腸道病毒71型疫苗研究進(jìn)展

董成威

賀州市疾病預(yù)防控制中心 廣西 賀州 542899

手足口?。╤and, foot, and mouth disease，HFMD）作為兒童常見(jiàn)一類傳染性疾病，特征表現(xiàn)為發(fā)熱﹑口腔后部多發(fā)潰瘍及手﹑足底﹑臀部丘疹或皰疹，對(duì)部分病情危重患兒而言，甚至?xí)馃o(wú)菌性腦膜炎﹑急性弛緩性癱瘓﹑腦干腦炎﹑肺水腫等嚴(yán)重并發(fā)癥。HFMD傳染性較強(qiáng)，可通過(guò)糞-口途徑﹑直接接觸﹑間接接觸及呼吸道飛沫等途徑傳播[1]。HFMD多見(jiàn)于5歲以下兒童，全面均可發(fā)生，且疾病呈現(xiàn)明顯季節(jié)分布，每年4～8月份﹑9～12月份亞太地區(qū)為HFMD流行高峰時(shí)期。HFMD作為腸道病毒，歸屬為小RNA病毒科腸道病毒屬，包括柯薩奇病毒A組的4﹑5﹑6﹑7﹑9﹑10﹑16型及B組的1﹑2﹑3﹑5型，?？刹《静糠盅逍桐p腸道病毒71型（EV71）等。腸道病毒71型具有嗜神經(jīng)毒性，極易引起嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，作為重癥HFMD發(fā)生主要病原[2]。隨著近些年來(lái)國(guó)家對(duì)HFMD相關(guān)重視程度上升，有關(guān)防治手段不斷完善，且針對(duì)腸道病毒71型等病毒有相關(guān)疫苗研制及應(yīng)用，取得顯著成效。文章就腸道病毒71型疫苗應(yīng)用情況如下分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.EV71病毒

1969年首次在加利福尼亞患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病嬰兒糞便中分離出EV71病毒。至20世紀(jì)90年代后，EV71并廣泛在亞洲地區(qū)流行，并在馬來(lái)西亞﹑新加坡等地區(qū)大規(guī)模爆發(fā)流行?；純褐饕憩F(xiàn)癥狀輕微，僅表現(xiàn)出皮疹﹑皰疹性咽峽炎，預(yù)后良好[3]。對(duì)部分患兒而言，會(huì)合并重癥感染，如無(wú)菌性腦膜炎﹑腦干腦炎及脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹﹑神經(jīng)源性肺水腫等多種與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)嚴(yán)重并發(fā)癥，極少數(shù)病例不出現(xiàn)皮疹等手足口病典型癥狀，但由于病情兇險(xiǎn)，進(jìn)展快，臨床致殘率﹑致死率偏高。調(diào)查結(jié)果顯示，582例手足口病病例中腸道病毒陽(yáng)性患者389例，其中EV71型占比為30.59%，柯薩奇病毒A16占比21.34%，其他腸道病毒感染占比48.07%[4]。對(duì)蘇州市2017～2018年手足口病病理標(biāo)本1377份分析，2017年重癥病例發(fā)生與EV71相關(guān)，占比重癥病例綜述67.05%，2018年重癥病例與EV71﹑CA6相關(guān)，占據(jù)重癥病例總數(shù)22.72%﹑20.45%。EV71作為單股正鏈無(wú)囊膜小RNA病毒，病毒顆粒為二十面立體對(duì)稱球形結(jié)構(gòu)，直徑維持在24～30nm[5]。病毒離子衣殼為60個(gè)亞單位構(gòu)成，每個(gè)亞單位又由4種衣殼蛋白拼裝成五聚體樣結(jié)構(gòu)，基因組編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白﹑7種非結(jié)構(gòu)蛋白。

2.EV71疫苗

2.1 滅活全病毒疫苗

理化方法處理人工大量培養(yǎng)的完整病毒，喪失感染性毒性以保持免疫原性，與相應(yīng)佐劑聯(lián)合所制成疫苗。迄今為止，中國(guó)大陸﹑中國(guó)臺(tái)灣及新加坡開發(fā)出完整滅活病毒EV-A71疫苗。2010年～2011年科興生物技術(shù)有限公司﹑微谷生物技術(shù)有限公司和中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所完成對(duì)滅活全病毒EVA71疫苗I期臨床試驗(yàn)，并在2013年完成III期臨床試驗(yàn)，2015年正式投入使用[6]。上述三個(gè)單位應(yīng)用不同病毒株所開發(fā)疫苗分別為：H07菌株﹑FY7VP5菌株﹑FY-23菌株，均屬于EV-A71 C4亞型，為中國(guó)常見(jiàn)EV-A71 A亞型。科興生物技術(shù)有限公司III期臨床試驗(yàn)中納入10077名6～35月齡嬰幼兒，隨機(jī)接受400U滅活EV-A 71全病毒疫苗﹑安慰劑，第一年監(jiān)測(cè)中，EV-A71相關(guān)HFMD或皰疹咽峽炎保護(hù)率為94.8%，而EV-A 71相關(guān)住院﹑神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥保護(hù)率為100%[7]。第二年對(duì)9595名嬰幼兒繼續(xù)隨訪，EV-A 71相關(guān)疾病保護(hù)率為95.1%，兩年總體保護(hù)率為94.7%，同時(shí)疫苗可針對(duì)EV-A71意外基因型產(chǎn)生交叉免疫，但對(duì)于CV-A 16等其他腸病毒相關(guān)的HFMD保護(hù)率僅為6.8%，不具備交叉保護(hù)能力[8]。

