑笑，李 軍，董登祥▲

(1貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550000；2西安解碼生物科技有限公司，陜西 西安 710000)

和厚樸酚(Honokiol，HNK)是一種從木蘭屬植物的葉和樹皮中分離得到的帶有烯丙基側(cè)鏈的聯(lián)苯二酚類天然化合物，HNK最初是由M.obovata學(xué)者[1]從厚樸藥材中提取分離得來，且命名的一種白色粉末狀酚類化合物。HNK[2]易溶于極性較大或中極性的有機(jī)溶劑，難溶于水。雖然近年來學(xué)者們研究發(fā)現(xiàn)[3-4]，HNK除了擁有傳統(tǒng)厚樸藥材的功效外，還具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗抑郁、抗腫瘤、肌肉松弛及抗痙攣、保護(hù)心腦血管、降低血糖等藥理作用。HNK抗腫瘤作用主要表現(xiàn)在抗結(jié)腸癌[5-6]，抗肺癌[7-8]，抗膀胱癌[9-10]，抗黑色素瘤[11-12]，抗卵巢癌[13-14]，尤其近年來HNK抗腫瘤作用成為了廣大研究人員的熱點(diǎn)[15]。

近年來人們將HNK作為一種天然的先導(dǎo)化合物，對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾[16-18]。修飾和改造大多集中在酚羥基、烯丙基和酚羥基鄰位上，其中主要位點(diǎn)修飾在酚羥基和烯丙基。但通過研究表明[19]，其烯丙基的有無(wú)與抗菌作用有關(guān)，與抗腫瘤作用無(wú)關(guān)。徐詠斌[20]將HNK甲?；?，再與鹽酸羥胺生成3個(gè)和厚樸酚的衍生物，首次采用高速逆流色譜對(duì)合成的和厚樸酚生物進(jìn)行分離純化。黃齊茂[21]首次將HNK引入光動(dòng)力領(lǐng)域，將該中藥活性小分子與特定卟啉橋連，合成得到和厚樸酚橋連卟啉衍生物。廖世莉[22]將和厚樸酚、槲皮素和小檗堿結(jié)合形成烴聯(lián)結(jié)構(gòu)，并進(jìn)行體外抗肝癌HepG2細(xì)胞活性評(píng)價(jià)。史曉佳[23]將線粒體靶向載體小檗堿構(gòu)筑于和厚樸酚分子中，合成10個(gè)以小檗堿為線粒體靶向載體的和厚樸酚衍生物，并在HepG2斑馬魚移植瘤模型上進(jìn)行抗腫瘤活性與細(xì)胞選擇性。相關(guān)研究[24-26]通過引入酯基、酰肼等結(jié)構(gòu)通過烴化反應(yīng)、還原、電子重排、硼氫化等反應(yīng)合成了和厚樸酚衍生物。糖基化修飾[27-29]在蛋白質(zhì)分子和組織細(xì)胞間進(jìn)行識(shí)別、粘附和遷移，調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂和分化以及組織生長(zhǎng)與修復(fù)、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移機(jī)理；經(jīng)糖修飾后的藥物增加了生物利用度，使得用藥間隔延長(zhǎng)。

本研究主要以D-半乳糖、L-巖藻糖、D-乳糖、D-麥芽糖為起始原料，對(duì)糖上羥基進(jìn)行保護(hù)與去保護(hù)，得到一系列的糖片段，利用合成的糖片段對(duì)HNK的4′-OH進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾合成4個(gè)和厚樸酚衍生物(圖1)，所用原料易得，合成簡(jiǎn)單，不僅改善和厚樸酚穩(wěn)定性差及水溶性低的問題，并且也豐富了和厚樸酚糖苷化衍生物的種類，為和厚樸酚類藥物及其衍生物的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。

圖1 目標(biāo)化合物的合成路線

1 實(shí)驗(yàn)與方法

1.1 儀器與試劑

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(EYELA-OSB-2200)、循環(huán)水式真空泵(SHZ-D-III)、HJ-3數(shù)顯恒溫磁力攪拌器、三用紫外分析儀(WFH-203B)、INOVA-400與INOVA-500核磁共振儀(CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))；FINNIGANLACQ-DECA質(zhì)譜儀。

