葉黃素軟膠囊緩解視疲勞功能研究

張 雪，程 倩，欒金玲，董運(yùn)海，張海波*

（1.酵母功能湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北宜昌 443003；2.安琪紐特股份有限公司，湖北宜昌 443000）

視疲勞是以患者眼的自覺(jué)癥狀為基礎(chǔ)，眼或全身器質(zhì)性因素與心理因素相互交織的綜合征，現(xiàn)已成為干擾和危害人們身心健康的慢性疾病[1-2]。隨著社會(huì)的進(jìn)步與發(fā)展，工作競(jìng)爭(zhēng)加劇，人們長(zhǎng)期過(guò)度用眼、疲勞用眼，導(dǎo)致視疲勞的發(fā)生率逐年上升，有關(guān)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)有約1.5億以上視疲勞患者[3]。

葉黃素是含紫羅銅環(huán)的二羥基類胡蘿卜素，具有抗氧化、抗炎和抗血管生成的特性[4-5]。葉黃素在人類健康中的作用，特別是在視力健康中的作用，已通過(guò)流行病學(xué)、臨床干預(yù)研究得到了很好的證實(shí)[6-7]。WALCHUK等[8]研究發(fā)現(xiàn)食用富含葉黃素和DHA的雞蛋可改善健康老年人的視網(wǎng)膜功能。劉霽等[9]應(yīng)用葉黃素酯開(kāi)展人體試食試驗(yàn)證實(shí)每日食用10 mg葉黃素酯對(duì)視力易疲勞者安全且有效。

藍(lán)莓學(xué)名越橘，果實(shí)中含有多種藥效成分[10]，其中花青素應(yīng)用較廣泛，具有改善視力[11]、抗氧化[12]、清除自由基、降血壓[13]、調(diào)節(jié)代謝[14]等功效。周小娟[15]研究越橘花青素對(duì)豚鼠形覺(jué)剝奪性近視的防治作用中發(fā)現(xiàn)口服越橘花青素可抑制豚鼠形覺(jué)剝奪性近視的眼軸增長(zhǎng)，具有防治近視作用。程強(qiáng)[16]證實(shí)花青素類提取物對(duì)大鼠視網(wǎng)膜光損傷有一定的預(yù)防保護(hù)作用，且灌胃給藥方式比滴眼給藥方式見(jiàn)效快。目前花青素已成為臨床眼科藥物的主要活性成分，用于治療糖尿病及高血壓性視網(wǎng)膜病變[17]。

β-胡蘿卜素具有與維生素A相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，能在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為維生素A，有補(bǔ)肝明目的作用，可治療夜盲癥[18-20]。袁克敏等[21]在研究4種功效物質(zhì)（茶氨酸、γ-氨基丁酸、β-胡蘿卜素和葡萄籽提取物）對(duì)視疲勞的緩解作用中證實(shí)，食用含β-胡蘿卜素的巧克力糖果可以有效提高受試者視力，緩解其視疲勞癥狀。蔡曉湛等[22]研究顯示血清中β-胡蘿卜素水平低者其白內(nèi)障的發(fā)病率高于血清中β-胡蘿卜素高者。

視疲勞的發(fā)病率逐年上升，而緩解視疲勞的藥物都存在一定的問(wèn)題。葉黃素、花青素、β-胡蘿卜素是人體無(wú)法合成的天然化學(xué)物，必須通過(guò)膳食補(bǔ)充獲得[23]，葉黃素有顯著的改善視疲勞功能。β-胡蘿卜素被人體吸收后，可以貯存在肝臟中，根據(jù)人體需要轉(zhuǎn)化為維生素A，不會(huì)因過(guò)量的維生素A而產(chǎn)生毒性。藍(lán)莓提取物中含有大量花青素，在緩解視疲勞的同時(shí)可以清除體內(nèi)自由基，調(diào)節(jié)代謝。該天然物質(zhì)配方可以極大地減輕藥物的副作用。因此，開(kāi)發(fā)由葉黃素酯、藍(lán)莓提取物、β-胡蘿卜素3種功效成分復(fù)配的保健食品具有重要意義。

本研究根據(jù)《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評(píng)價(jià)方法等9個(gè)保健功能評(píng)價(jià)方法的通知》（國(guó)食藥監(jiān)?；痆2012]107號(hào)）中緩解視疲勞功能判定標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)葉黃素軟膠囊進(jìn)行了為期60 d的人體試食試驗(yàn)的效果觀察，旨在為以上原料在緩解視疲勞產(chǎn)品中的適用性和使用方法提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

