能譜CT聯(lián)合長鏈非編碼RNA UCA1在診斷胃腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用

張 健， 任曉燕

1. 南通市海門區(qū)人民醫(yī)院疼痛科， 江蘇 南通 226113； 2. 南通大學(xué)附屬婦幼保健院病理科， 江蘇 南通 226007

胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，也是全球發(fā)病率最高的癌癥之一[1,2]。淋巴結(jié)是胃癌最重要的轉(zhuǎn)移途徑之一，也是胃癌患者重要的預(yù)后因素[3]。準(zhǔn)確的術(shù)前淋巴結(jié)狀態(tài)評估直接影響治療策略和手術(shù)方法。計算機(jī)斷層掃描(CT)以其空間分辨率高、掃描速度快、圖像質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點被廣泛應(yīng)用于胃癌的術(shù)前診斷[2,4]。然而，CT對淋巴結(jié)的評估主要取決于淋巴結(jié)的大小、形態(tài)和強(qiáng)化方式，準(zhǔn)確率中等[5]。能譜CT是一種基于高能和低能X線快速切換的成像設(shè)備，它可以產(chǎn)生多個單色圖像[6]。據(jù)報道，能譜CT參數(shù)動脈期標(biāo)準(zhǔn)化碘濃度值(NICAP)和靜脈期標(biāo)準(zhǔn)化碘濃度值(NICVP)可以評價并預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[7-9]，然而診斷準(zhǔn)確性仍有待提高。目前，血清標(biāo)志物在診斷胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面具有較高的準(zhǔn)確性。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一種參與細(xì)胞生長、代謝、分化等多種生命過程的非編碼RNA，由于lncRNA具有高度的特異性，以及在不同病理生理條件下的異常表達(dá)，可作為潛在的診斷或預(yù)測預(yù)后的生物標(biāo)志物，有文獻(xiàn)報道lncRNA可用于診斷胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[10-12]。尿路上皮癌相關(guān)基因1(UCA1)是一種在多種癌癥中高度表達(dá)且與患者預(yù)后相關(guān)的lncRNA[13]。據(jù)報道，UCA1通過miR-145/MYO6軸促進(jìn)胃癌的惡化[14]，UCA1通過招募EZH2和激活PI3K/AKT通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞順鉑耐藥[15]。本研究旨在考察能譜CT參數(shù)聯(lián)合UCA1診斷胃腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值，從而為胃腺癌的臨床治療和遠(yuǎn)期預(yù)后判斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集南通市海門區(qū)人民醫(yī)院2017年8月至2021年12月的103例胃腺癌患者為研究對象，本項前瞻性研究已獲得醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)，所有患者知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)內(nèi)鏡活檢證實為胃癌；CT檢查前未進(jìn)行局部或系統(tǒng)治療；患者均無對碘過敏或嚴(yán)重腎功能不全；擬進(jìn)行根治性切除術(shù)的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：非胃腺癌患者；最小腫瘤直徑<3 mm；臨床資料不完整或圖像質(zhì)量不佳。103例患者包括男性71例，女性32例；年齡40～78歲,平均年齡(60.92±13.34)歲，另選取30例健康人作為對照組，包括男性20例，女性10例；年齡41～75歲，平均年齡(61.43±11.05)歲。

1.2 方法

1.2.1能譜CT檢查

所有患者在CT檢查前禁食至少8 h，CT掃描前40 min所有患者攝取800～1000 mL水填充胃腔?；颊咴诿绹鳪E Healthcare Discovery CT750 HD寶石能譜CT上進(jìn)行仰臥位CT掃描，腳先進(jìn)。CT掃描范圍為膈頂至恥骨聯(lián)合上緣。平掃后，使用高壓注射器經(jīng)肘前靜脈留置針注射碘造影劑(Omnipaque 350 mgI/mL；美國GE Healthcare)，劑量為1.2 mL/kg，流速為3.0 mL/s，進(jìn)行多期增強(qiáng)掃描。動脈期、靜脈期和延遲期的延遲時間分別為35 s、70 s和5 min。動脈期的CT圖像通過光譜掃描模式獲得(管電壓80～140 kV瞬時切換，管電流640 mA，旋轉(zhuǎn)時間0.6 s)。在管電壓為120 kV、自動管電流為10～320 mA、噪聲指數(shù)(NI)為10、旋轉(zhuǎn)時間為0.6 s的情況下，獲得靜脈期和延遲期的CT圖像。其他掃描參數(shù)：切片厚度5 mm；切片間距5 mm；重建厚度0.625 mm；視野(FOV)35～40 cm；矩陣512×512；螺距1.375。要求患者每次掃描時屏住呼吸3～5 s。所有患者均順利完成CT掃描，無任何不適或過敏反應(yīng)。

