武漢地區(qū)漢族T2DM患者PPARγ2基因多態(tài)性與高脂血癥易感性的相關(guān)性研究*

盛 碧，夏 晶，安 靖，王 雄，吳金虎，陳永剛，孟軍華，陳 靈

武漢市第三醫(yī)院藥學(xué)部，湖北武漢 430060

2型糖尿病(T2DM)是以高血糖和脂類代謝紊亂為主要特征的復(fù)雜性疾病[1]。血脂水平升高會加重T2DM患者血管內(nèi)皮細胞功能的損傷而導(dǎo)致動脈粥樣硬化，高血脂水平是T2DM患者發(fā)生心腦血管疾病的重要危險因素[2-3]。因此，多角度分析與T2DM患者糖脂代謝的相關(guān)因素，以期發(fā)現(xiàn)潛在的治療靶點尤為重要。

過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)是核激素受體家族中的配體激活受體，具有PPARγ1，PPARγ2和PPARγ3三種亞型，其中PPARγ2亞型參與脂肪細胞分化，對脂質(zhì)代謝有重要影響[4]。rs1801282位點是PPARγ2基因最常見發(fā)生突變的位點，PPARγ2外顯子B密碼子12中脯氨酸(CCA)發(fā)生丙氨酸(GCA)突變導(dǎo)致了rs1801282位點多態(tài)性[5]。目前，國內(nèi)外關(guān)于PPARγ2基因rs1801282位點多態(tài)性與脂代謝紊亂之間的相關(guān)性仍不確定[6]。本研究旨在研究武漢地區(qū)漢族T2DM患者PPARγ2基因多態(tài)性，探討PPARγ2基因多態(tài)性與該類人群發(fā)生高脂血癥的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究為回顧性分析。選取2018年1月至2019年6月在武漢市第三醫(yī)院行PPARγ2基因檢測且無血緣關(guān)系的漢族T2DM患者為研究對象。通過醫(yī)院臨床藥學(xué)美康信息管理系統(tǒng)和醫(yī)院信息管理系統(tǒng)查閱電子病歷，收集患者的臨床資料，包括年齡、性別及總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、尿酸、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、糖化血紅蛋白(HbA1c)水平。納入標準：T2DM診斷均符合1999年世界衛(wèi)生組織修訂的糖尿病診斷及分型標準；高脂血癥診斷標準符合《中國成人血脂異常防治指南(2016修訂版)》，即TC≥6.2 mmol/L和(或)TG≥2.3 mmol/L。排除標準：嚴重心腦血管疾病、免疫性疾病、惡性腫瘤患者；妊娠期或哺乳期患者；嚴重肝、腎功能障礙患者。符合納入、排除標準的患者共122例，根據(jù)是否并發(fā)高脂血癥將患者分為兩組，其中57例T2DM并發(fā)高脂血癥患者作為研究組，65例T2DM患者作為對照組。所有患者均簽署知情同意書。

1.2方法 采用熒光染色原位雜交技術(shù)檢測PPARγ2基因rs1801282位點多態(tài)性，具體方法：取200 μL患者外周靜脈血，加入1 mL氯化銨(北京華夏時代基因科技發(fā)展有限公司)，用于裂解紅細胞，混勻后靜置5 min，將混合液3 000 r/min離心5 min，得到沉淀在離心管底部的白細胞。將白細胞沉淀用紅細胞裂解液沖洗2～3次，去除上清液后加入30 μL核酸純化試劑(北京華夏時代基因科技發(fā)展有限公司)混勻。根據(jù)檢測的目的基因，取1.5 μL待測白細胞標本加入至相對應(yīng)的測序反應(yīng)試劑(北京華夏時代基因科技發(fā)展有限公司)管中，混勻后上機檢測(TL998A熒光檢測儀，西安天隆科技有限公司)并進行結(jié)果判讀。

2 結(jié) 果

2.1PPARγ2基因rs1801282位點基因型及等位基因檢測結(jié)果 PPARγ2(rs1801282)基因型包含野生型CC及突變型CG、GG。122例T2DM患者中，CC型107例(87.7%)，CG型15例(12.3%)，未檢出GG型。C、G等位基因的頻率分別為93.9%(229/244)和6.1%(15/244)。122例T2DM患者CC型、CG型、GG型基因型理論例數(shù)分別為107.6、14、0.4例，PPARγ2基因rs1801282位點基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P>0.05)。

2.2兩組一般資料及PPARγ2基因rs1801282位點基因型比較 研究組TC、TG、LDL、HbA1c水平高于對照組，HDL水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；兩組性別構(gòu)成、年齡，ALT、AST、尿酸水平，以及PPARγ2基因rs1801282位點基因型比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料及PPARγ2基因型比較

2.3不同PPARγ2基因rs1801282位點基因型T2DM患者血脂水平比較 CC型與CG型T2DM患者的TC、TG、HDL、LDL水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同PPARγ2基因rs1801282位點基因型T2DM患者血脂水平比較

2.4T2DM患者并發(fā)高脂血癥相關(guān)危險因素的Logistic回歸模型分析 將T2DM患者是否并發(fā)高脂血癥作為因變量，將表1中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標TC、TG、HDL、LDL、HbA1c作為自變量建立Logistic回歸模型。因研究組與對照組尿酸水平比較的P值近似0.05，故將尿酸作為自變量納入分析；同時為了驗證rs1801282位點基因型對T2DM患者并發(fā)高脂血癥有無影響，也將rs1801282位點基因型作為自變量納入分析，分析結(jié)果顯示，TG、尿酸可能是T2DM并發(fā)高脂血癥的獨立危險因素[OR=8.250(95%CI:2.801～24.304)、1.008(95%CI:1.001～1.015)，P<0.05]。見表3。

