華安縣鴨場11 種病毒感染的監(jiān)測與分析

陳燕慧

（福建省華安縣動物疫病預(yù)防控制中心，福建漳州 363800）

近年來，我國鴨飼養(yǎng)規(guī)模和數(shù)量發(fā)展迅速，同時(shí)鴨病也呈現(xiàn)越來越復(fù)雜的流行趨勢，繼發(fā)、并發(fā)等共感染病例越來越多[1]。華安縣養(yǎng)鴨業(yè)主要集中于湖林鄉(xiāng)、華豐鎮(zhèn)和仙都鎮(zhèn)等9 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，蛋鴨品種主要為麻鴨、金定鴨，主要免疫接種鴨病毒性肝炎卵黃抗體、重組禽流感（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗、鴨瘟弱毒疫苗和禽坦布蘇病毒疫苗；肉鴨品種主要為番鴨、半番鴨，主要免疫接種番鴨細(xì)小病毒弱毒疫苗、鴨病毒性肝炎卵黃抗體、重組禽流感（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗、小鵝瘟弱毒疫苗和鴨瘟弱毒疫苗。

為全面了解華安縣鴨場疫病病毒感染情況，2021年1 月—2022 年5 月對全縣境內(nèi)規(guī)模肉（蛋）鴨場開展了疫病調(diào)查及抽樣檢測，以PCR/RT-PCR 方法分別進(jìn)行禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）、呼腸孤病毒（Duck reovirus，DRV）、鴨瘟 病毒(duck plaque virus，DPV)、鴨肝炎病毒(Duck hepatitis virus，DHV)、番鴨細(xì)小病毒(Muscovy duck parvovirus，MDPV)、禽坦布蘇病毒（Avian tembusu virus，ATV)、鴨副黏病毒(Avian paramyxovirus，APMV)、鴨腺病毒(Duck adenovirus，DAdV)、鵝細(xì)小病毒(Goose par vovirus,GPV)、鴨星狀病毒((Duck astrovirus，DAstV)和鴨圓環(huán)病毒（duck circovirus，DuCV）等11 種病毒的病原學(xué)檢測，以期為華安縣鴨病毒性疫病的診斷與防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和信息記錄

于2021 年1 月—2022 年5 月，對華安縣內(nèi)存欄2000 只以上規(guī)模肉（蛋）鴨場（覆蓋9 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)20 個(gè)肉鴨場、21 個(gè)蛋鴨場，共約12.3 萬只鴨）進(jìn)行采樣，每個(gè)鴨場隨機(jī)采集咽喉/泄殖腔雙拭子樣品（以下簡稱拭子樣品）50 份、場內(nèi)污水樣品5 份，拭子樣品采集后放入含有雙抗的保存液中；所有樣品置于冰盒盡快送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。在采集樣品的同時(shí)對鴨場飼養(yǎng)的肉（蛋）鴨品種、日齡、養(yǎng)殖規(guī)模、養(yǎng)殖模式、鴨的來源、飼料、飲水來源、免疫情況、當(dāng)時(shí)發(fā)病情況及既往病史等方面進(jìn)行調(diào)查；從病鴨場（根據(jù)現(xiàn)場調(diào)查生產(chǎn)數(shù)據(jù)及養(yǎng)殖者反饋情況，主要根據(jù)鴨群臨床癥狀，包括飲水和采食量是否異常，鴨群是否有死亡，蛋鴨是否有減蛋，是否存在生長不良等異常情況來定義）采集心、肝、脾、肺等組織樣品置于冰盒中盡快送檢，分別采集2 個(gè)肉鴨場、1 個(gè)蛋鴨場生長發(fā)育不良鴨組織樣品各9 份和2 份，以及5 個(gè)肉鴨場?。ㄋ溃喗M織樣品15 份(每個(gè)場各3 份)、3 個(gè)蛋鴨場?。ㄋ溃喗M織樣品10 份（各3、3 和4 份）和相關(guān)信息，詳見表1。

表1 所采樣品份數(shù) 單位：份

1.2 檢測方法

參照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2020）等行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)，對采集的待檢樣品分別進(jìn)行AIV[2]、DPV[3]、DHV[4]、DRV[5]、MDPV[5]、ATV[6]、APMV[7]、DuCV[8]、DAdV[9]和GPV[5]10 種病毒核酸的檢測；參照張蕊等報(bào)道設(shè)計(jì)合成鴨星狀病毒(DAstV)引物，開展DAstV 病毒核酸檢測[10]。病毒核酸提取按北京全式金生物技術(shù)有限公司Easy Pure Viral DNA/RNA Kit 試劑盒操作進(jìn)行，獲得的核酸樣品用Easy Script One-Step RT-PCR SuperMix 或2×Easy-Taq PCR SuperMix 試劑盒說明書進(jìn)行RT-PCR 或PCR擴(kuò)增。陰陽性對照、反應(yīng)體系及條件等分別按以上標(biāo)準(zhǔn)或文獻(xiàn)執(zhí)行。

