豬瘟病毒致病機(jī)制及豬瘟診斷防控

滕祥

（廣西南寧市興寧區(qū)三塘鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西南寧 530216）

豬瘟（Classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，各年齡段和品種的豬均可感染發(fā)病。該病毒既可通過(guò)直接接觸感染豬的分泌物等方式感染，在豬群中水平傳播擴(kuò)散，也可通過(guò)胎盤(pán)垂直傳，引起妊娠母豬流產(chǎn)、免疫抑制、容易繼發(fā)感染其他疾病，給世界各地的生豬養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。典型豬瘟感染后臨床癥狀明顯，可以通過(guò)隔離、撲殺、緊急免疫等方式有效阻斷病原傳播。但隨著疫苗的使用，規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)內(nèi)潛伏感染、慢性感染及持續(xù)感染現(xiàn)象頻發(fā)，這種新的流行特點(diǎn)，給豬瘟的防治與凈化工作的實(shí)施帶來(lái)了更大的困難和挑戰(zhàn)。本文從豬瘟的致病機(jī)理、臨床診斷及科學(xué)防控3 個(gè)方面展開(kāi)論述，以期為廣大養(yǎng)殖戶(hù)提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 豬瘟病毒的生物學(xué)特性

豬瘟病毒是一種有囊膜的單股正鏈的圓形RNA病毒，屬于黃病毒科，瘟病毒屬。該病毒的遺傳特性相對(duì)穩(wěn)定，變異程度低，只有一個(gè)血清型，對(duì)酸性環(huán)境耐受性強(qiáng)，對(duì)熱比較敏感，56℃加熱1h 或60℃加熱10min 即可滅活[1]。根據(jù)豬感染后的病程長(zhǎng)短，可分為急性型、亞急性型、慢性型和持續(xù)感染型。根據(jù)豬瘟病毒間毒力的差異，可分為強(qiáng)毒株、中等毒力毒株和無(wú)致病力毒株，其中強(qiáng)毒株感染后會(huì)在全身迅速擴(kuò)散，病程短，病豬通常無(wú)明顯癥狀就突然死亡，死亡率高。中等毒力毒株感染主要呈現(xiàn)急性型的臨床癥狀，體溫升高、精神沉郁、嗜睡腹瀉、結(jié)膜炎、神經(jīng)癥狀、繁殖障礙等特征性癥狀明顯。而弱毒株僅在特定的靶器官內(nèi)復(fù)制，臨床上以慢性感染和持續(xù)性感染為主，病程較長(zhǎng)，臨床癥狀不明顯，剖檢無(wú)典型的病理變化，但可以長(zhǎng)期存活于豬體內(nèi)，通過(guò)口鼻分泌物持續(xù)排毒，感染同群豬，嚴(yán)重制約養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展[2]。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)，豬瘟感染后病程受感染豬品種、年齡、性別、免疫狀態(tài)、病毒毒力、數(shù)量等因素影響[2]。豬瘟在感染過(guò)程中會(huì)抑制宿主的免疫應(yīng)答反應(yīng)，進(jìn)而維持其持續(xù)性感染狀態(tài)。因此，深入研究豬瘟病毒與宿主免疫應(yīng)答間的相互作用，有助于進(jìn)一步理解宿主抵抗豬瘟病毒的機(jī)制，以及豬瘟病毒逃逸宿主天然免疫應(yīng)答的機(jī)理，從而為豬瘟的防控奠定理論基礎(chǔ)。

