SWV平均值及MGMT與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌預(yù)后的關(guān)系

劉志為， 劉 慶， 胡茂飛， 聞 巍

解放軍總醫(yī)院海南醫(yī)院普通外科， 海南 三亞 572013

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈現(xiàn)顯著升高趨勢，最為常見的病理類型是浸潤性導(dǎo)管癌，乳腺癌形成、浸潤、轉(zhuǎn)移是多因素參與的過程，既涉及某些基因異常表達(dá)，同時也和腫瘤細(xì)胞異型增生與臨近細(xì)胞相互作用有關(guān)，這一過程受到多種細(xì)胞因子調(diào)控[1,2]。目前對于乳腺癌的診斷方法較多，病理學(xué)診斷屬于金標(biāo)準(zhǔn)，但是具有創(chuàng)傷性，且多數(shù)患者在就診時已處于中晚期。超聲檢查具有無創(chuàng)和可重復(fù)性，在臨床篩查乳腺癌中應(yīng)用較為廣泛，但是常規(guī)的超聲診斷特異性不高，主觀診斷性強(qiáng)，缺少定量觀察指標(biāo)，因此在應(yīng)用上受到了一定限制[3,4]。剪切波彈性成像(SWE)是基于超聲波力學(xué)效應(yīng)的新技術(shù)，SWE可以對乳腺癌聲像特征提供相應(yīng)診斷依據(jù)，其中剪切波速度(SWV)是反映病灶軟硬度的主要指標(biāo)，通過分析病變組織及周圍組織的SWV值差異有助于對病變作出更準(zhǔn)確的診斷。病灶耐藥相關(guān)蛋白分子O6-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)屬于獨(dú)特DNA修復(fù)酶，可以發(fā)揮轉(zhuǎn)移酶和甲基接受體作用，修復(fù)DNA鏈上鳥嘌呤損傷，通過檢測MGMT的活性有助于了解烷化劑藥物對惡性腫瘤的治療效果[5]。然而，尚不明確MGMT表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。本研究以女性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者為研究對象，分析了SWV平均值及MGMT表達(dá)同患者預(yù)后之間的關(guān)系，旨在為乳腺癌的早期診斷和治療提供新方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究時間為2016年1月至2022年1月，選取90例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者作為觀察組，年齡(60.20±6.92)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：女性患者；均經(jīng)病理學(xué)確診；在我院接受乳腺癌根治術(shù)；術(shù)前未行放化療等治療；患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有其他部位惡性腫瘤；乳腺內(nèi)有植入物者；妊娠期或哺乳期婦女；臨床隨訪資料不完整。同時選取90例乳腺良性病變患者作為對照組(其中乳腺纖維腺瘤46例，乳腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤29例，乳腺腺病15例)，年齡(58.97±7.11)歲。兩組患者年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、生育史、高血壓和糖尿病患病情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本次研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1治療及隨訪

患者麻醉滿意后根據(jù)病變侵犯部位和組織決定是否進(jìn)行胸小肌切除，保留患者胸大肌，清掃相關(guān)區(qū)域組織淋巴結(jié)，對胸內(nèi)側(cè)和外側(cè)神經(jīng)進(jìn)行保留，切除病灶組織完成手術(shù)。對患者開展隨訪觀察，隨訪時間截至2022年1月，采取電話、家訪、返院復(fù)診等方式記錄患者最終結(jié)局，對患者初次就診的病例相關(guān)資料進(jìn)行收集，統(tǒng)一錄入計算機(jī)系統(tǒng)開展分析。

1.2.2SWV平均值測定

儀器為Aixplorer型彩色超聲診斷儀(法國Supersonic Imagine公司)，常規(guī)獲取乳腺二維圖像，對腫物大小、形態(tài)、鈣化情況等進(jìn)行綜合分析，選擇目標(biāo)區(qū)域切換超聲檢查模式為VTQ模式，取樣框選擇病灶周圍最硬區(qū)域，叮囑患者屏氣3 s獲取圖像，重復(fù)測量3次SWV值，并取平均值，測量過程中應(yīng)保證探頭與檢查部位相垂直，檢查過程中注意避開鈣化或液化壞死部位。

