全自動(dòng)血培養(yǎng)儀對血液、無菌體液培養(yǎng)陽性的作用分析

陳千紅 廈門市第三醫(yī)院 （福建 廈門 361000）

內(nèi)容提要： 目的：探討全自動(dòng)血培養(yǎng)儀在血液、無菌體液培養(yǎng)陽性中所起到的作用。方法：基于特定時(shí)間（2020年7月～2021年7月）及固定范圍內(nèi)（本院），收集血液、無菌體液標(biāo)本2590份，采用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀進(jìn)行培養(yǎng)，用自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定。結(jié)果：在所選取的血液、無菌體液標(biāo)本當(dāng)中，檢出264份陽性標(biāo)本（10.2%），假陽性率為0.15%；在264份病原菌當(dāng)中，2.7h為其最快檢出時(shí)間，12h、24h、48h、72h內(nèi)檢出占比分別為26.9%、51.1%、86.0%、95.8%；厭氧瓶先報(bào)警、需氧瓶后報(bào)警，需氧瓶先報(bào)警、厭氧瓶后報(bào)警的樣本所占比重分別為40.5%、34.5%，需氧瓶先報(bào)警、但厭氧瓶不報(bào)警占11.8%。結(jié)論：全自動(dòng)血培養(yǎng)儀具有靈敏度高、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，不僅能促進(jìn)細(xì)菌檢出種類、陽性率的提升，而且檢出更準(zhǔn)確、速度更快，能夠?yàn)榛颊咴\治爭取寶貴時(shí)間。

感染尤其是血液感染是一類常見且嚴(yán)重的臨床感染類型，會(huì)引發(fā)彌漫性血管內(nèi)凝血、多器官衰竭及休克等，嚴(yán)重者可誘發(fā)死亡。近年，血液感染在整個(gè)醫(yī)院感染當(dāng)中的發(fā)生率呈現(xiàn)出逐漸且快速升高趨向，而在對血液感染進(jìn)行診斷時(shí)，血培養(yǎng)為其金標(biāo)準(zhǔn)，而其方法已經(jīng)從之前的半人工、半自動(dòng)不斷向全自動(dòng)檢測轉(zhuǎn)變，而在全自動(dòng)檢測中，隨著醫(yī)療設(shè)備的持續(xù)推新，自動(dòng)化血培養(yǎng)儀在臨床中越發(fā)廣泛的應(yīng)用，使得血液感染當(dāng)中進(jìn)行血培養(yǎng)變得更加的準(zhǔn)確、可靠，并且還已經(jīng)成為其重要的診斷手段[1-3]。本文圍繞所采集的血液、無菌體液標(biāo)本，采用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀進(jìn)行培養(yǎng)，分析其陽性測定效果與價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

在2020年7月～2021年7月，采集2590份血液、無菌體液標(biāo)本（多為住院患者），其中，血液標(biāo)本1763份，無菌體液標(biāo)本827份。針對發(fā)熱患者，于發(fā)熱高峰期或者初期，在使用抗菌藥物之前，針對那些對抗菌藥物已經(jīng)有使用經(jīng)歷的，需于下次用藥之前實(shí)施采血、采體液操作（用無菌方法），然后將其均置入到事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶當(dāng)中。采血、體液量：成人為16～20mL，分別向需氧樹脂培養(yǎng)瓶、厭氧培養(yǎng)瓶中注入，每瓶為8～10mL；對于兒童而言，則需采集1～5mL，并且以一種合理、規(guī)范的方式注入至兒童樹脂培養(yǎng)瓶當(dāng)中。需要指出的是，當(dāng)完成標(biāo)本注入工作之后，需即刻送檢，并且及時(shí)進(jìn)行上機(jī)處理。針對所采用的儀器來講，即全自動(dòng)血培養(yǎng)儀（美國BD公司生產(chǎn)，BACTEC FX型）及梅里埃自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀（VITEK2型），分別開展細(xì)菌生化鑒定及藥物敏感性分析。

