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    骨肉瘤干細(xì)胞生物標(biāo)志物CD117和Stro-1的表達(dá)及其臨床意義

    2022-11-23 12:47:18曹倩倩黃宗強(qiáng)
    實(shí)用癌癥雜志 2022年11期
    關(guān)鍵詞:骨組織陽性細(xì)胞干細(xì)胞

    謝 靜 曹倩倩 趙 丹 黃宗強(qiáng)

    骨肉瘤為臨床多發(fā)的非造血型原發(fā)性惡性骨腫瘤,多在青少年群體內(nèi)發(fā)病,持續(xù)發(fā)展會致殘,甚至?xí)滤繹1-2]。骨肉瘤治療難度相對較大,化療的高耐藥性與高轉(zhuǎn)移性一直是臨床治療的兩大難點(diǎn),且該病發(fā)生率逐年上升,給患者身心健康造成眾多負(fù)面影響[3-4]。因此,對骨肉瘤進(jìn)行及時診斷,對指導(dǎo)臨床施行個體化的治療,促使患者獲得良好預(yù)后意義重大。相關(guān)研究提示,表達(dá)CD117與Stro-1的骨肉瘤細(xì)胞亞群,存在高水平的耐藥性、高轉(zhuǎn)移性,因而兩者已被臨床當(dāng)成骨肉瘤干細(xì)胞表層的標(biāo)志物,目前多用于骨肉瘤的基礎(chǔ)研究[5]。然而關(guān)于CD117與Stro-1在骨肉瘤組織中的表達(dá)情況的研究報(bào)道較為少見,基于此,本研究探究骨肉瘤干細(xì)胞生物標(biāo)志物CD117與Stro-1的表達(dá)及其臨床意義,報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料

    選取2019年5月至2021年5月本院手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查確診的58例骨肉瘤患者,將手術(shù)切除標(biāo)本作為骨肉瘤組,另取其中13例患者的瘤旁正常骨組織標(biāo)本作為骨組織組。納入標(biāo)準(zhǔn):手術(shù)過后未發(fā)現(xiàn)腫瘤殘留;患者病歷資料齊全;患者自愿簽署知情同意書;患者依從性較高。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他惡性腫瘤者;存在免疫系統(tǒng)病癥者;存有凝血功能異常者;存在酒精、藥物依賴史者;合并嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者;存在精神疾患者;意識障礙,無法進(jìn)行正常溝通者。全部患者中男性31例,女性27例;年齡23~49歲,平均年齡(31.57±2.68)歲;病程2~15個月,平均病程(9.63±1.58)個月;TNM分期:17例Ⅰ期,41例Ⅱ~Ⅲ期;腫瘤組織學(xué)類型:9例低級別骨肉瘤,49例高級別骨肉瘤;28例有轉(zhuǎn)移,30例無轉(zhuǎn)移;體質(zhì)量指數(shù)18~26 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(24.75±0.83)kg/m2。

    1.2 方法

    組織芯片制備:于手術(shù)時留存骨組織標(biāo)本,存活之后立即以4%多聚甲醛溶液施以24 h的固定,對骨塊施以充分完備的脫鈣;把獲取組織分成5 mm×15 mm×15 mm的組織塊,脫水過后進(jìn)行石蠟包埋,然后制備成4 μm厚切片染色;由病理醫(yī)師依據(jù)染色的情況區(qū)分骨肉瘤組織和正常骨組織;取58例骨肉瘤和13例癌旁骨組織標(biāo)本的石蠟片,各樣本取一直徑2 mm、厚度為3~4 mm的組織芯,共71個組織芯,另外設(shè)置1個定位芯;采用組織陣列儀將骨肉瘤、癌旁骨組織的71個組織芯依據(jù)病理號由小至大排列;在51 ℃下放置8 h過后施以降溫處理,處理完畢過后施行陣列切片,芯片厚度4 μm,染色,顯微鏡下觀察。兩者表達(dá)檢測:取組織芯片,經(jīng)60 ℃施以2 h烘烤,以免疫組織化學(xué)法測定CD117、Stro-1水平;將烘烤后的芯片脫蠟至水化;流水洗刷之后,以3%過氧化氫(H2O2)滅活內(nèi)源性酶,再一次的運(yùn)用流水清洗,熱抗原修復(fù);PBS洗滌1~2次;滴加含5%牛血清蛋白得到封閉液,20 min封閉,吸去封閉液,滴加CD117、Stro-1抗體,4 ℃過夜;第二天37 ℃復(fù)溫45 min過后,以PBS沖洗3次;滴加二抗,在室溫條件下放置30 min;PBS沖洗3次;滴加SABC,37 ℃反應(yīng)20 min;PBS沖洗4次;蘇木精復(fù)染后,脫水、封片,顯微鏡下觀察;依照染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比率綜合評價;染色強(qiáng)度:無色:0分;淡黃色:1分;棕黃色:2分;棕褐色:3分。陽性細(xì)胞所占比例:無陽性細(xì)胞:0分;有陽性細(xì)胞但≤10%:1分;陽性細(xì)胞>10%~50%:2分;>50%~75%:3分;>75%:4分;染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞所占比例分?jǐn)?shù)相乘為最終評分;0~1分為陰性,≥2分為陽性,檢測結(jié)果由2名高年資病理科醫(yī)師共同討論所得。