2 豬瘟病毒的致病機(jī)理

豬瘟感染過(guò)程更像是與宿主免疫系統(tǒng)進(jìn)行博弈的一個(gè)過(guò)程。天然免疫系統(tǒng)作為機(jī)體防御微生物感染的第一道防線(xiàn)，在病毒感染早期，可以通過(guò)細(xì)胞內(nèi)的模式識(shí)別受體，特異性地識(shí)別病原相關(guān)分子模式，繼而激活I(lǐng)RF3、IRF7 等干擾素調(diào)節(jié)因子及NF-κ B 的表達(dá)，調(diào)控干擾素及促炎因子的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，干擾素的產(chǎn)生又能促進(jìn)下游一系列干擾素刺激基因（Interferon-stimulated genes，ISGs）的表達(dá)，從而抵抗病毒感染[1]。盡管病毒感染能激活宿主天然免疫應(yīng)答反應(yīng)，但豬瘟病毒作為一種免疫抑制病毒，已進(jìn)化出多種機(jī)制逃避宿主的天然免疫應(yīng)答。如豬瘟病毒可以通過(guò)將自身分泌的蛋白Erns釋放到細(xì)胞外，降解細(xì)胞外的dsRNA 和單鏈RNA 分子，或者通過(guò)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，在病毒RNA 激活I(lǐng) 型IFN 信號(hào)通路前，將病毒RNA 在溶酶體內(nèi)降解，逃避宿主天然免疫反應(yīng)；此外，Erns蛋白還可有效阻止?jié){細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞與感染豬瘟病毒細(xì)胞接觸時(shí)的活化作用，致使淋巴細(xì)胞凋亡，從而將病毒傳染到以?xún)?nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、某些類(lèi)型的上皮細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞中，最后通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬或調(diào)控NF-κB 信號(hào)通路等方式，導(dǎo)致白細(xì)胞、B 細(xì)胞、CD4+、CD8+T 細(xì)胞數(shù)明顯減少，破壞宿主免疫系統(tǒng)，以此逃避宿主的免疫應(yīng)答反應(yīng)，為維持自身持續(xù)感染創(chuàng)造條件，這也是豬瘟病毒導(dǎo)致豬只急性死亡的主要原因。其二，豬瘟病毒的Npro蛋白可以通過(guò)與IRF3 相互作用，誘導(dǎo)IRF3 的泛素化和蛋白酶體降解，抑制IFN-β 和IFN-α的產(chǎn)生，或者通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)單核巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等親嗜性細(xì)胞的持續(xù)感染與病毒的大量增殖[1-3]。

豬瘟病毒通常最先侵害病豬的扁桃體，吸附于細(xì)胞表面，之后通過(guò)細(xì)胞膜融合或經(jīng)受體介導(dǎo)的胞飲作用進(jìn)入感染細(xì)胞，經(jīng)淋巴循環(huán)傳播到周?chē)馨徒M織中，產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫抑制作用。感染早期，豬瘟病毒在淋巴組織基質(zhì)的單個(gè)或成團(tuán)細(xì)胞中復(fù)制增殖[3]。隨著被感染細(xì)胞的增多，通過(guò)外周血液循環(huán)，進(jìn)一步在脾臟、骨髓、內(nèi)臟淋巴結(jié)等組織的全部基質(zhì)細(xì)胞中定植、增殖。然后，豬瘟病毒侵入皮膚生發(fā)層、舌的中間層、舌涎腺，扁桃體中的類(lèi)RE 細(xì)胞、腦中的神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞、外周單核白細(xì)胞、枯否氏細(xì)胞及血管竇狀隙等不斷復(fù)制增殖，導(dǎo)致高水平病毒血癥的發(fā)生，病豬出現(xiàn)抽搐、顫抖等神經(jīng)癥狀。病毒感染過(guò)程中還會(huì)巨噬細(xì)胞過(guò)度激活，分泌各種誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的細(xì)胞因子[2]。在感染晚期，病豬扁桃體淋巴結(jié)出現(xiàn)出血、腫大、壞死等病理變化，扁桃體潰爛、壞死。腸系膜淋巴結(jié)和扁桃體也會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似的病理變化，小腸和大腸中有纖維性滲出物，黏膜及黏膜下層出現(xiàn)紐扣狀潰瘍甚至壞死，脾臟梗死。除此之外，病豬內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)對(duì)各種促炎因子、促凝血因子產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致凝血系統(tǒng)失常，細(xì)胞間的縫隙鏈接被抑制，血管通透性改變，皮膚內(nèi)出血變色，嚴(yán)重者全身各處均可見(jiàn)出血灶，最后導(dǎo)致病豬死亡[4,5]?；谪i瘟病毒致病機(jī)理、傳播機(jī)制的研究，有利于更好地診斷、防控該病毒，促進(jìn)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。