2.2 減毒活疫苗

減毒活疫苗免疫原性較強(qiáng)，對(duì)其原理分析上，可有效減弱病原體本身毒性并保留免疫原性。隨著近些年來(lái)減毒活疫苗成為研究熱點(diǎn)。但世界范圍內(nèi)成功開發(fā)減毒活疫苗包括甲型肝炎﹑輪狀病毒及脊髓灰質(zhì)炎等。當(dāng)前對(duì)EV71所致手足口病，減毒活疫苗中比較成功為 EV71(S1-3′)，主要是對(duì)食蟹猴模型開展靜脈接種 EV71(S1-3′)，2～3周后食蟹猴機(jī)體內(nèi)抗體滴度維持在1:2048，進(jìn)一步得出，減毒活性毒株 EV71(S1-3′)對(duì)同種和不同基因型EV71病毒株具有中和作用，且對(duì)同種基因型效果跟我給顯著，但食蟹猴接種后，會(huì)產(chǎn)生震顫輕微中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害[9]。當(dāng)前應(yīng)用減毒活疫苗可有效刺激機(jī)體，并產(chǎn)生較強(qiáng)保護(hù)作用，但仍需進(jìn)一步深入研究及分析，保證疫苗整體安全性，降低或杜絕疫苗所致神經(jīng)系統(tǒng)損害風(fēng)險(xiǎn)。

2.3 DNA疫苗

DNA疫苗通過(guò)將編碼特異性抗原基因片段構(gòu)建至含有表達(dá)調(diào)控元件的DNA質(zhì)粒中，并直接遞送至機(jī)體內(nèi)，并促使外源性抗原基因在機(jī)體內(nèi)表達(dá)，可誘導(dǎo)機(jī)體所產(chǎn)生特異的細(xì)胞免疫﹑特體免疫應(yīng)答，發(fā)揮治療﹑預(yù)防疾病目的，當(dāng)前DNA疫苗被廣泛用于多種感染性疾病﹑慢性疾病及惡性腫瘤動(dòng)物模型中[10]。相比較傳統(tǒng)疫苗，DNA疫苗特點(diǎn)為免疫效果顯著，免疫應(yīng)答持久，價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)。但DNA疫苗也存在缺陷，如外源性DNA進(jìn)入機(jī)體后，是否會(huì)導(dǎo)致癌基因激活﹑抑癌基因失活，DNA疫苗長(zhǎng)期在機(jī)體內(nèi)表達(dá)，是否會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受并造成機(jī)體免疫力低下，上述問(wèn)題均是疫苗制備過(guò)程中需要注意問(wèn)題，當(dāng)前考慮是否添加佐劑﹑改變接種途徑等方式提高保護(hù)作用。

2.4 病毒樣顆粒疫苗（VLP）

VLP為病毒單一﹑多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白自行裝配而成高度結(jié)構(gòu)化蛋白質(zhì)顆粒，相比較天然病毒顆粒，在形態(tài)特征﹑抗原性上相似，可有效繼發(fā)宿主免疫反應(yīng)能力。VLP疫苗中不含有病毒基因組，不具備自發(fā)復(fù)制感染，作為候選疫苗構(gòu)建安全選擇?；谥苽浼顾杌屹|(zhì)炎病毒VLP經(jīng)驗(yàn)，構(gòu)建昆蟲細(xì)胞-桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，制備EV-A71 B5亞型VLP疫苗[11]。疫苗誘導(dǎo)恒河猴產(chǎn)生較高水平EV-A71不同亞型特異性病毒抗體，進(jìn)一步阻止EV-A71傳播。同時(shí)，酵母中同樣可產(chǎn)生EV-A71 VLP，應(yīng)用畢赤酵母表達(dá)EV-A71 VLP可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生同源﹑異源EV-A71株的中和抗體，經(jīng)母體免疫保護(hù)新生小鼠免受EV-A71供給。當(dāng)前，EV-A71 VLP下具有顯著保護(hù)效果，安全性高，抑郁制備，為優(yōu)質(zhì)的EV-A71候選疫苗，但疫苗生產(chǎn)成本偏高，產(chǎn)量相對(duì)偏低，仍需進(jìn)一步改進(jìn)[12]。

3.小結(jié)

EV71會(huì)引起手足口病，且作為手足口病產(chǎn)生常見(jiàn)病原株，并產(chǎn)生嚴(yán)重中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，危害兒童生命健康，成為當(dāng)前嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。當(dāng)前有關(guān)EV71抗病毒藥物相關(guān)研究均為達(dá)到臨床試驗(yàn)階段，為此，當(dāng)前有關(guān)EV71防治多采取疫苗干預(yù)。自2015年上市了EV71滅活疫苗后，可顯著降低手足口病患病率，但當(dāng)前有關(guān)EV71所引起重癥手足口病防控依然不能放松。因此，一方面需遵照衛(wèi)生部門防控要求保護(hù)易感人群，降低患病率，并按照規(guī)程積極配合有效救治活動(dòng)，以控制重癥率﹑死亡率。同時(shí)，應(yīng)當(dāng)加快EV71相關(guān)機(jī)制研究工作，包括EV71致病機(jī)制﹑阻斷病毒體內(nèi)增殖藥物靶點(diǎn)研究﹑相關(guān)藥物開發(fā)﹑新疫苗開發(fā)研究等。