葉黃素軟膠囊，主要原料有藍(lán)莓提取物、葉黃素酯、天然β-胡蘿卜素，每100 g樣品中含葉黃素0.38 g、花青素2.50 g、β-胡蘿卜素0.75 g，規(guī)格為0.8 g/?！?0粒/瓶，人體推薦量為每日1次，每次1粒，口服。血細(xì)胞分析稀釋液，日本希森美康（批號(hào)：G7159）；尿試紙條，優(yōu)利特（批號(hào)：G80416257）；生化試劑盒。

1.2 儀器與設(shè)備

全自動(dòng)血液分析儀URIT-5250（桂林優(yōu)利特）；心電圖儀ECG-1350P（日本光電）；全自動(dòng)生化分析儀Viva-proE（西門子）；尿液分析儀Uritest-500B（桂林優(yōu)利特）；X光機(jī)RE2100（RAYON）；B超診斷儀PREIRUS（二郎神，日立）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 受試對(duì)象

人群：成人，18～65歲，長(zhǎng)期用眼，視力易疲勞者。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有感染性、外傷性眼部疾病患者，進(jìn)行眼部手術(shù)不足3個(gè)月者；患有角膜、晶體、玻璃體、眼底病變等內(nèi)外眼疾患者；患有心血管、腦血管、肝、腎、造血系統(tǒng)等疾病者；妊娠或哺乳期婦女、過(guò)敏體質(zhì)患者；短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的藥物、保健品，影響到對(duì)結(jié)果的判定者；長(zhǎng)期服用有關(guān)治療視力的藥物、保健品或使用其他治療方法未能終止者；不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定食用受試物者，或資料不全等影響功效或安全性判斷者。

1.3.2 試驗(yàn)分組及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將106例受試者按隨機(jī)雙盲法平均分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組53例，分組時(shí)考慮年齡、性別等，以保證組間的可比性。采用自身和組間兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。分組時(shí)根據(jù)眼部疲勞癥狀及視力檢查情況，使試驗(yàn)組和對(duì)照組的癥狀及視力水平均衡。試驗(yàn)組服用試驗(yàn)樣品，對(duì)照組服用安慰劑，連續(xù)服用60 d，試驗(yàn)期間不改變?cè)瓉?lái)的生活狀態(tài)及飲食習(xí)慣。

1.3.3 安全性觀察

血、尿常規(guī)檢查：白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)等。肝、腎功能及血糖檢查：血清白蛋白（Serum Albumin，ALB）、總蛋白（Total Protein，TP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alaninetransaminase，ALT）等。腹部B超，心電圖，X線胸部透視（僅在試驗(yàn)開(kāi)始前做一次）。

1.3.4 功效性觀察（試驗(yàn)開(kāi)始及結(jié)束時(shí)檢查）

問(wèn)卷調(diào)查：癥狀詢問(wèn)、用眼情況。眼科檢查：包括眼底檢查、視力檢查（近視、遠(yuǎn)視、散光等）。明視持久度。

1.3.5 功效判定標(biāo)準(zhǔn)

（1）癥狀改善有效率。眼酸痛、眼脹、畏光、視物模糊、眼干澀、異物感、流淚和全身不適，8種癥狀中有3種改善，且其他癥狀無(wú)惡化即判定癥狀改善，計(jì)算兩組癥狀改善例數(shù)和兩組癥狀改善有效率，癥狀改善有效率（%）計(jì)算方法為癥狀改善例數(shù)/試食例數(shù)×100%。將兩組癥狀改善有效率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)[24]。

（2）癥狀平均積分。計(jì)算每位試食者試驗(yàn)前后的癥狀積分，分別計(jì)算兩組的平均積分值，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，見(jiàn)表1。

表1 視疲勞癥狀判定方法（半定量積分法）

（3）視力改善率。統(tǒng)計(jì)兩組服用受試物后的視力改善率作為參考指標(biāo)。參考指標(biāo)不作為對(duì)緩解視疲勞功能是否有效的判定標(biāo)準(zhǔn)[24]。

（4）明視持久度。試驗(yàn)組自身比較或試驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較，明視持久度有顯著性差異（P＜0.05）且平均明視持久度提高≥10%為有效[24]。