3 豬瘟病毒常見(jiàn)的診斷方法

對(duì)于典型豬瘟病毒，臨床通常通過(guò)觀(guān)察感染豬的特征性臨床癥狀和病理變化進(jìn)行初步診斷，但隨著集約化養(yǎng)殖的不斷發(fā)展，非典型、溫和型豬瘟感染不再表現(xiàn)典型的臨床癥狀。因此，需要借助實(shí)驗(yàn)室診斷方法進(jìn)行確診，常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室診斷方法包括病毒分離培養(yǎng)、兔體交互實(shí)驗(yàn)、血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷方法。血清學(xué)診斷方法主要包括免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、間接血凝實(shí)驗(yàn)[4,5]。其中免疫熒光實(shí)驗(yàn)可用于檢測(cè)豬內(nèi)臟器官中是否存在豬瘟病毒，且操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)成本低，對(duì)豬瘟病毒的早期診斷具有重要意義，是豬瘟病毒最常用的診斷方法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是規(guī)模化豬場(chǎng)使用最廣的檢測(cè)方法，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單和檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。間接血凝實(shí)驗(yàn)通常用于免疫抗體的檢測(cè)，敏感度相對(duì)較低。反轉(zhuǎn)錄-聚合鏈?zhǔn)矫阜磻?yīng)、熒光定量PCR 技術(shù)及核酸探針等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)也可用于豬瘟病毒的診斷。相較于血清學(xué)診斷，基于病毒核酸的分子生物學(xué)診斷方法靈敏度更高，特異性也更強(qiáng)，常用于鑒別診斷[5]。此外，還可采集病死豬淋巴結(jié)、脾臟、腎等部位的病料組織，研磨后接種健康家兔，7d 后接種豬瘟兔化弱毒疫苗，豬瘟兔化弱毒苗會(huì)引起實(shí)驗(yàn)兔體溫升高，而豬瘟病毒感染并不會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)兔體溫的變化，可以通過(guò)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)兔的體溫變化狀況進(jìn)行臨床診斷，此方法稱(chēng)為兔體交互實(shí)驗(yàn)[6]。

4 豬瘟的科學(xué)防控

目前，市場(chǎng)上并沒(méi)有針對(duì)豬瘟病毒的特效藥物，我國(guó)主要采取疫苗接種和撲殺相結(jié)合的綜合防控措施預(yù)防該病的流行，規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)更是要全面貫徹落實(shí)“預(yù)防為主，防重于治”的方針理念。在飼養(yǎng)過(guò)程中，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保證充足、清潔的飲水，飼喂?fàn)I養(yǎng)豐富無(wú)霉變的飼料，必要時(shí)可添加安全、無(wú)毒副作用的中草藥制劑等抗病毒藥物，通過(guò)藥物預(yù)防，提高仔豬抗病能力。但要注意合理使用抗生素，避免因抗生素濫用或使用違規(guī)藥物導(dǎo)致的豬免疫力下降。此外，及時(shí)清理畜舍內(nèi)的糞污垃圾，保持墊草整潔，定期消毒，有效殺滅環(huán)境中的病原微生物，夏天要注意防暑降溫、保證畜舍通風(fēng)良好，秋冬等寒冷季節(jié)要做好保暖工作，定期消毒，有效殺滅環(huán)境中的病原微生物。此外，減少規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)內(nèi)抗生素的使用，避免因?yàn)E用抗生素或因使用違規(guī)藥物導(dǎo)致的免疫力下降情況的發(fā)生[7]。

定期對(duì)豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟病原及免疫抗體檢測(cè)，種豬和后備豬要逐頭檢測(cè)，其他豬群按比例抽測(cè)[5]。隱性感染的母豬要及時(shí)淘汰，若發(fā)現(xiàn)疑似病例，應(yīng)立即采集病料送有關(guān)部門(mén)或?qū)嶒?yàn)室進(jìn)行緊急化驗(yàn)，一旦確診應(yīng)及時(shí)報(bào)告當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門(mén)，隱性感染的母豬要及時(shí)淘汰、必要時(shí)可以采取撲殺措施，無(wú)害化處理病死豬或被撲殺的豬的尸體，對(duì)于同群健康豬要進(jìn)行緊急免疫接種，對(duì)所有被污染的場(chǎng)地、用具全面徹底消毒。

規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)要堅(jiān)持“自繁自養(yǎng)，全進(jìn)全出制”的防控原則。若確實(shí)需要引種，引種前應(yīng)對(duì)引種地進(jìn)行實(shí)地考察及流行病學(xué)調(diào)查，引進(jìn)后進(jìn)行隔離飼養(yǎng)2個(gè)月，確認(rèn)健康后方可進(jìn)場(chǎng)，場(chǎng)內(nèi)采取分群飼養(yǎng)的管理模式。