    1.3 觀察指標(biāo)

    (1)骨肉瘤組與骨組織組中骨肉瘤干細(xì)胞生物標(biāo)志物CD117與Stro-1的表達(dá)。(2)CD117與Stro-1表達(dá)與骨肉瘤患者臨床病理因素的關(guān)系。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果

    2.1 骨肉瘤組與骨組織組中骨肉瘤干細(xì)胞生物標(biāo)志物CD117與Stro-1的表達(dá)對比

    CD117與Stro-1在骨肉瘤組的陽性表達(dá)率高于骨組織組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

    表1 骨肉瘤組與骨組織組中骨肉瘤干細(xì)胞生物標(biāo)志物CD117與Stro-1的表達(dá)對比(例,%)

    2.2 CD117與Stro-1表達(dá)與骨肉瘤患者臨床病理因素的關(guān)系

    在不同年齡、不同性別、不同腫瘤直徑中CD117、Stro-1表達(dá)水平比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);在不同組織學(xué)類型、是否發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移、TNM各分期中CD117、Stro-1表達(dá)水平比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表2。

    表2 CD117與Stro-1表達(dá)與骨肉瘤患者臨床病理因素的關(guān)系(例,%)

    3 討論

    骨肉瘤患病率較高,會引起骨骼、關(guān)節(jié)疼痛與局部腫塊病理學(xué)癥狀[6-7]。骨肉瘤的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,臨床尚未明晰該病的發(fā)病機(jī)制,通常認(rèn)為與病毒感染、化學(xué)物質(zhì)等聯(lián)系緊密[8-9]。因骨肉瘤干細(xì)胞存在較高耐藥性、高轉(zhuǎn)移性等特征,其被臨床認(rèn)為是導(dǎo)致骨肉瘤患者產(chǎn)生化療耐藥、腫瘤復(fù)發(fā)與發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素[10-11]。因此,對骨肉瘤干細(xì)胞的生物標(biāo)志物盡早檢測,對于臨床及時明確患者病情、制定個體化的治療措施、改善其預(yù)后意義重大。

    CD117在不同個體的組織、器官內(nèi)均呈現(xiàn)出異常表達(dá),其配體為肥大細(xì)胞生長因子[12-13]。該配體通過與CD117相互結(jié)合,再經(jīng)Gαi-Gab1信號復(fù)合物介導(dǎo),對下游關(guān)鍵信號通道予以激活,繼而加快骨肉瘤細(xì)胞的存活與增殖。CD117在多種惡性腫瘤中均呈現(xiàn)異常表達(dá),與多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展聯(lián)系密切[14]。Stro-1是以CD34+的骨髓細(xì)胞為抗原生成的單克隆抗體,現(xiàn)已在鑒別、分離間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)大范圍使用[15]。兩項(xiàng)指標(biāo)在多種惡性腫瘤疾病中均呈異常表達(dá),但在骨肉瘤中的報(bào)道較為少見,臨床還需進(jìn)一步觀察。本研究結(jié)果顯示,CD117與Stro-1在骨肉瘤組的陽性表達(dá)率[72.41%(42/58)、68.97%(40/58)]高于骨組織組[30.77%(4/13)、30.77%(4/13)],提示在骨肉瘤組織中,CD117與Stro-1陽性表達(dá)率較高。臨床可通過對CD117與Stro-1進(jìn)行檢測,及時判斷骨肉瘤患者病情,并施以針對性的治療。本研究結(jié)果還顯示,CD117、Stro-1表達(dá)在不同組織學(xué)類型、是否發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移、TNM不同分期中均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,在高級別骨肉瘤、腫瘤轉(zhuǎn)移與TNMⅡ~Ⅲ期中均表現(xiàn)出較高的陽性率。其原因在于骨肉瘤級別越高,發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移與分期越高的患者,其病情越重,癌細(xì)胞侵襲能力更強(qiáng),會侵入機(jī)體更深處,因此,CD117與Stro-1的陽性表達(dá)率均處于較高水平。但值得注意的是,本研究納入樣本量較少,可能會影響試驗(yàn)結(jié)果的精準(zhǔn)性。因此,后續(xù)臨床還需不斷地完善試驗(yàn)設(shè)計(jì),繼續(xù)擴(kuò)大樣本量的納入,以進(jìn)行更深層次的研究,進(jìn)一步證實(shí)骨肉瘤干細(xì)胞生物標(biāo)志物CD117與Stro-1的表達(dá)及其臨床意義。

    綜上所述,CD117與Stro-1在骨肉瘤組織中呈現(xiàn)出過高的陽性表達(dá),且與組織學(xué)類型、腫瘤轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān),臨床需予以高度關(guān)注。

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