掃描完畢后，在GE AW4.6工作站中利用GSI Viewer軟件獲取CT參數(shù)。首先選擇腫瘤最大橫斷層面勾畫感興趣區(qū)(ROI)，自動生成ROI范圍內(nèi)的動脈期碘濃度值(ICAP)和靜脈期碘濃度值(ICVP)，將同層腹主動脈的碘濃度(IC)作為標(biāo)準(zhǔn)參照值，將各期腫瘤IC與同層腹主動脈IC比值作為標(biāo)準(zhǔn)化碘濃度值(NIC)，然后獲得動脈期標(biāo)準(zhǔn)化碘濃度值(NICAP)和靜脈期標(biāo)準(zhǔn)化碘濃度值(NICVP)。

1.2.2血清UCA1的檢測

收集患者5 mL靜脈血，4 ℃、12000 r/min(離心半徑6.5 cm)離心15 min，將上清液保存在含有去RNA酶的EP管中。TRIzol試劑(批號：15596026，美國Invitrogen)提取血清總RNA。采用美國Thermo EvolutionNanoDrop 2000C超微量分光光度計檢測RNA濃度及純度。采用SYBR Premix Ex Taq RT-PCR試劑(批號：DRR420A)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。采用SYBR Premix ExTaqⅡ試劑(批號：HRR820A)在美國BioRad CFX96Touch實時熒光定量PCR系統(tǒng)上進(jìn)行擴(kuò)增，以U6為內(nèi)參。引物序列如下：UCA1：5′- CTCTCCATTGGGTTCACCATTC-3′(上游)和5′-GCGGCAGGTCTAAGAGATGAG-3′(下游)；U6：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′(上游)和5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′(下游)。用2-ΔΔCt方法計算血清UCA1的相對表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計分析

所有統(tǒng)計分析均使用SPSS 22.0進(jìn)行。Kolmogorov-Smirnov檢驗結(jié)果顯示所有定量數(shù)據(jù)均服從正態(tài)分布。采用兩獨立樣本t檢驗比較轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)與非轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的CT指標(biāo)和血清UCA1差異。采用單因素方差分析比較肺腺癌患者和健康人的血清UCA1差異。通過受試者操作特性(ROC)曲線檢驗各指標(biāo)的診斷效率。使用MedCalc 15.2.2軟件比較不同指標(biāo)對胃腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的診斷性能。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組患者的基線資料比較

轉(zhuǎn)移組54例患者，非轉(zhuǎn)移組49例患者。兩組患者的性別、年齡、Lauren分型比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；兩組患者腫瘤大小和分化程度比較，轉(zhuǎn)移組腫瘤更大，低分化比例更高(P<0.05)。見表1。

表1 胃腺癌患者的基線資料

2.2 轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組患者的NICAP和NICVP

轉(zhuǎn)移組患者的NICAP和NICVP均顯著高于非轉(zhuǎn)移組患者(P<0.001)。見表2。

表2 轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組患者的NICAP和NICVP比較

2.3 NICAP和NICVP對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值

以NICAP>0.132為截斷值，NICAP診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC、敏感性和特異性分別為0.742、68.52%和76.09%。以NICVP>0.431為截斷值，NICVP診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC、敏感性和特異性分別為0.932、85.19%和86.96%。NICAP+NICVP聯(lián)合診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC、敏感性和特異性分別為0.947、85.19%和89.13%。見圖1。

圖1 NICAP和NICVP單獨診斷(a和b)及聯(lián)合診斷(c)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的ROC曲線

2.4 UCA1在胃腺癌患者和健康人血清中的水平

將血清UCA1水平歸一化為健康對照組，計算UCA1相對表達(dá)量，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)移組、非轉(zhuǎn)移組和健康對照組的血清UCA1相對表達(dá)量分別為2.74±0.63、1.84±0.38和1.00±0.20，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=131.931，P<0.001)。轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組患者的血清UCA1相對表達(dá)量均顯著高于對照組(P<0.001)。此外，轉(zhuǎn)移組的血清UCA1相對表達(dá)量顯著高于非轉(zhuǎn)移組的(P<0.001)。

2.5 血清UCA1對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值

以血清UCA1相對表達(dá)量>2.071為截斷值，血清UCA1診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC、敏感性和特異性分別為0.884、87.04%和82.61%。見圖2。

2.6 NICAP和NICVP聯(lián)合UCA1對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值

以NICAP+NICVP+UCA1>0.606為截斷值，NICAP+NICVP+UCA1聯(lián)合診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC、敏感性和特異性分別為0.985、94.44%和100.00%。見圖3。