1.2 方法

①陰性瓶處理。經(jīng)血培養(yǎng)儀檢測后，如果發(fā)現(xiàn)有陽性瓶，此時(shí)，即刻將其中的陽性培養(yǎng)瓶挑選出來，在始終秉持無菌原則的前提下實(shí)施相關(guān)操作；用注射器將瓶中當(dāng)中的適量樣本進(jìn)行抽出，然后分別向歌倫比亞血平板、巧克力平板上進(jìn)行逐一轉(zhuǎn)種，而針對完成轉(zhuǎn)種的巧克力平板、血平板，則需要放到二氧化碳（濃度設(shè)定為5%）培養(yǎng)箱當(dāng)中（過夜）；然后直接進(jìn)行涂片，并實(shí)施規(guī)范化的革蘭染色鏡檢操作；針對所得到的鏡檢結(jié)果，需要及時(shí)進(jìn)行報(bào)告。對于經(jīng)純培養(yǎng)而最終獲得的細(xì)菌，需要用自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀，以細(xì)胞為對象，對其實(shí)施生化鑒定，并且還需要開展藥敏試驗(yàn)。需要指出的是，采用血培養(yǎng)儀進(jìn)行檢測之后，如果呈陽性，但在具體的轉(zhuǎn)種細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果上卻呈陰性，另外，經(jīng)涂片革蘭染色鏡檢得知，從中并無細(xì)菌，那么則可將其斷定為假陽性；②陰性瓶處理。進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（時(shí)間為5d），之后進(jìn)行儀器檢測，如果呈陰性，則對其實(shí)施常規(guī)卸瓶操作，且對液體展開圖片（血培養(yǎng)瓶中），與此同時(shí)，還需要轉(zhuǎn)種至各瓊脂平板上，若未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌滋生情況，則為真陰性；如果相反，即發(fā)現(xiàn)存在細(xì)菌生長，即假陰性。

2.結(jié)果

2.1 陽性率

在所采集標(biāo)本當(dāng)中，有268份儀器報(bào)警陽性，其所占的比重是10.3%；4株為假陽性，其在整個(gè)總報(bào)警陽性當(dāng)中的比重中是1.49%，與之相對應(yīng)的假陽性率為0.15%；另外，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)有264份的陽性標(biāo)本（10.2%），無假陰性。

2.2 病原菌分布

在所有的報(bào)警陽性培養(yǎng)瓶中，通過實(shí)施分離處理，從中得到264株的病原菌，其中，革蘭陰性桿菌、革蘭陽性球菌占比分別是61.0%、32.9%，另外，革蘭陽性桿菌、革蘭陰性球菌為1.5%、0.4%，3.8%、0.4%分別是真菌、厭氧菌所站的比重，見表1。

表1. 病原菌分布情況

2.3 病原菌陽性報(bào)警時(shí)間及菌種檢出率

在所有的病原菌中，最快檢出時(shí)間是2.7h，12h、24h、48h、72h內(nèi)檢出占比分別為26.9%、51.1%、86.0%、95.8%，見表2。

表2. 病原菌陽性報(bào)警時(shí)間、菌種檢出率[n(%)]

2.4 陽性病原菌于厭氧瓶、需氧瓶中的檢出結(jié)果

厭氧瓶先報(bào)警、需氧瓶后報(bào)警的樣本占比為40.5%，而需氧瓶先報(bào)警、厭氧瓶后報(bào)警的則占34.5%，需氧瓶先報(bào)警、但厭氧瓶不報(bào)警所占比重為11.8%，見表3。