1.3 結(jié)果判定

病毒感染陽性場判定：本研究對采集樣品所在鴨場或鴨群疫苗及藥物使用情況均有詳細(xì)調(diào)查；PCR 檢測為陽性，且該鴨群或所在鴨場已經(jīng)免疫過相應(yīng)活疫苗的樣品，進(jìn)一步送福州鉑尚生物技術(shù)有限公司進(jìn)行基因序列測序，對獲得序列進(jìn)行比對分析，以確定是否為疫苗株。只要檢出為野毒的1 份以上11 種病毒中的某一病毒核酸陽性樣品，則判定該場為病毒感染陽性場。

2 結(jié)果

2.1 樣品總體檢測結(jié)果

從表2 可知，華安縣41 個(gè)肉（蛋）鴨養(yǎng)殖場2291 份待檢樣品進(jìn)行11 種病毒核酸檢測結(jié)果顯示，608 份樣品中檢出病毒核酸陽性，樣品總陽性率26.55%（608/2291），共檢出7 種病毒，病毒核酸陽性率從高到低依次為DuCV、ATV、DRV、DAstV、H9N2-AIV、DAdV 和MDPV，分別為15.62%、5.67%、2.58%、3.27%、3.97%、0.92%和0.35%。以DuCV 感染率最高。

表2 所有待檢樣品11 種病毒核酸檢測結(jié)果 單位：%

有36 個(gè)養(yǎng)鴨場檢出病毒核酸陽性，場群陽性率87.81%（36/41)，表明華安縣41 個(gè)養(yǎng)鴨場中有36 個(gè)場存在不同程度的病毒感染。場陽性率最高也為DuCV，為56.09%，之后依次為ATV、H9N2-AIV、DAstV、DRV、DAdV 和MDPV，分別為31.71%、17.07%、14.63%、7.32%、4.88%和2.44%。未檢出DPV、APMV、DHV 和GPV4 種病毒。

2.2 不同用途鴨場檢測結(jié)果

2.2.1 肉鴨場檢測結(jié)果

20 個(gè)肉鴨場的1000 份咽喉/泄殖腔拭子檢測結(jié)果顯示，來自肉鴨場的拭子樣品檢出6 種病毒即DuCV、DRV、ATV、DAstV、DAdV 和MDPV 核酸陽性，陽性率依次為19.1%、7.7%、2.4%、2.4%、1.3%和0.5%，肉鴨場污水樣品中檢出5 種病毒即DuCV、ATV、DRV、DAstV 和DAdV，陽性率依次為41%、7%、5%、4%和2%，詳見表3。

2.2.2 蛋鴨場檢測結(jié)果

21 個(gè)蛋鴨場的1050 份咽喉/泄殖腔拭子樣品檢測結(jié)果顯示，來自蛋鴨的咽喉/泄殖腔拭子樣品檢出5種病毒即DuCV、ATV、H9N2-AIV、DAstV 和DAdV，陽性率自高到低依次為7.24%、6.48%、4.95%、3.91%和0.38%，蛋鴨場污水樣品中檢出5 種病毒即DuCV、ATV、H9N2-AIV、DAstV 和DAdV，陽性率依次為25.71%、17.14%、6.67%、5.76%和1.9%，詳見表3。

表3 肉鴨場、蛋鴨場所采樣品11 種病毒核酸檢測陽性率 單位：%

2.3 不同健康狀況鴨群及場地所采樣品檢測結(jié)果

在鴨病調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，41 個(gè)肉（蛋）鴨場中有8 個(gè)鴨場（5 個(gè)肉鴨場、3 個(gè)蛋鴨場）出現(xiàn)?。ㄋ溃?，3個(gè)蛋鴨場病（死）鴨組織樣品中僅檢出ATV 陽性，5個(gè)肉鴨場?。ㄋ溃喗M織樣品中3 個(gè)場檢出DuCV 和DRV 核酸雙陽性、1 個(gè)場檢出MDPV 和DuCV 核酸雙陽性、1 個(gè)場檢出ATV 陽性。對8 家發(fā)病鴨場與33 家未發(fā)病鴨場檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表4。由表4 可知，來自發(fā)病鴨場拭子樣品及其場內(nèi)污水樣品中檢出的病毒種類更多、病毒感染的陽性率更高，尤其是ATV、鴨DRV 和DuCV3 種病毒更為明顯。