3 討論

胃腺癌占所有胃癌的95%[16]。胃腺癌的發(fā)病率和死亡率均居我國所有消化道惡性腫瘤之首[17]，進(jìn)展期胃癌患者的平均生存期不到1年，對人類健康構(gòu)成了極大的威脅[18]。因此，提倡早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，從而提高胃癌患者的臨床轉(zhuǎn)歸和生活質(zhì)量。本研究納入了54例胃腺癌轉(zhuǎn)移患者和49例非轉(zhuǎn)移患者，轉(zhuǎn)移患者的腫瘤更大，低分化比例更高。其他文獻(xiàn)報道，腫瘤大小、分化程度是胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響因素[19]。

臨床上，術(shù)前內(nèi)鏡活檢是診斷胃癌的金標(biāo)準(zhǔn)。然而，內(nèi)鏡活檢是一種侵入性檢查，可能存在取樣偏差[20]。與有創(chuàng)內(nèi)鏡活檢相比，術(shù)前影像技術(shù)具有非侵入性、可有效診斷遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等優(yōu)點。常規(guī)增強(qiáng)CT成像與內(nèi)窺鏡相結(jié)合是診斷胃癌患者胃壁侵犯的有效方法[21]。然而，這項技術(shù)僅依賴于形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，缺乏定量分析的參數(shù)。能譜CT提供了物質(zhì)分解圖像，可以定量繪制組織增強(qiáng)圖像中的碘濃度(IC)。已有文獻(xiàn)報道了IC值在鑒別良惡性病變,評估腫瘤、淋巴結(jié)和轉(zhuǎn)移(TNM)分期方面的應(yīng)用[22]。其他文獻(xiàn)指出，能譜CT的IC值，尤其是標(biāo)準(zhǔn)化碘基值(nIC)值，在判斷腫瘤分化程度方面具有優(yōu)勢[23]。本研究結(jié)果表明轉(zhuǎn)移患者的NICAP和NICVP均顯著高于非轉(zhuǎn)移患者，提示NICAP和NICVP較高時可能出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步分析顯示，NICAP診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC、敏感性和特異性較低，分別為0.742、68.52%和76.09%，王睿等[8]報道的這三項參數(shù)分別為0.695、58.54%和75.86%，與本文結(jié)果基本一致。然而，NICVP診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC、敏感性和特異性較高，分別為0.932、85.19%和86.96%，均高于王睿等[8]報道的0.849、74.80%和82.76%。分析其原因，NICVP與微血管密度的相關(guān)性較動脈期更密切，因此更能區(qū)分腫瘤特性[24]。另外，本研究考察了NICAP+NICVP的聯(lián)合診斷價值，AUC、敏感性和特異性分別為0.947、85.19%和89.13%，三項指標(biāo)均高于或等于單獨診斷。因此，NICAP和NICVP的聯(lián)合診斷可有效提高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷準(zhǔn)確性。

lncRNA是長度超過200個核苷酸的轉(zhuǎn)錄本，類似于mRNA，但它們不翻譯成蛋白質(zhì)[25]。與microRNA不同，lncRNA的長度允許它們形成復(fù)雜的二級和三級結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)在細(xì)胞功能中發(fā)揮特殊作用[26]。越來越多的證據(jù)表明，lncRNA作為基因表達(dá)中的調(diào)節(jié)分子，直接涉及各種人類疾病，尤其是多種癌癥的發(fā)展過程中的功能。幾種lncRNA可以作為癌基因或腫瘤抑制因子直接參與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[10,25,27]。目前，多項文獻(xiàn)報道UCA1參與多種癌癥的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，UCA1高表達(dá)的癌癥患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險增加[28-30]，本研究同樣發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移組患者的血清UCA1相對表達(dá)量顯著高于非轉(zhuǎn)移組，此外，血清UCA1診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC、敏感性和特異性分別為0.884、87.04%和82.61%，提示血清UCA1可能是胃腺癌患者轉(zhuǎn)移與否的預(yù)測指標(biāo)。其原因可能是UCA1在胃癌轉(zhuǎn)移過程中通過海綿調(diào)節(jié)軸調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)，例如lncRNA UCA1通過誘導(dǎo)胃癌中的miR-203/ZEB2軸促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[31]。本研究還考察了NICAP、NICVP聯(lián)合UCA1對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值，聯(lián)合診斷的AUC、敏感性和特異性分別為0.985、94.44%和100.00%，均高于單獨診斷。這些結(jié)果提示NICAP和NICVP聯(lián)合UCA1可能是診斷胃癌轉(zhuǎn)移的一項有效措施。然而，本研究納入的研究對象相對較好，還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量來驗證本研究結(jié)論。

綜上所述，本研究表明能譜CT參數(shù)(NICAP和NICVP)聯(lián)合血清UCA1在診斷胃腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面具有較高價值，具有較好的臨床推廣潛力。