D-半乳糖、L-巖藻糖、D-乳糖、D-麥芽糖、吡啶、三氯乙腈，均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。和厚樸酚對(duì)照品，西安開來生物工程有限公司。2，3，4，6-四-O-乙?；?D-吡喃半乳糖亞胺脂(a)、乙基-S-2，3，4-三-乙?；?L-吡喃巖藻糖苷(b)、2′，3′，4′，6′-四-O-乙?；?β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，4，6-四-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖亞胺脂(c)、2′，3′，4′，6′-四-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-2，3，4，6-四-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖亞胺脂(d)，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 和厚樸酚糖苷化衍生物的合成

1.2.1 化合物1(和厚樸酚-4′-O-β-D-吡喃半乳糖苷)的合成

精密稱量100 mg(0.37 mmol)HNK和50 mg化合物a置于50 mL干燥反應(yīng)瓶中，加入適量DCM溶解，用N2保護(hù)，將反應(yīng)瓶置于0 ℃平衡10 min后，加入3 μL TMSOTf，TLC監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全(顯色劑為5% H2SO4-C2H5OH，展開劑為：Cy∶EtOAc=2∶1，Rf=0.34)，加入適量TEA調(diào)節(jié)反應(yīng)體系pH至中性，用DCM萃取，收集有機(jī)相層，用MgSO4除水，過濾，濃縮，得粗產(chǎn)物，用200-300目硅膠填充硅膠柱純化粗產(chǎn)物(洗脫劑為：Cy∶EtOAc=5∶1/8∶1)，得淡黃色固體和厚樸酚-4′-O-2，3，4，6-四-O-乙?；?β-D-吡喃半乳糖苷(化合物A)56 mg，產(chǎn)率為60.5%。

精密稱量50 mg(化合物A)，以及10 mL新制甲醇鈉(NaOMe)(稱取Na粒100 mg置于10 mL MeOH調(diào)至pH=11～12)置于反應(yīng)瓶中，加適量MeOH溶解底物，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)，用TLC監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全(展開劑為：Cy∶EtOAc=2∶1)，加入陰離子交換樹脂，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系pH至中性，萃取，除水，過濾，濃縮，用凝膠柱純化粗產(chǎn)物(洗脫劑為甲醇)，得白色固體粉末(化合物1)49 mg，收率為97.6%。

1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ7.56(d，J =3.2 Hz，1H，Ar-6’)，7.46(s，1H，Ar-6)，7.15(dd，J =8.4，2.3 Hz，1H，Ar-4)，7.07(d，J =2.2 Hz，1H，Ar-3)，6.92(d，J =8.4 Hz，1H，Ar-5’)，6.06～5.94(m，2H，8，8’-H)，5.47(s，1H，Ar-3’)，5.31(d，J =13.6 Hz，1H，Glu-1-H)，4.46(d，J =5.2 Hz，2H，9’-H)，4.32(d，J =6.7 Hz，1H，9-H)，4.24(dd，J =11.2，6.0 Hz，4H，7，7’-H)，3.45～3.38(m，5H，Glu-2，3，5，6-H)。13C NMR(151 MHz，CDCl3)δ159.9(Ar-C4’)，155.5(Ar-C2)，137.8(Ar-C2’)，131.7(C8’，C8)，131.5(Ar-C4)，130.9(Ar-C5)，130.7(Ar-C1’)，130.5(Ar-C1’)，129.9(Ar-C1)，128.4(Ar-C4)，128.1(Ar-C6)，127.8(C9，C9’)，121.1(Ar-C3)，120.7(Ar-C3’)，115.4(Glu-C1)，111.1(C9’，C9)，77.2～53.4(Glu-C2，C3，C4，C5，C6)，31.9(C7’，C7)。

1.2.2 化合物2(和厚樸酚-4′-O-α-L-吡喃巖藻糖苷)的合成

精密稱量100 mg HNK、50 mg化合物b、120 mg NBS、50 mg分子篩放置反應(yīng)瓶中，適量DCM溶解，用N2保護(hù)，將反應(yīng)瓶置于0 ℃平衡10 min后，取3 μL TMSOTf 加入，TLC監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全(展開劑為：Cy∶EtOAc=2∶1，Rf=0.32)。加適量TEA，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系pH至中性，DCM萃取，收集有機(jī)相，干燥，過濾，濃縮，得粗產(chǎn)物。用硅膠柱后純化粗產(chǎn)物(洗脫劑為：Cy∶EtOAc=5∶1/8∶1)，得淡黃色固體和厚樸酚-4′-O-2，3，4-四-O-乙?；?α-L-吡喃巖藻糖苷(化合物B)67 mg，產(chǎn)率為68.6%。

