DSCT聯(lián)合miR-10b-3p在腦卒中頸動(dòng)脈狹窄診斷中的應(yīng)用

司延棟， 陳昆濤*， 劉 亮， 彭興慧

1. 遵義醫(yī)科大學(xué)第五附屬(珠海)醫(yī)院放射科， 廣東 珠海 519100；2. 廣東省中醫(yī)院斗門醫(yī)院(珠海市斗門區(qū)僑立中醫(yī)院)放射科， 廣東 珠海 519125

腦卒中是全球范圍內(nèi)具有較高發(fā)病率的急性腦血管疾病[1,2]。缺血性腦卒中是最常見的腦卒中類型，主要是由大腦動(dòng)脈閉塞引起[1]。頸動(dòng)脈狹窄是缺血性腦卒中的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)，早期評(píng)估頸動(dòng)脈狹窄有助于提高患者生存率并改善預(yù)后。目前，多項(xiàng)影像學(xué)技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于腦卒中等血管疾病檢查中，包括超聲、磁共振成像(MRI)和計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)等。CT在評(píng)價(jià)動(dòng)脈狹窄或鈣化斑塊方面具有重要作用，其診斷準(zhǔn)確性幾乎與金標(biāo)準(zhǔn)數(shù)字減影血管造影(DSA)相當(dāng)[3,4]。近年來，雙源計(jì)算機(jī)斷層掃描(DSCT)的應(yīng)用迅速增加。文獻(xiàn)研究表明，DSCT對(duì)動(dòng)脈狹窄分級(jí)的診斷準(zhǔn)確性高于DSA[5]。目前，對(duì)于無癥狀性頸動(dòng)脈狹窄患者的早期診斷較困難。由于頸動(dòng)脈狹窄過程中伴隨多種生理學(xué)指標(biāo)變化，因此，影像學(xué)技術(shù)聯(lián)合血漿學(xué)指標(biāo)是缺血性腦卒中早期診斷的一項(xiàng)有效措施。最近，有文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)icroRNAs(miRs)不僅調(diào)節(jié)易損動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成[6]，而且可預(yù)測頸動(dòng)脈斑塊破裂和腦卒中發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]。miR-10b-3p是miRs中的一員，據(jù)報(bào)道，缺血性腦卒中后miR-10b-3p表達(dá)水平顯著下調(diào)[8]，并且miR-10b-3p通過靶向Krüpel樣因子5(KLF5)調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化中的細(xì)胞增殖和凋亡[9]。然而，目前尚不清楚miR-10b-3p在腦卒中頸動(dòng)脈狹窄診斷中的價(jià)值。本研究評(píng)估了DSCT聯(lián)合miR-10b-3p在腦卒中頸動(dòng)脈狹窄診斷中的價(jià)值，旨在為該病的早期診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究為一項(xiàng)前瞻性研究，納入2018年1月至2022年1月在遵義醫(yī)科大學(xué)第五附屬(珠海)醫(yī)院確診的133例急性缺血性腦卒中患者，包括男性81例，女性52例；年齡36～82歲，平均年齡(61.43±11.24)歲。本研究符合倫理學(xué)要求并患者知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2010》[10]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；發(fā)病時(shí)間6 h以內(nèi)；均行DSA和DSCT檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：顱內(nèi)出血、顱內(nèi)血管瘤等患者；心肺肝腎功能異常、惡性腫瘤、精神疾病等患者；存在DSA或DSCT禁忌證的患者；曾接受頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)(CEA)或頸動(dòng)脈支架植入術(shù)(CAS)的患者。另收集基線資料匹配的30例健康受試者作為對(duì)照組，包括男性20例，女性10例;年齡39～81歲，平均年齡(60.32±15.53)歲。

