GOLPH3與非小細(xì)胞肺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性研究

郝 琳 康 娟 宋 英

非小細(xì)胞肺癌是源自支氣管黏膜、支氣管腺體以及肺泡上皮累的惡性腫瘤，在顯微鏡下主要表現(xiàn)為細(xì)胞漿大和胞漿豐富，是我國較為多見的腫瘤[1]。盡管近些年，對于肺癌的治療方案有了較大的提升，但是肺癌的發(fā)生機制仍不明確，更需要進一步進行探索[2]。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是在生理和病理的基礎(chǔ)下出現(xiàn)上皮細(xì)胞表型細(xì)胞喪失極性后活動性升高，能夠在細(xì)胞間質(zhì)活動，自上皮樣細(xì)胞到間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樘攸c的變化[3]。研究認(rèn)為上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和遷徙等有關(guān)。高爾基磷酸化蛋白3(golgi protein phosphorylation 3,GOLPH3)屬于高爾基體基質(zhì)蛋白的一種，是一種新型癌基因，主要分布于高爾基體反面網(wǎng)絡(luò)機構(gòu)內(nèi)，能夠?qū)着撩顾匕械鞍仔盘柾愤M行調(diào)控，從而影響腫瘤的分化和增生[4-5]。研究認(rèn)為，GOLPH3與癌組織上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化存在一定相關(guān)性[6]。因此本研究選取我院2019年10月至2021年10月收治的72例非小細(xì)胞肺癌患者臨床資料進行分析，以研究GOLPH3與非小細(xì)胞肺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性研究。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院 2019年10月至2021年10月收治的72例非小細(xì)胞肺癌患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合《肺癌診斷治療學(xué)》[7]中非小細(xì)胞肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者術(shù)后經(jīng)病理學(xué)明確非小細(xì)胞肺癌診斷；③患者入院前未接受治療；排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者合并其他部位惡性腫瘤；②患者合并嚴(yán)重肝腎功能衰竭；③患者合并顱內(nèi)感染、全身感染以及心血管疾??；④患者臨床資料不完整；⑤患者合并其他傳染性疾病。

1.2 方法

采用免疫組化法對患者肺癌組織和癌旁正常組織中GOLPH3蛋白進行檢測，其中試劑主要選取上海一研生物科技有限公司的GOLPH3抗體系多克隆抗體，北京中山金橋公司的即用型SP試劑盒、二苯甲、PBS以及DAB顯示液。將獲取的組織標(biāo)本石蠟以4 μm 厚連續(xù)切片，攤片，并在60 ℃的烤片箱內(nèi)連續(xù)烘烤60 min，在常規(guī)二甲苯脫蠟后，以梯度酒精水化，采用蒸餾水連續(xù)沖洗3次，每次3 min；將獲得的切片浸泡在pH為7.0的檸檬酸緩沖液內(nèi)，放于高壓鍋中對抗原連續(xù)修復(fù)20 min，隨后放于室溫內(nèi)冷卻，在用蒸餾水以及PBS沖洗2次，每次3 min；清晰PBS液體，隨后加入50 μl牛血清在各個切片上，封閉后在室溫內(nèi)孵育5 min，將血清去除后，滴入第一抗體兔抗人GOLPH3多克隆抗體，放于濕盒內(nèi)部，在室溫中靜置45 min，再次采用PBS連續(xù)沖洗3次，注入第三抗體，濕盒內(nèi)在室溫下靜置45 min，PBS連續(xù)沖洗3次后將PBS去除，滴入50 μl DAB顯色液顯色，顯微鏡下反應(yīng)時間3.5 min，采用自來水沖洗并終止反應(yīng)，蘇木精復(fù)染后，采用鹽酸酒精分化，以自來水西返藍，隨后脫水封片，在顯微鏡下讀片。評定標(biāo)準(zhǔn)：GOLPH3陽性細(xì)胞質(zhì)主要為棕黃色或者黃色，染色強度評分:未著色以及陽性細(xì)胞數(shù)<10%記為0分；著色低于背景色，陽性細(xì)胞數(shù)在10%～50%記為1分；中度著色，且明顯深于背景色，陽性細(xì)胞數(shù)在51%～75%記為2分；強著色，主要表現(xiàn)為棕黃色，陽性細(xì)胞數(shù)>75%記為3分。陰性為0～1分，陽性為≥2分。E-cadherin和vimentin以同樣方式進行切片和染色，E-cadherin評定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞膜或者細(xì)胞質(zhì)發(fā)現(xiàn)棕黃色顆粒狀為陽性，細(xì)胞數(shù)<10%記陰性，≥10%記為陽性。Vimentin：評定標(biāo)準(zhǔn)：胞質(zhì)染色發(fā)現(xiàn)棕黃色則記為陽性，每個切片內(nèi)可觀察陽性細(xì)胞數(shù)目<10%記陰性，≥10%記為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