表3 T2DM患者并發(fā)高脂血癥相危險關(guān)因素的Logistic回歸模型分析

組別nTG(x±s,mmol/L)HDL(x±s,mmol/L)LDL(x±s,mmol/L)HbA1c(x±s,%)CC型(n)CG型(n)研究組572.6±1.31.2±0.23.0±0.98.7±2.0507對照組651.3±0.51.3±0.32.4±0.77.9±2.0578χ2/t/Z 7.461-2.134 4.1352.2040.000P<0.001 0.035<0.0010.0291.000

2.5不同地區(qū)PPARγ2基因rs1801282位點基因多態(tài)性 檢索美國國家生物技術(shù)信息中心單核苷酸多態(tài)性(SNP)數(shù)據(jù)庫，結(jié)果顯示，歐洲人群PPARγ2基因rs1801282位點等位基因C、G的分布頻率為88.7%、11.3%，非洲人群為98.6%、1.4%，亞洲人群為96.0%、4.0%。武漢地區(qū)T2DM患者等位基因C、G的分布頻率為93.9%、6.1%,大致符合亞洲人群等位基因C、G的分布頻率，但等位基因C分布頻率高于歐洲人群，低于非洲人群，等位基因G分布頻率低于歐洲人群，高于非洲人群。歐洲人群發(fā)生突變的等位基因G的分布頻率為11.3%，高于亞洲人群和非洲人群的1.4%、4.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

PPARγ在脂質(zhì)代謝、葡萄糖穩(wěn)態(tài)、胰島素敏感性和炎癥途徑中起著重要作用，人類PPARγ基因位于3p25染色體上，具有9個外顯子，其蛋白質(zhì)產(chǎn)物具有3種亞型，即PPARγ1，PPARγ2和PPARγ3，其中PPARγ2在脂肪細胞中高度表達，其調(diào)控脂肪細胞增殖及TG穩(wěn)態(tài)等過程，是關(guān)鍵的脂肪選擇性PPAR亞型[7-9]。

本課題組對122例武漢地區(qū)T2DM患者PPARγ2基因rs1801282位點多態(tài)性進行了研究，結(jié)果顯示，武漢地區(qū)T2DM患者中，主要基因型為野生型CC(87.7%)、突變雜合型CG(12.3%)，未發(fā)現(xiàn)突變純合型GG；PPARγ2基因rs1801282位點基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P>0.05)，表明該樣本具有群體代表性；與其他地區(qū)人群比較顯示，本研究中的T2DM患者等位基因C、G分布頻率符合亞洲人群分布頻率，但與非洲、歐洲人群分布頻率存在一定差異，突變基因G在歐洲人群的分布頻率要高于亞洲人群和非洲人群(P<0.05)，提示相對于亞洲和非洲人群，歐洲人群可能更易發(fā)生rs1801282位點突變。

本研究結(jié)果顯示，T2DM患者及T2DM并發(fā)高脂血癥組患者PPARγ2基因rs1801282位點基因型比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；CC型與CG型T2DM患者的TC、TG、HDL、LDL水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Logistic回歸模型分析結(jié)果顯示，PPARγ2基因rs1801282位點基因型不是T2DM患者并發(fā)高脂血癥的獨立危險因素，提示武漢地區(qū)PPARγ2基因rs1801282位點SNP可能與T2DM患者并發(fā)高脂血癥易感性無明顯關(guān)系。此前，亦有rs1801282位點基因多態(tài)性與血脂相關(guān)性報道，但結(jié)論不一。李秀麗等[10]報道PPARγ2基因rs1801282位點基因多態(tài)性與西北地區(qū)漢族T2DM及其一級親屬血脂水平具有相關(guān)性；另有報道稱PPARγ基因rs1801282位點基因中CG基因型攜帶者比CC、GG基因型更易患高TG血癥[11]；CARRILLO-VENIOR等[12]對PPARγ2基因多態(tài)性與血清脂質(zhì)水平等常規(guī)生化指標進行分析，發(fā)現(xiàn)PPARγ2基因多態(tài)性與總研究人群的HDL之間存在關(guān)聯(lián)，但對族群進行調(diào)整后，這種關(guān)聯(lián)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。多個報道的研究結(jié)果不一致可能與樣本量、患者標本的選擇、種族、地域有關(guān)。在本研究中，雖然Logistic回歸模型分析結(jié)果顯示，尿酸可能是T2DM患者并發(fā)高脂血癥的獨立危險因素，但OR為1.008(95%CI:1.001～1.015)，已近乎為1，說明尿酸對T2DM患者高脂血癥的發(fā)生幾乎沒有影響或影響很小，這與其他關(guān)于尿酸水平與糖尿病風(fēng)險及血脂異常之間相關(guān)性仍不確定的結(jié)論基本一致[13-15]。本研究為回顧性分析且樣本量較小，存在一定的局限性，統(tǒng)計結(jié)果可能存在偏倚，后續(xù)需進一步擴大臨床樣本量研究。

綜上所述，武漢地區(qū)漢族T2DM患者PPARγ2基因rs1801282位點基因多態(tài)性與T2DM患者并發(fā)高脂血癥無關(guān)。