“疾病防控千萬(wàn)條，生物安全第一條”。特別是規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)在建場(chǎng)選址時(shí)要遠(yuǎn)離居民區(qū)、屠宰場(chǎng)等場(chǎng)所，養(yǎng)殖場(chǎng)入口要設(shè)立車(chē)輛消毒通道及緩沖區(qū)，場(chǎng)區(qū)內(nèi)要進(jìn)行科學(xué)合理的設(shè)計(jì)，將生活區(qū)、辦公區(qū)、生產(chǎn)區(qū)分開(kāi)，生產(chǎn)區(qū)建在下風(fēng)向，生活區(qū)要位于上風(fēng)向，生產(chǎn)區(qū)內(nèi)分舍飼養(yǎng)，場(chǎng)內(nèi)執(zhí)行嚴(yán)格的防疫制度，加強(qiáng)從業(yè)人員的專(zhuān)業(yè)技術(shù)培訓(xùn)，從思想上提高其對(duì)防疫的認(rèn)知和重視，疫苗接種或生產(chǎn)時(shí)注意消毒，防止交叉感染，努力構(gòu)建“疫病防控為核心，安全生產(chǎn)為目的”的養(yǎng)殖模式。

最后，豬場(chǎng)管理人員應(yīng)根據(jù)豬場(chǎng)內(nèi)抗體水平，制定合理的免疫程序，進(jìn)行免疫接種。通常仔豬在20、60 日齡各接種1 次；育肥豬5 周齡首免，9 周齡時(shí)二免；后備母豬23 周齡免疫1 次；生產(chǎn)母豬分娩前4周免疫1 次，5 胎以上的母豬同樣進(jìn)行免疫；種公豬每4 月免疫1 次；免疫后動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)抗體水平，降低豬群感染風(fēng)險(xiǎn)，避免妊娠傳播，污染嚴(yán)重的豬場(chǎng)可通過(guò)超前免疫抵抗自然感染[8]。接種前還要確認(rèn)是否存在圓環(huán)病毒等其他免疫抑制病毒感染，避免因免疫抑制，導(dǎo)致免疫失敗的發(fā)生。免疫過(guò)程中堅(jiān)持“一豬一針頭”的原則，避免因免疫時(shí)操作不當(dāng)導(dǎo)致的交叉感染現(xiàn)象。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的疫苗主要包含豬瘟滅活疫苗、弱毒疫苗、亞單位疫苗、活載體疫苗及核酸疫苗等新型疫苗。其中應(yīng)用最多的是豬瘟兔化弱毒苗，該種疫苗對(duì)扁桃體中的病毒具有良好的抑制作用，同時(shí)還能通過(guò)妊娠母豬的胎盤(pán)，在不感染胎兒的情況下提高母豬和仔豬的免疫力[5]。

5 展望

豬瘟病毒傳播速度快、流行范圍廣，我國(guó)作為世界第一養(yǎng)豬大國(guó)，養(yǎng)殖密度大，但集約化程度低，大多數(shù)小型養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全意識(shí)不夠，場(chǎng)區(qū)內(nèi)設(shè)施落后、飼養(yǎng)環(huán)境差等問(wèn)題突出，一旦出現(xiàn)陽(yáng)性病例，感染率極高，導(dǎo)致豬瘟至今難以被徹底消滅。因此，一方面，相關(guān)部門(mén)要加強(qiáng)豬瘟病毒的宣傳力度，提高廣大養(yǎng)殖戶(hù)的生物安全意識(shí)，加強(qiáng)專(zhuān)業(yè)技能培訓(xùn)，提升養(yǎng)殖戶(hù)的綜合養(yǎng)殖能力。另一方面，科研人員要建立非典型豬瘟、溫和型豬瘟的快速診斷和凈化方法，淘汰陽(yáng)性豬群，凈化母豬群，減少仔豬感染率，加緊研發(fā)新型豬瘟疫苗的研發(fā)速度，雙管齊下，在有效范圍內(nèi)控制豬瘟病毒，推動(dòng)全國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，為實(shí)現(xiàn)我國(guó)食品安全提供保障。