表4 不同健康狀況鴨群及場地所采樣品11 種病毒核酸檢測陽性率 單位：%

2.4 病毒共感染情況

統(tǒng)計(jì)采自41 個(gè)肉（蛋）鴨場所有不同種類樣品的病毒檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除11 份生長不良鴨組織樣品中均僅檢出DuCV 陽性外，其余3 種類型樣品中均存在不同程度、不同病毒的共感染現(xiàn)象，其中以DuCV共感染問題最為嚴(yán)重，檢出的358 份DuCV 核酸陽性樣品中存在2 種、3 種共感染的樣品占29.89%（107/358），如有的個(gè)別蛋鴨場的咽喉/泄殖腔拭子樣品、場內(nèi)污水樣品中均檢出DuCV 與H9N2-AIV 或（和）ATV2（3）種病毒核酸陽性，5 個(gè)肉鴨場中有4個(gè)肉鴨場的?。ㄋ溃喗M織樣品中，檢出DuCV 和DRV 或MDPV 核酸雙陽性。

3 結(jié)論與討論

3.1 關(guān)于不同類型鴨場病毒感染情況

由表3 可知，肉鴨場咽喉/泄殖腔拭子和污水樣品兩種樣品中攜帶病毒種類及其陽性率呈高度相關(guān)，表明肉鴨場內(nèi)肉鴨消化道病毒感染與場內(nèi)水中是否存在病毒及其種類有直接相關(guān)。

蛋鴨場咽喉/泄殖腔拭子樣品及蛋鴨場污水樣品中檢出病毒均為DuCV、ATV、H9N2-AIV、DAstV 和DAdV，其中以DuCV 核酸陽性檢出率最高，發(fā)現(xiàn)場內(nèi)水樣中病毒核酸陽性率均高于蛋鴨咽喉/泄殖腔拭子樣品，這與有的蛋鴨群離地飼養(yǎng)及蛋鴨本身抗病力較肉鴨強(qiáng)有關(guān)。

本次檢測發(fā)現(xiàn)，華安縣蛋鴨群存在一定程度的H9N2-AIV 感染。有報(bào)道認(rèn)為，我國低致病性H9亞型AIV 危害較為嚴(yán)重，可造成家禽發(fā)病甚至死亡，引起家禽免疫抑制，低致病性AIV 雖比高致病性AIV 危害小，但一旦發(fā)病往往給養(yǎng)殖場造成很大經(jīng)濟(jì)損失[11]；

3.2 （未）發(fā)病鴨群及場地所采樣品檢測結(jié)果分析

由表3 可知，與33 個(gè)未發(fā)病鴨場的相應(yīng)樣品檢測結(jié)果比較，采自8 個(gè)發(fā)病鴨場鴨拭子樣品及其場內(nèi)污水樣品中檢出的病毒種類更多為兩種病毒DRV 和MDPV；且病毒感染的陽性率明顯更高，尤其是ATV、DRV 和DuCV3 種病毒更為明顯，在發(fā)病鴨場、未發(fā)病鴨場樣品中其檢出陽性率分別為11.36%（50/440）和3.69%（67/1815）、18.64%（82/440）和0、31.59%（139/440）和10.8%（196/1815），進(jìn)一步表明鴨群是否發(fā)病與場內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生狀況、水中是否帶有病原直接相關(guān)，提示養(yǎng)殖者應(yīng)充分認(rèn)識到鴨場內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生和消毒對鴨病防控的重要性。

3.3 生長不良鴨檢測結(jié)果分析

研究報(bào)道，在我國養(yǎng)鴨生產(chǎn)中DuCV 感染的陽性率較高，尤其是生長不良、羽毛紊亂、體況消瘦鴨（其體重只有同群日齡未感染的健康鴨體重的1/2～1/3），其DuCV 感染的陽性率可高達(dá)81.2%，表明鴨生長不良、消瘦與DuCV 感染有關(guān)[12]。在本次鴨病調(diào)查中發(fā)現(xiàn)2 個(gè)肉鴨場、1 個(gè)蛋鴨場有生長發(fā)育不良鴨，其體重僅為同群中正常鴨體重的1/3，由表3 可知，其11 份組織樣品中均僅檢出DuCV 陽性，陽性率100%，表明華安縣鴨群中生長發(fā)育不良鴨很可能與感染DuCV 有關(guān)。

3.4 病毒共感染檢測情況分析

肉（蛋）鴨拭子樣品、場內(nèi)污水樣品及病（死）鴨組織樣品中均檢出存在不同程度、不同病毒的共感染現(xiàn)象，其中以DuCV 共感染現(xiàn)象最為嚴(yán)重，在檢出DuCV 核酸陽性358 份樣品中，與DRV、H9N2-AIV、ATV 或（和）MDPV2（3）種病毒共感染核酸陽性的樣品占29.89%（107/358），揭示華安縣養(yǎng)鴨生產(chǎn)中存在較嚴(yán)重的DuCV 雙重或三重共感染現(xiàn)象。