表3. 陽性病原菌于厭氧瓶、需氧瓶中的檢出結(jié)果

3.討論

從本文結(jié)果可知，通過對2590份血液、無菌體液標(biāo)本進(jìn)行深入分析，從中發(fā)現(xiàn)，真陽性一共為264份，陽性率為10.2%，此結(jié)果與相關(guān)報(bào)道[4]的結(jié)果相近，即該研究指出，在1364例陽性報(bào)警標(biāo)本當(dāng)中，真陽性標(biāo)本為176例，占比為12.90%。但需要指出的是，其與既往采用雙相培養(yǎng)瓶的陽性率作對比，有了顯著提高。究其原因，可能與培養(yǎng)檢測方式發(fā)生改變，自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀能夠進(jìn)行培養(yǎng)、監(jiān)測，是一種非介入性檢測，能夠?qū)⑷藶楦深A(yù)全部排除掉，并且還能實(shí)現(xiàn)污染機(jī)會(huì)的減少，能夠?qū)㈥栃越Y(jié)果隨時(shí)發(fā)現(xiàn)，為血液、無菌體液標(biāo)本中病原菌的快速檢出奠定根基。

在本文當(dāng)中，發(fā)現(xiàn)假陽性為4例（0.15%）。之后圍繞這些患者，查閱其病歷，并且展開深層次、全面性的剖析，從中發(fā)現(xiàn)，白血病3例，其在具體的白細(xì)胞數(shù)上十分高。有研究[5]發(fā)現(xiàn)，白血病患者的血液當(dāng)中存在著非常高的粒細(xì)胞含量，在其代謝當(dāng)中，會(huì)有大量的二氧化碳（CO2）產(chǎn)生，因而會(huì)使假陽性產(chǎn)生。另外1例患者的最終結(jié)果之所以會(huì)是假陽性，究其原因，可能因?yàn)樵趯?shí)際培養(yǎng)時(shí)，出現(xiàn)突然停電情況（并且連續(xù)2次），受此影響，儀器的運(yùn)行出現(xiàn)失穩(wěn)情況，最終造成錯(cuò)報(bào)狀況的發(fā)生[6]。因此，圍繞所得到的假陽性結(jié)果，需要與臨床實(shí)際相結(jié)合，在試驗(yàn)過程中將各試驗(yàn)條件控制好，盡可能防止假陽性的發(fā)生，為血液、無菌體液培養(yǎng)陽性報(bào)警結(jié)果的更好分析、掌握提供切實(shí)便利。

在本文當(dāng)中，經(jīng)血液、無菌體液培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，大多是革蘭陰性桿菌感染，其所占比重為61.2%，而真菌、革蘭陽性球菌分別占3.8%、32.9%，厭氧菌、革蘭陰性球菌、革蘭陽性桿菌所占比重分別為0.4%、0.4%、1.5%。在具體的分離率上，大腸埃希菌為最高的病原菌，所占比重為36.1%，而假鼻疽伯克霍爾德菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌以及表皮葡萄球菌則位居其次。其與相關(guān)研究[7]的結(jié)論存在差異，即前5種病原菌分別是凝固酶陰性葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌與銅綠假單胞菌；但在分離率上卻存在一致性，即最高的都是大腸埃希菌。

從本文發(fā)現(xiàn)，自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀對陽性標(biāo)本的檢出速度快，在具體的陽性檢出的最快時(shí)間上，即為2h，24h、48h、72h內(nèi)所檢出的陽性占比分別為51.1%、86.0%、95.8%，因此，其能夠?yàn)榕R床診治提供可靠支撐。另外，還需要指出的是，通過深層次剖析陽性報(bào)警時(shí)間，從中得知，其與細(xì)菌種類間，有著十分緊密的聯(lián)系，也就是說，不同的種屬細(xì)菌，與之相對應(yīng)的檢出時(shí)間，也會(huì)存在不同程度的差異性，如大腸埃希菌，其在具體的陽性檢出時(shí)間上最快，而對于腸桿菌科細(xì)菌，其在12h內(nèi)的檢出率最高；另外，針對腸球菌屬來講，其在12～24h這一時(shí)間段內(nèi)有著最高的檢出陽性占比；針對鏈球菌屬以及葡萄球菌屬、非發(fā)酵菌，占比最高的是24～48h檢出率；另外，還需強(qiáng)調(diào)的是，革蘭陽性桿菌、真菌相對應(yīng)的檢出時(shí)間比較晚。