1.2 DSCT及 DSA檢查

DSCT檢查：儀器為德國西門子雙源SOMATOM Force CT儀，患者取仰臥位行頸部平掃，掃描范圍從主動(dòng)脈弓到大腦動(dòng)脈環(huán)，平掃參數(shù)：管電壓120 kV，管電流300 mAs，掃描總時(shí)間9 s，層厚64×0.6 mm。然后經(jīng)肘靜脈以4 mL/s流率注入60 mL對(duì)比劑碘海醇(歐乃派克，含碘量為300 mg/mL)。主動(dòng)脈弓CT值達(dá)到閾值時(shí)，延遲4 s行自動(dòng)掃描，掃描參數(shù)：管電壓120 kV，管電流150 mA，掃描總時(shí)間4.63 s，層厚0.7 mm。將重建數(shù)據(jù)傳入MMWP9594工作站進(jìn)行操作，通過最大密度投影(MIP)、多平面重組(MPR)和容積再現(xiàn)(VR)技術(shù)觀察頸動(dòng)脈特征，測量血管直徑并計(jì)算狹窄率。

DSA檢查：儀器為GEInnova3100型數(shù)字減影血管造影設(shè)備。通過Seldinger技術(shù)分別以15 mL/s速度向左、右頸動(dòng)脈起始端注射10～16 mL對(duì)比劑碘海醇(歐乃派克，含碘量為300 mg/mL)，計(jì)算其狹窄率。

DSCT和DSA測定的狹窄率均由3名資深放射科醫(yī)師以盲法評(píng)估。根據(jù)金標(biāo)準(zhǔn)DSA測得結(jié)果將患者分為2組，即<50%組和≥50%組，在此基礎(chǔ)上細(xì)分為6組，即0組、<30%組、30%～49%組、50%～69%組、70%～99%組和100%組[11]。此外，根據(jù)CT值大小，將CT值≥130 Hu定為鈣化斑塊組，將CT值<130 Hu定為非鈣化斑塊組。在此基礎(chǔ)上細(xì)分為鈣化斑塊組(CT值≥130 Hu)、纖維斑塊組(CT值為51～129 Hu)和軟斑塊組(CT值≤50 Hu)[12]。

1.3 RT-qPCR檢測血清miR-10b-3p水平

入院時(shí)抽取患者及健康受試者外周靜脈血2 mL，離心分離血清。使用TRIzol試劑(貨號(hào)15596-018，美國Invitgen公司)提取血清總RNA。用NanoDrop 2000C超微量分光光度計(jì)檢測RNA的濃度和純度。RNA 6000 Nano試劑盒(貨號(hào)5067-1511，美國安捷倫科技有限公司)檢測RNA的完整性。用PrimeScrip RT試劑盒(貨號(hào)RR036A，日本TaKaRa公司)將總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。在ABI 7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上使用miScript SYBR Green熒光定量PCR試劑盒(貨號(hào)DXT-218076，德國Qiagen公司)檢測miR-10b-3p的表達(dá)水平，并使用2-ΔΔCt方法由U6進(jìn)行歸一化處理。引物序列如下：miR-10b-3p和U6的正向引物分別為5′-ACAGATTCGATTCTAGGGGAA-3′和5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′。反向引物為試劑盒的通用引物。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

SPSS 21.0軟件用于統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析及Tukey事后檢驗(yàn)。通過受試者操作特征(ROC)曲線進(jìn)行診斷效能分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DSCT與DSA診斷不同狹窄程度的比較

133例患者中，以DSA為金標(biāo)準(zhǔn)，DSCT正確診斷非狹窄9例(100%)，正確診斷<30%狹窄33例(89.19%)，正確診斷30%～49%狹窄18例(78.26%)，正確診斷50%～69%狹窄14例(70.00%)，正確診斷70%～99%狹窄26例(81.25%)，正確診斷完全閉塞12例(100.00%)，各組仍存在誤診和漏診情況。見表1。

表1 DSCT與DSA診斷不同狹窄程度的結(jié)果比較

2.2 健康人群和不同頸動(dòng)脈狹窄患者的血清miR-10b-3p水平比較

與健康受試者相比，缺血性腦卒中患者血清水平顯著降低(1.00±0.19vs0.51±0.23，t=10.784，P<0.001)。此外，如表2所示，不同頸動(dòng)脈狹窄患者，隨狹窄率的升高，血清miR-10b-3p水平呈降低趨勢(shì)(P<0.05)。