對比患者肺癌組織和癌旁正常組織GOLPH3表達、上皮間之轉(zhuǎn)化標(biāo)志物E-cadherin以及vimentin；對比患者不同臨床特征(病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況)GOLPH3、E-cadherin以及vimentin表達情況，同時分析GOLPH3與E-cadherin和vimentin相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 肺癌組織和癌旁正常組織GOLPH3、E-cadherin以及vimentin表達情況對比

肺癌組織GOLPH3和vimentin陽性率均顯著高于癌旁正常組織，E-cadherin陽性率顯著低于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 肺癌組織和癌旁正常組織中GOLPH3表達情況對比/例

2.2 不同臨床特征GOLPH3表達情況

不同病理類型患者GOLPH3表達陽性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及不同TNM分期患者GOLPH3陽性表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床特征患者GOLPH3表達情況/例

2.3 不同臨床特征E-cadherin表達情況

不同病理類型患者E-cadherin表達陽性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及不同TNM分期患者E-cadherin表達陽性差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同臨床特征患者E-cadherin表達情況/例

2.4 不同臨床特征vimentin表達情況

不同病理類型患者vimentin表達陽性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及不同TNM分期患者vimentin表達陽性差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同臨床特征患者vimentin表達情況/例

2.5 非小細(xì)胞肺癌患者GOLPH3與E-cadherin和vimentin表達相關(guān)性分析

經(jīng)過相關(guān)性分析得出：GOLPH3陽性表達與E-cadherin表達呈負(fù)相關(guān)，與vimentin表達呈正相關(guān)(P<0.05)，見表5。

表5 非小細(xì)胞肺癌患者GOLPH3與E-cadherin和vimentin表達相關(guān)性分析

3 討論

肺癌是全球較為常見的惡性腫瘤，其中更是以非小細(xì)胞肺癌較為多見，且發(fā)病率和死亡率正逐年升高[8]。雖然近些年對于肺癌的治療已取得了較大的進步，但患者的生存率仍不高，且術(shù)后容易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移[9-10]。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是完全分化的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變的過程，主要以上皮細(xì)胞失去活性為特點，導(dǎo)致與周圍細(xì)胞接觸以及細(xì)胞的粘附力降低[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化存在一定相關(guān)性[12]。因此本研究選取我院收治的42例非小細(xì)胞肺癌患者臨床資料進行分析，以研究GOLPH3與非小細(xì)胞肺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性。

GOLPH3是一種全新致癌基因，負(fù)責(zé)囊泡轉(zhuǎn)運的腫瘤蛋白。與PI4-P相結(jié)合，能夠保持高爾基囊泡的轉(zhuǎn)運，以MY0184和肌動蛋白骨架連接能夠穩(wěn)定高爾基形態(tài)以及轉(zhuǎn)運，同時在囊泡運輸、蛋白糖基化以及線粒體功能中也發(fā)揮重要的作用[13]。GOLPH3能夠以mTORC1和mTORC2對mTOR信號通路進行刺激，引起細(xì)胞內(nèi)部S6K1升高，促進了蛋白合成、細(xì)胞的分裂，對細(xì)胞的凋亡進行抑制[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)，患者肺癌組織GOLPH3陽性率均顯著高于癌旁正常組織。這說明，GOLPH3在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。非小細(xì)胞肺癌難以治療的原因也是因為容易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和侵襲。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化不僅能夠增強腫瘤細(xì)胞自身的侵襲能力，還能夠?qū)Π┘?xì)胞所處患者進行改變，誘發(fā)癌細(xì)胞躲避機體免疫的監(jiān)視，進而增強侵襲能力[16-17]。本研究發(fā)現(xiàn)，患者肺癌組織vimentin陽性率均顯著高于癌旁正常組織，E-cadherin陽性率顯著低于癌旁正常組織。說明，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)揮著重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，不同分化程度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及不同TNM分期患者GOLPH3陽性表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。這是因為，分化程度較高、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期較高的患者往往存在明顯的癌細(xì)胞擴散以及增殖，其中GOLPHS的突變都能夠引起正常調(diào)控細(xì)胞增殖途徑出現(xiàn)異變，導(dǎo)致細(xì)胞增生異常進而促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[18-19]。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化能夠賦予肺癌細(xì)胞干細(xì)胞特性，增強肺癌干細(xì)胞的生成[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，不同分化程度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及不同TNM分期患者E-cadherin和vimentin陽性表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。這是因為肺癌干細(xì)胞在上皮表型以及間質(zhì)表型的轉(zhuǎn)換能力，這也是肺癌轉(zhuǎn)移和增生的基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn)，GOLPH3陽性表達率與E-cadherin表達呈負(fù)相關(guān)，與vimentin呈正相關(guān)。這說明，GOLPH3與非小細(xì)胞肺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化存在明顯的相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，GOLPH3與患者上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化存在關(guān)系，能夠作為患者預(yù)后的評估指標(biāo)，臨床價值較高。但本次研究可能因為病例收集較少等因素，導(dǎo)致實驗存在一定偏差。

綜上所述，GOLPH3與非小細(xì)胞肺癌患者E-cadherin表達呈負(fù)相關(guān)，與vimentin呈正相關(guān)，與患者上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化存在明顯的相關(guān)性。