1.2.3免疫組化檢測

將獲取腫物組織石蠟標(biāo)本進(jìn)行4 μm切片，脫蠟后通過高溫、高壓對抗原進(jìn)行修復(fù)，然后進(jìn)行組化染色，加抗MGMT(批號ab39253，英國Abcam公司)、雌激素受體(ER)(批號ab241557，英國Abcam公司)、孕激素受體(PR)(批號ab32085，英國Abcam公司)和人類表皮生長因子受體2(HER2)(批號ab134182，英國Abcam公司)單抗50 μL，置濕盒37 ℃溫育1 h，緩沖液漂洗3次，加第二抗體(批號ab6728，英國Abcam公司)50 μL置濕盒37 ℃溫育30 min，緩沖液漂洗3次，加酶復(fù)合物50 μL置濕盒37 ℃溫育30 min，緩沖液漂洗3次，用底物緩沖液溶解底物配成1 mg/mL，加50 μL室溫顯色10 min，蒸餾水終止顯色后加蘇木精復(fù)染液50 μL復(fù)染1 min后使用專用封片劑封片在顯微鏡下觀察。

MGMT表達(dá)陽性細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞胞核或胞質(zhì)內(nèi)有粉紅色顆粒，當(dāng)陽性細(xì)胞≥10%時，則MGMT陽性表達(dá)；陽性細(xì)胞<10%時，則MGMT陰性表達(dá)。當(dāng)細(xì)胞核染色≥10%時，則ER和PR陽性表達(dá)；細(xì)胞核染色<10%時，則ER和PR陰性表達(dá)。當(dāng)細(xì)胞膜染色≥30%時，則HER2陽性表達(dá)；細(xì)胞膜染色<30%時，則HER2陰性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組SWV平均值、MGMT陽性表達(dá)比較

觀察組SWV平均值、MGMT陽性表達(dá)率明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組和對照組SWV平均值、MGMT陽性表達(dá)比較

2.2 SWV平均值與觀察組臨床病理特征的關(guān)系

病灶直徑≥2 cm、低分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者SWV平均值明顯高于病灶直徑<2 cm、中高分化、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)。見表2。

表2 SWV平均值與觀察組臨床病理特征的關(guān)系

2.3 MGMT陽性表達(dá)與觀察組臨床病理特征的關(guān)系

ER陰性患者M(jìn)GMT陽性表達(dá)率明顯高于ER陽性患者(P<0.05)。見表3。

表3 MGMT陽性表達(dá)與觀察組臨床病理特征的關(guān)系

2.4 不同SWV平均值患者無進(jìn)展生存時間比較

將觀察組患者分為SWV平均值<5.60 m/s組(34例)和SWV平均值≥5.60 m/s組(56例)；SWV平均值≥5.60 m/s組患者無進(jìn)展生存時間(22個月)短于SWV平均值<5.60 m/s組患者(32個月)(χ2=9.145，P<0.05)。見圖1。

圖1 不同SWV平均值患者無進(jìn)展生存時間曲線

2.5 不同MGMT表達(dá)患者無進(jìn)展生存時間比較

MGMT陽性表達(dá)和陰性表達(dá)患者無進(jìn)展生存時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.188，P>0.05)。見圖2。

圖2 不同MGMT表達(dá)患者無進(jìn)展生存時間比較

3 討論

本研究應(yīng)用剪切波彈性技術(shù)開展對乳腺浸潤性導(dǎo)管癌診斷，該方法通過對乳腺病灶組織的彈性模量值進(jìn)行計算，可以對病變的硬度進(jìn)行定量分析。多數(shù)惡性病灶常具有更高程度的纖維化，因此具有較高的硬度，這也是剪切波彈性技術(shù)可以進(jìn)行定量分析、診斷的基礎(chǔ)[6]。本研究中，觀察組SWV平均值高于對照組，研究發(fā)現(xiàn)浸潤性導(dǎo)管癌在朝向周圍組織浸潤時間質(zhì)會發(fā)生增生反應(yīng)，造成硬度增大，但是導(dǎo)管原位癌則由于向周圍組織浸潤不明顯，不會出現(xiàn)增生反應(yīng)，硬度變化不大，因此，臨床認(rèn)為導(dǎo)管原位癌處于浸潤性癌發(fā)展的過程[7]。