精密稱量50 mg化合物B，以及10 mL新制甲醇鈉(NaOMe)置于反應(yīng)瓶中，以甲醇(MeOH)為溶劑，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)。TLC監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全(展開劑為：Cy∶EtOAc=2∶1)。加入陰離子交換樹脂，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系pH至中性，萃取，除水，過濾，濃縮，得到粗產(chǎn)物。用凝膠柱純化粗產(chǎn)物(洗脫劑為甲醇)，得白色固體粉末(化合物2)512 mg，收率為99.8%。

1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ7.28(s，1H)，6.27(d，J =3.9 Hz，2H，8，8’-H)，5.48(d，J =3.6 Hz，1H，Glu-1-H)，5.42(dd，J =10.9，3.4 Hz，2H，Ar-4，6’-OH)，5.33(d，J =0.9 Hz，4H，9，9’-H)，5.26(d，J =1.6 Hz，2H，Glu-2，3-H)，5.16(dd，J =10.8，3.6 Hz，2H，Ar-3，5’-H)，4.43(d，J =7.0 Hz，2H，Glu-4，5-H)，3.87(dd，J =6.4，1.0 Hz，4H，7，7’-H)，1.24(d，J =6.4 Hz，3H，CH3)。13C NMR(151 MHz，CDCl3)δ155.4(Ar-C2)，152.6(Ar-C6’)，137.8(Ar-C2’)，137.9(Ar-C8’)，136.5(Ar-C8)，132.5(Ar-C3’)，131.7(Ar-C5)，130.1(Ar-C2’)，129.6(Ar-C4’)，129.0(Ar-C4)，128.0(Ar-C1’)，127.4(Ar-C3)，126.5(Ar-C6)，117.8(Ar-C1)，116.1(Ar-C9)，115.6(Ar-C9’)，114.5(Ar-C5’)，102.0(Glu-C1)，73.3～71.7(Glu-C4，C3，C2，C5)，39.4(Ar-C7’)，34.0(Ar-C7)。

1.2.3 化合物3(和厚樸酚-4′-O-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷)的合成

精密稱量100 mg HNK、30 mg分子篩和50 mg化合物c放置反應(yīng)瓶中，加適量DCM溶解，用N2保護(hù)，將反應(yīng)瓶置于0 ℃平衡10 min后，量取3 μL TMSOTf加入，TLC監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全(展開劑為：Cy∶EtOAc=2∶1，Rf=0.35)。加適量TEA，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH至中性，DCM萃取，收集有機(jī)相，干燥，過濾，濃縮，得粗產(chǎn)物。用硅膠柱純化粗產(chǎn)物(洗脫劑為：Cy∶EtOAc=5∶1/8∶1)，得淡黃色固體和厚樸酚-4′-O-(2′，3′，4′，6′-四-O-乙?；?β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2，3，4，6-四-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物C)60 mg，產(chǎn)率為63.6%。

精密稱量50 mg化合物C，以及10 mL新制甲醇鈉(NaOMe)置于反應(yīng)瓶中，以甲醇(MeOH)為溶劑，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)。TLC監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全(展開劑為：Cy∶EtOAc=2∶1)。加入陰離子交換樹脂，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH至中性，萃取，除水，過濾，濃縮，得到粗產(chǎn)物。用凝膠柱純化粗產(chǎn)物(洗脫劑為甲醇)，得白色固體粉末(化合物3)51 mg，收率為96.8%。。