表2 不同頸動(dòng)脈狹窄患者的血清miR-10b-3p水平比較

2.3 血清miR-10b-3p診斷鈣化斑塊類型的價(jià)值

根據(jù)CT值對(duì)斑塊類型進(jìn)行分類，結(jié)果顯示，軟斑塊組、纖維斑塊組、鈣化斑塊組的miR-10b-3p表達(dá)量分別為0.75±0.20、0.56±0.23、0.36±0.13(F=37.443，P<0.001)。與軟斑塊組和纖維斑塊組比較，鈣化斑塊組患者的血清miR-10b-3p表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)。CT值與miR-10b-3p呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.484，P<0.001)，見圖1。ROC曲線分析顯示(圖1)，血清miR-10b-3p診斷鈣化斑塊的曲線下面積(AUC)為0.823、95%置信區(qū)間為0.748～0.884、Youden指數(shù)為0.61、截?cái)嘀禐椤?.427、敏感性為80.7%、特異性為80.26%。

2.4 DSCT聯(lián)合miR-10b-3p診斷50%頸動(dòng)脈狹窄的價(jià)值

ROC曲線分析顯示(圖2)，DSCT診斷50%頸動(dòng)脈狹窄的AUC、敏感性、特異性分別是0.995、100.00%和94.20%，miR-10b-3p診斷50%頸動(dòng)脈狹窄的AUC、敏感性、特異性分別是0.815、76.56%和82.61%，DSCT聯(lián)合miR-10b-3p診斷50%頸動(dòng)脈狹窄的AUC、敏感性、特異性分別是0.995、100.00%和94.20%。DSCT與miR-10b-3p的聯(lián)合診斷價(jià)值與DSCT單獨(dú)診斷一致。

3 討論

頸動(dòng)脈狹窄是缺血性腦卒中的主要誘因之一，約占所有病例的10%～15%[13]。頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)(CEA)和頸動(dòng)脈支架植入術(shù)(CAS)是對(duì)有癥狀的頸動(dòng)脈狹窄患者進(jìn)行二級(jí)腦卒中預(yù)防的公認(rèn)的治療方法。然而，對(duì)于無癥狀性頸動(dòng)脈狹窄患者的預(yù)防則較困難。大腦動(dòng)脈血流的改善和神經(jīng)癥狀的緩解高度依賴于頸動(dòng)脈的管腔尺寸，患者的治療方案通常取決于頸動(dòng)脈狹窄的百分比和管腔直徑。在CT檢查中，CT圖像上管腔直徑的任何可能變化都可能導(dǎo)致巨大的臨床影響，因此，獲得高質(zhì)量和高準(zhǔn)確性的CT圖像對(duì)于患者的防治至關(guān)重要。

DSCT系統(tǒng)由兩套X線球管系統(tǒng)和兩套探測器系統(tǒng)組成，它同時(shí)使用兩種不同的能量對(duì)患者進(jìn)行成像。與單源CT相比，DSCT可反映病灶的生理學(xué)功能變化，因此更容易發(fā)現(xiàn)病灶，目前已經(jīng)逐漸應(yīng)用于多種疾病的臨床診治中[14,15]。使用DSCT圖像可以分離水、脂肪、碘和鈣濃度等對(duì)象，在評(píng)價(jià)血管病變特征中具有突出優(yōu)勢(shì)[16]。在診斷缺血性腦卒中時(shí)，與常規(guī)CT相比，DSCT可有效區(qū)別缺血性腦卒中區(qū)和缺血半暗帶，由于缺血半暗帶具有可逆性，對(duì)缺血半暗帶的早期明確診斷有利于醫(yī)師盡早采取治療措施，使其恢復(fù)血流灌注，從而避免缺血性腦卒中區(qū)域擴(kuò)大[17-20]。本研究顯示，DSCT診斷50%頸動(dòng)脈狹窄的AUC為0.995，敏感性為100.00%，特異性為94.20%，同時(shí)，DSCT與miR-10b-3p聯(lián)合診斷50%頸動(dòng)脈狹窄的價(jià)值與DSCT單獨(dú)診斷一致，說明DSCT診斷頸動(dòng)脈狹窄的準(zhǔn)確性幾乎與金標(biāo)準(zhǔn)DSA相當(dāng)。肖國棟等[11]研究顯示，DSCT診斷非鈣化斑塊致50%頸動(dòng)脈狹窄的敏感性為100.0%，特異性為94.3%；DSCT診斷鈣化斑塊致50%頸動(dòng)脈狹窄的敏感性為100.0%，特異性為87.1%，該文獻(xiàn)與本文研究結(jié)果基本一致。分析其原因，可能是DSCT能夠全面而清晰地顯示并獲取與血管造影相當(dāng)?shù)膱D像，因此對(duì)病變程度的診斷準(zhǔn)確性高。此外，DSCT不僅可觀察狹窄區(qū)域特征，而且可有效識(shí)別動(dòng)脈斑塊，很大程度上減少了誤診和漏診情況[21]。