有研究[8]發(fā)現(xiàn)，僅用到了需氧瓶，并未用厭氧瓶進(jìn)行血液、無菌體液標(biāo)本培養(yǎng)，其陽性率都＜10.0%。即便使用了全自動(dòng)血培養(yǎng)儀，也不可因有著過低的厭氧菌陽性率，而僅用需氧瓶而不去使用厭氧瓶；對于腸桿菌科細(xì)菌來講，即便在厭氧瓶、需氧瓶當(dāng)中都生長，同樣存在厭氧瓶較需氧瓶快的情況（多則1d，少則30min），若對厭氧瓶不進(jìn)行使用，那么便會(huì)造成自動(dòng)化儀器快速性這一效能的喪失，受此影響，便需要增加厭氧瓶的使用數(shù)量，如此的話，便會(huì)升高兼性厭氧菌的檢出率，除此之外，在具體的早期報(bào)告時(shí)間上也會(huì)隨之縮短，減少其他細(xì)菌以及厭氧菌漏檢情況的發(fā)生[9]。所以，在進(jìn)行血液、無菌體液培養(yǎng)時(shí)，需要同時(shí)進(jìn)行厭氧瓶、需氧瓶操作。

在進(jìn)行血液、無菌體液培養(yǎng)時(shí)，假陰性有著比較大的危害性，其主要原因?yàn)椋孩佼?dāng)遭受真菌感染時(shí)，真菌對糖所具有的代謝能力較傳統(tǒng)細(xì)菌低，因此，在代謝過程中，會(huì)有非常低的CO2產(chǎn)生能力，最終便會(huì)出現(xiàn)假陰性情況；②如果是非發(fā)酵菌感染，此時(shí)，難以對葡萄糖進(jìn)行發(fā)酵，僅能對葡萄糖進(jìn)行氧化，使其產(chǎn)酸，并且產(chǎn)酸產(chǎn)氣量低于發(fā)酵菌，因而會(huì)有較低的CO2產(chǎn)量，最終便會(huì)造成假陰性[10]；③可能與抽血后培養(yǎng)瓶中置入儀器前置室溫中過久相關(guān)；④苛養(yǎng)菌感染，包含有鏈球菌，此類細(xì)菌在進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，有著緩慢的生長速度，而且還有著非常低的代謝能力，造成培養(yǎng)瓶當(dāng)中各指標(biāo)的變化均較儀器的檢測范圍低，最終引起假陰性[11]。所以，如果經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)結(jié)果與陰性，此時(shí)，盲轉(zhuǎn)十分有必要。而對于假陽性結(jié)果，國內(nèi)有研究[12]指出，白細(xì)胞過高（＞10×109/L）能夠釋放一定的CO2，改變pH值，從而出現(xiàn)假陽性。另外，如果采集樣本量＞12mL，造成瓶內(nèi)富集大量的白細(xì)胞，或因溫度失穩(wěn)而引發(fā)儀器假陽性。

對于全自動(dòng)血培養(yǎng)儀而言，其所具有的優(yōu)點(diǎn)就是有著較簡單的操作方法，并且靈敏度高，可實(shí)現(xiàn)校準(zhǔn)的自動(dòng)化。通過同時(shí)使用含樹脂需氧培養(yǎng)瓶、含溶血素厭氧培養(yǎng)瓶，并且借助儀器的自動(dòng)搖勻動(dòng)作（也就是24h連續(xù)恒溫陣列），便可以促進(jìn)微生物的生長，促進(jìn)陽性結(jié)果的檢出率的最大程度提升，并且還能夠使細(xì)菌種類數(shù)檢出數(shù)增多，因而最終可強(qiáng)化檢出速度，提高檢出準(zhǔn)確性。