1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ7.79(dd，J =8.4，3.0 Hz，1H，Ar-6’)，7.75～7.70(m，1H，Ar-4)，7.60～7.49(m，1H，Ar-3)，7.42(t，J =18.1 Hz，1H，Ar-5’)，7.29(s，1H，Ar-6)，7.11(dd，J =11.9，8.0 Hz，4H，8，8’-H)，5.62(d，J =10.3 Hz，1H，Glu-1-H)，4.43～4.36(m，1H，Glu-1’-H)，4.33(t，J =6.6 Hz，4H，9，9’-H)，4.28～4.15(m，4H，7，7’-H)，4.02～3.94(m，5H，Glu-2，3，5，6-H)，3.94～3.84(m，5H，Glu-2’，3’，5’，6’-H)。13C NMR(151 MHz，CDCl3)δ153.5(Ar-C2)，141.8(Ar-C1’)，138.2(Ar-C5)，137.9(Ar-C8’)，136.4(Ar-C3’)，136.1(Ar-C8)，136.0(Ar-C6’)，133.1(Ar-C3)，130.3(Ar-C5’)，128.7(Ar-C4)，128.0(Ar-C4’)，127.6(Ar-C6)，127.4(Ar-C2’)，126.6(Ar-C1)，116.1(Ar-C9)，115.6(Ar-C9’)，104.2(Glu-C1’)，102.5(Glu-C1)，78.9～60.5(Glu-C4，C5’，C3’，C5，C3，C2’，C2，C4’，C6’，C6)，39.6(Ar-C7’)，37.1(Ar-C7)。

1.2.4 化合物4(和厚樸酚-4′-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷)的合成

精密稱量100 mg和厚樸酚和50 mg化合物d放置反應(yīng)瓶中，加適量DCM溶解，用N2保護(hù)，將反應(yīng)瓶置于0 ℃平衡10 min后，量取3 μL TMSOTf加入，0 ℃攪拌反應(yīng)，TLC監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全(展開劑為：Cy∶EtOAc=2∶1，Rf=0.33)。加適量TEA，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH至中性，終止反應(yīng)。DCM萃取，收集有機(jī)相，干燥，過濾，減壓濃縮得粗產(chǎn)物。用硅膠柱純化粗產(chǎn)物(洗脫劑為：Cy∶EtOAc=5∶1/8∶1)，得淡黃色固體(化合物D)62 mg，產(chǎn)率為67.1%。

精密稱量50 mg化合物D，以及10 mL新制甲醇鈉(NaOMe)置于反應(yīng)瓶中，取適量MeOH溶解底物，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)。TLC監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完全(展開劑為：Cy∶EtOAc=2∶1)。加入陰離子交換樹脂，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH至中性，萃取，除水，過濾，濃縮，得到粗產(chǎn)物。用凝膠柱純化粗產(chǎn)物(洗脫劑為甲醇)，得白色固體粉末(化合物4)48 mg，收率為90.5%。

1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ7.79(dd，J =8.0，2.6 Hz，1H，Ar-6’)，7.56～7.54(m，1H，Ar-4)，7.46(s，2H，Ar-3’，6)，7.40(d，J =8.1 Hz，1H，Ar-3)，7.27(d，J =13.7 Hz，1H，Ar-5’)，7.14～7.07(m，2H，8，8’-H)，5.62(d，J =10.4 Hz，1H，Glu-1-H)，4.39(t，J =4.5 Hz，1H，Glu-1’-H)，4.37(d，J =1.5 Hz，4H，9，9’-H)，4.25(dd，J =8.2，2.9 Hz，4H，7，7’-H)，4.01～3.99(m，5H，Glu-2，3，5，6-H)，3.69～3.67(m，5H，Glu-2’，3’，5’，6’-H)。13C NMR(151 MHz，CDCl3)δ155.4(Ar-C2)，152.6(Ar-C6’)，137.9(Ar-C8’)，136.5(Ar-C8)，132.5(Ar-C3’)，131.7(Ar-C5)，130.1(Ar-C2’)，129.6(Ar-C4’)，129.0(Ar-C4)，128.0(Ar-C1’)，127.4(Ar-C3)，126.5(Ar-C6)，117.8(Ar-C1)，116.1(Ar-C9)，115.6(Ar-C9’)，114.5(Ar-C5’)，104.2(Glu-C1’)，102.5(Glu-C1)，78.9～60.5(Glu-C4，C5’，C3’，C5，C3，C2’，C2，C4’，C6’，C6)，39.4(Ar-C7’)，34.0(Ar-C7)。

1.3 和厚樸酚衍生物防治結(jié)腸癌作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)