目前，可用于診斷頸動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致腦卒中高?；颊叩目煽可飿?biāo)志物仍然缺乏。microRNAs(miRs)是短的內(nèi)源性非編碼RNA分子，也是與動(dòng)脈粥樣硬化和血小板激活相關(guān)的效應(yīng)因子[22,23]。大量實(shí)驗(yàn)和臨床研究揭示了患有和不患有動(dòng)脈粥樣硬化性疾病患者組織和血液中miRs的表達(dá)水平，某些miRs在動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理學(xué)以及動(dòng)脈粥樣硬化病變(例如頸動(dòng)脈)易損性中的作用已被確立[24,25]。例如，miRs可參與內(nèi)皮損傷和炎癥、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的分化和激活，但也參與新血管生成，這可能導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)出血并增加斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)[26]。最近研究表明，miRs不僅調(diào)節(jié)易損動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成[6]，而且某些血清miRs(如miR-221)具有作為頸動(dòng)脈斑塊破裂和腦卒中的診斷生物標(biāo)志物的潛力[7]。

據(jù)報(bào)道，大鼠局灶性腦缺血損傷后，缺血性腦卒中區(qū)miR-10b-3p表達(dá)水平顯著下調(diào)[8]。miR-10b-3p通過靶向程序性細(xì)胞死亡5(PDCD5)減輕大鼠腦缺血再灌注損傷[27]。miR-10b-3p過表達(dá)通過靶向Krüpel樣因子5(KLF5)減少缺血性腦卒中大鼠腦中的神經(jīng)功能缺損、梗死體積、腦含水量、炎癥因子表達(dá)和神經(jīng)元凋亡[28]。本研究表明，缺血性腦卒中患者的血清miR-10b-3p水平較健康人明顯降低，且隨著狹窄率的升高，血清miR-10b-3p水平呈逐漸降低的趨勢(shì)(P<0.05)。ROC曲線分析顯示，miR-10b-3p診斷50%頸動(dòng)脈狹窄的AUC為0.815，敏感性為76.56%，特異性為82.61%，具有較高的診斷效能。分析其原因，可能是miR-10b-3p參與了頸動(dòng)脈狹窄的病變過程，如某些miRs調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成[6]。miR-10b-3p通過靶向KLF5調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，miR-10b-3p的低表達(dá)促進(jìn)了動(dòng)脈脂質(zhì)沉積[9]。

頸動(dòng)脈斑塊與缺血性腦血管病的發(fā)生密切相關(guān)[29]，鈣化斑塊是缺血性腦卒中發(fā)生的主要原因之一，鈣化斑塊形成與多種因素引起的血管內(nèi)膜損傷有關(guān)，其中包括miRs[6]。DSCT中的CT值可有效反映斑塊特征[12]，本研究根據(jù)CT值大小分組，結(jié)果顯示，與軟斑塊組和纖維斑塊組比較，鈣化斑塊組患者的血清miR-10b-3p水平顯著降低，隨著CT值升高，miR-10b-3p水平呈降低趨勢(shì)，提示miR-10b-3p可能參與了鈣化斑塊的形成[9]。進(jìn)一步研究顯示，血清miR-10b-3p診斷鈣化斑塊的AUC為0.823，敏感性為80.7%，特異性為80.26%，具有較高的診斷價(jià)值，提示血清miR-10b-3p的檢測可能有助于預(yù)測患者斑塊形成的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上，DSCT診斷缺血性腦卒中患者頸動(dòng)脈狹窄的準(zhǔn)確性高，此外，血清miR-10b-3p水平與缺血性腦卒中患者頸動(dòng)脈狹窄程度、斑塊類型有密切關(guān)系，可作為DSCT檢查的輔助指標(biāo)。