本研究還發(fā)現(xiàn)，病灶直徑≥2 cm、低分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的SWV平均值更高。隨著臨床分期的增加，腫瘤細(xì)胞增殖指數(shù)升高，細(xì)胞會突破基底膜朝向間質(zhì)浸潤，同時引起間質(zhì)膠原纖維組織增生，因此硬度增加[8]。在腫瘤分化程度方面，低分化癌患者腫瘤分化程度越差，核分裂數(shù)增加越高，因此間質(zhì)成分比例也就越高，導(dǎo)致硬度增加，因此SWV平均值也會相應(yīng)升高。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞通過侵犯淋巴管植入淋巴結(jié)邊緣，促進(jìn)腫瘤血管生成形成并引起增殖的癌細(xì)胞彌漫整個淋巴結(jié)，由于淋巴結(jié)組織被癌細(xì)胞侵襲，其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變、被膜組織融合，造成硬度和體積增大[9]。對預(yù)后方面的分析發(fā)現(xiàn)，SWV平均值≥5.60 m/s組患者無進(jìn)展生存時間相較于SWV平均值<5.60 m/s組患者明顯縮短。乳腺浸潤性導(dǎo)管癌腫瘤成分主要是增生的膠原纖維組織，作為細(xì)胞外基質(zhì)主要成分，其硬度要較腫瘤細(xì)胞大，因此SWV平均值升高更顯著[10]，SWV平均值的升高說明病變加重，因而患者的無進(jìn)展生存時間縮短。

MGMT屬于特殊的DNA修復(fù)酶，具有轉(zhuǎn)移酶的作用，能夠修復(fù)DNA鏈上鳥嘌呤損傷，當(dāng)MGMT發(fā)生轉(zhuǎn)甲基化后就會喪失活性[11]。本研究也發(fā)現(xiàn)觀察組MGMT陽性表達(dá)率顯著高于對照組。本研究推測，靶細(xì)胞MGMT活性降低無法對于DNA鳥嘌呤O6位上的烷基化進(jìn)行有效修復(fù)，因此造成腫瘤的發(fā)生。有研究對宮頸癌患者分析發(fā)現(xiàn)，正常宮頸組織不存在MGMT啟動子甲基化，而且MGMT甲基化的程度與宮頸病發(fā)展程度具有相關(guān)性，在胃癌患者的研究中也發(fā)現(xiàn)MGMT甲基化水平同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分級和患者預(yù)后之間存在關(guān)聯(lián)[12,13]。本研究還發(fā)現(xiàn)ER陰性患者M(jìn)GMT陽性表達(dá)率明顯高于ER陽性患者，同時發(fā)現(xiàn)MGMT陽性表達(dá)同患者無進(jìn)展生存時間之間無明顯關(guān)聯(lián)。其他研究顯示，腫瘤細(xì)胞耐藥程度同MGMT表達(dá)強(qiáng)度無關(guān)聯(lián)性，但是同MGMT陽性表達(dá)相關(guān)，因此認(rèn)為亞硝脲類藥物通過與DNA鏈上的鳥嘌呤6位氧結(jié)合同互補(bǔ)DNA形成具有細(xì)胞毒性DNA交鏈，對DNA的復(fù)制產(chǎn)生影響，但是DNA交鏈會被MGMT所修復(fù)，因此造成腫瘤耐藥[14,15]。因此，本研究推測MGMT的表達(dá)可能是影響ER陰性患者治療效果的一個基因。

綜上，女性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌SWV平均值和MGMT表達(dá)與臨床病理特征有一定關(guān)系，其中SWV平均值與患者預(yù)后有關(guān)，而MGMT與預(yù)后無明顯關(guān)系。提示臨床中通過測定SWV平均值和MGMT表達(dá)可能為患者提供更有針對性的治療方案，從而為實現(xiàn)乳腺癌的個體化、預(yù)見性化療提供參考依據(jù)。但是本研究納入病例少，也未能同其他分型乳腺癌進(jìn)行對比，仍需進(jìn)一步深入研究。