運(yùn)用Swiss TargetPrediction(http：//www.swisstargetprediction.ch/)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)和厚樸酚衍生物的作用靶點(diǎn)；利用GEO DataSets(https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)和GeneCards(https：//www.genecards.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)建立結(jié)腸癌靶點(diǎn)；以String數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)(PPI network，protein protein interaction network)；利用R語(yǔ)言中的BiocManager“org.Hs.eg.db”進(jìn)行基因本體(GO)生物學(xué)過程和基于京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析并利用BiocManager“enrichplot”和BiocManager“ggplot2”對(duì)篩選出具有差異顯著的前20個(gè)生物過程和信號(hào)通路進(jìn)行可視化；使用PDB數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.rcsb.org/)和AutoDock進(jìn)行分子對(duì)接。

1.4 水溶性預(yù)測(cè)

采用Swiss ADME數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行HNK及其糖苷化衍生物的水溶性預(yù)測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 化學(xué)合成

以和厚樸酚苷元為起始原料，對(duì)其4′-OH進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成得到4個(gè)和厚樸酚糖苷衍生物，其中2～4未見文獻(xiàn)報(bào)道。其反應(yīng)過程均采用TLC檢測(cè)，柱層析純化以及目標(biāo)化合物通過1H-NMR、13C-NMR進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

和厚樸酚的4′-OH和2-OH的活性具有顯著性差異，活性特點(diǎn)為4′-OH>2-OH[30]。本研究設(shè)想先通過不同大小基團(tuán)對(duì)和厚樸酚苷元的4′-OH進(jìn)行保護(hù)，篩選出合適的保護(hù)方法，然后再對(duì)2-OH進(jìn)行糖基化修飾。因此以和厚樸酚為原料，分別與乙酸酐溶液、碘甲烷溶液、溴化芐溶液、苯甲醛溶液、二苯甲酰溶液在一定反應(yīng)條件下進(jìn)行有機(jī)反應(yīng)，目的是保護(hù)和厚樸酚4′-OH，但卻未達(dá)到理想結(jié)果。本文分析原因可能有三，①可能是由于經(jīng)過乙酰基修飾后的糖鏈，分子質(zhì)量相對(duì)其他基團(tuán)較大，且乙?；诜磻?yīng)溶液中鏈較長(zhǎng)，形成了一定空間位阻，使糖很難與2-OH結(jié)合。②和厚樸酚的4′-OH，2-OH活性具有顯著性差異，活性特點(diǎn)為4′-OH>2-OH，所以糖鏈易與4′-OH結(jié)合。③考察并排除了反應(yīng)時(shí)間與溫度的影響，可能是由于所選取的修飾基團(tuán)較小，易于酚羥基結(jié)合。

2.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)

2.2.1 和厚樸酚衍生物防治結(jié)腸癌的作用靶點(diǎn)

利用Swiss TargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)，預(yù)測(cè)得到化合物1～4和厚樸酚衍生物防治結(jié)腸癌的作用靶點(diǎn)321個(gè)。

2.2.2 結(jié)腸癌作用靶點(diǎn)

GEO DataSets數(shù)據(jù)庫(kù)得到的基因芯片數(shù)據(jù)，總318個(gè)樣本。將基因芯片矩陣數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，用R語(yǔ)言中l(wèi)imma包進(jìn)行差異基因篩選，共得到3070個(gè)差異基因，其中上調(diào)基因有1499個(gè)，下調(diào)基因有1571個(gè)，

2.2.3 和厚樸酚衍生物防治結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)

將17個(gè)主要調(diào)控靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行和厚樸酚衍生物防治結(jié)腸癌主要調(diào)控靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析，篩選得到的這些靶點(diǎn)為和厚樸酚衍生物治療結(jié)腸癌的核心靶基因，結(jié)果見圖2。

圖2 和厚樸酚衍生物防治結(jié)腸癌主要調(diào)控靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖

2.2.4 GO生物學(xué)富集分析

將富集得到的生物過程、細(xì)胞組成、分子功能，列舉了顯著性排名前20的生物過程進(jìn)行可視化分析，GO富集分析在生物過程中的主要靶點(diǎn)為nuclear division(核分裂)，其他靶點(diǎn)包括蛋白酶體蛋白分解代謝過程、細(xì)胞器組織的負(fù)調(diào)控、DNA代謝過程的調(diào)控、染色體分離的調(diào)控、細(xì)胞周期相變的調(diào)控、組蛋白磷酸化、減數(shù)分裂細(xì)胞周期、有絲分裂紡錘體檢查點(diǎn)、蛋白酶體介導(dǎo)的泛素依賴性蛋白分解過程等，結(jié)果見圖3。

圖3 GO富集分析氣泡圖(A：Biological Process，B：Cellular Component，C：Molecular Function)

2.2.5 KEGG通路富集分析

共富集得到13條信號(hào)通路，KEGG通路富集分析表明和厚樸酚糖苷衍生物防治結(jié)腸癌主要的信號(hào)通路為Cell cycle和Oocyte meiosis，結(jié)果見圖4。

圖4 KEGG通路富集分析氣泡圖

2.2.6 和厚樸酚衍生物治療結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)的通路分析

將36個(gè)核心靶點(diǎn)輸入KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)的KEGG Mapper功能中，標(biāo)注出核心靶點(diǎn)在每條相關(guān)信號(hào)通路中所占的個(gè)數(shù)。結(jié)果顯示有13個(gè)靶點(diǎn)蛋白參與Oocyte meiosis信號(hào)通路的相關(guān)調(diào)控，相關(guān)基因分別為CCNB2、MAD2L1、CDK1、CDC27、CDC20、FBXO5、PTTG1、ESPL1、BUB1、CDK2、CCNB1、PLK1、AURKA，結(jié)果見圖5。

圖5 和厚樸酚衍生物防治結(jié)腸癌核心靶點(diǎn)在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂(Oocyte meiosis)信號(hào)通路上的注釋圖(深色標(biāo)注的基因代表核心靶基因，灰色標(biāo)注的基因代表通路原有靶點(diǎn))

2.2.7 和厚樸酚衍生物與核心靶基因的對(duì)接

使用Docking模塊進(jìn)行分子對(duì)接，化合物1、2與AURKB基因中4AF3蛋白結(jié)合最穩(wěn)定，化合物3、4與AURKA基因中5DNR蛋白結(jié)合最穩(wěn)定，結(jié)果見表1。

表1 核心靶點(diǎn)與和厚樸酚衍生物分子對(duì)接結(jié)果

2.3 水溶性預(yù)測(cè)

預(yù)測(cè)結(jié)果見表2，4個(gè)化合物的ESOL、Ali和SILICOS-IT預(yù)測(cè)值均高于HNK預(yù)測(cè)值，SILICOS-IT的溶解度等級(jí)均高于HNK一個(gè)等級(jí)，且二糖水溶性高于單糖。

表2 水溶性預(yù)測(cè)結(jié)果

預(yù)測(cè)得到化合物1～4的作用靶點(diǎn)321個(gè)和3070個(gè)結(jié)腸癌差異基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這些核心靶基因參與了多個(gè)生物過程和多條信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。這些生物過程既彼此調(diào)節(jié)配合、相互制約，共同達(dá)到防治疾病的目的。另外通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)[31-32]，這些通路上的關(guān)鍵靶分子主要是通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，抑制癌細(xì)胞增殖，抑制癌細(xì)胞侵襲，實(shí)現(xiàn)防治結(jié)腸癌的作用。分子對(duì)接結(jié)果表明和厚樸酚糖苷衍生物與核心靶基因之間的結(jié)合相對(duì)較穩(wěn)定，提示這些基因可能成為和厚樸酚衍生物防治結(jié)腸癌的潛在靶點(diǎn)。水溶性預(yù)測(cè)中ESOL、Ali和SILICOS-IT為預(yù)測(cè)指標(biāo)，Solubility Class為溶解度等級(jí)，和厚樸酚衍生物預(yù)測(cè)值和等級(jí)均有提高。

3 結(jié)論

本文合成了4種和厚樸酚糖苷衍生物，并運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法構(gòu)建了多種和厚樸酚糖苷化衍生物防治結(jié)腸癌的作用機(jī)制及其水溶性的預(yù)測(cè)。本文獲得的和厚樸酚衍生物不僅豐富了天然化合物的糖苷種類，增加苷元的糖苷數(shù)據(jù)庫(kù)，還豐富了和厚樸酚類合成產(chǎn)物的種類，另為進(jìn)一步研究苷元與其糖苷直接的關(guān)聯(lián)提供了依據(jù)以及其后續(xù)抗腫瘤的細(xì)胞活性篩選、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及分子機(jī)制的研究打下基礎(chǔ)。