1.3.6 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，凡自身對(duì)照資料采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料可用χ2檢驗(yàn)。

1.3.7 結(jié)果判定

①試驗(yàn)組自身比較或試驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較，癥狀改善有效率或癥狀總積分有顯著性差異（P＜0.05）。②試驗(yàn)組自身比較或試驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較，明視持久度有顯著性差異（P＜0.05），且平均明視持久度提高≥10%。具備①及②且視力改善率未明顯降低，可判定受試物具有緩解視疲勞功能的作用[24]。

2 結(jié)果與分析

2.1 病例脫失率

試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)組1人、對(duì)照組1人因間斷服用受試品被篩除，最后有效例數(shù)104例，試驗(yàn)組52例，對(duì)照組52例，脫失率為1.89%。

2.2 試驗(yàn)前一般資料的比較

試驗(yàn)前對(duì)試驗(yàn)組與對(duì)照組的一般資料進(jìn)行比較，兩組人群的年齡、性別均無(wú)顯著差異（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 試驗(yàn)前一般資料比較

2.3 安全性指標(biāo)觀察結(jié)果

試驗(yàn)期間兩組受試人員的精神、飲食、睡眠、大小便情況等均未見(jiàn)異常。試驗(yàn)前受試人員心率、心電圖、血壓、腹部B超檢查和X線胸部透視等數(shù)據(jù)均在正常范圍。試驗(yàn)前后尿常規(guī)檢查、血常規(guī)和血生化指標(biāo)結(jié)果也處于正常范圍，見(jiàn)表3。這與其他學(xué)者研究結(jié)果一致，如武峰等[25]研究發(fā)現(xiàn)口服葉黃素微粒制劑安全性良好，王黎穎等[26]通過(guò)毒理學(xué)試驗(yàn)證實(shí)，鹽藻粉（主成分β-胡蘿卜素）和藍(lán)莓提取物復(fù)配后未見(jiàn)毒性作用，且兩者可以極大地減少體內(nèi)自由基含量，保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷。綜合不良反應(yīng)觀察和檢測(cè)指標(biāo)數(shù)據(jù)，證明以葉黃素、藍(lán)莓提取物、β-胡蘿卜素為主要原料制成的葉黃素軟膠囊在規(guī)定劑量范圍內(nèi)對(duì)機(jī)體健康無(wú)不良影響。

表3 試驗(yàn)前后血液學(xué)檢測(cè)指標(biāo)（x—±SD）

2.4 功效性指標(biāo)觀察結(jié)果

2.4.1 視力變化情況

試驗(yàn)組自身及試驗(yàn)后兩組間比較，左、右眼視力均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）（見(jiàn)表4）。試驗(yàn)組左眼視力改善有效率為15.38%，對(duì)照組左眼視力改善有效率為1.92%，差異有顯著性（P＜0.05）。試驗(yàn)組右眼視力改善有效率為11.54%，對(duì)照組右眼視力改善有效率為1.92%，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）（見(jiàn)表5）。食用葉黃素軟膠囊對(duì)于視力沒(méi)有顯著的改善作用[9]。

2.4.2 癥狀總積分變化情況

試驗(yàn)組試用前后自身比較，癥狀總積分顯著降低（P＜0.01），組間比較癥狀總積分亦顯著降低（P＜0.05），見(jiàn)表6。試驗(yàn)組癥狀改善有效率32.69%，對(duì)照組癥狀改善有效率11.54%，兩者差異有顯著性（P＜0.05），見(jiàn)表7。該試驗(yàn)結(jié)果與張莉華等[27]研究結(jié)果一致。此外，文獻(xiàn)報(bào)道經(jīng)常食用富含葉黃素的食物或補(bǔ)充葉黃素可增加血液中葉黃素的含量，防治因器官衰老引起的白內(nèi)障等眼部疾病[28]。

表6 試驗(yàn)前后癥狀總積分變化情況（x—±SD）

表7 試驗(yàn)前后癥狀改善情況比較

2.4.3 明視持久度變化情況

明視持久度是指明視時(shí)間與注視總時(shí)間的百分比，是研究照明狀態(tài)對(duì)視疲勞影響的方法之一。試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組自身比較，明視持久度顯著提高（P＜0.01），平均明視持久度提高11.32%。試食后兩組間比較，明視持久度亦有顯著提高（P＜0.01），平均明視持久度提高13.46%，見(jiàn)表8。由此可見(jiàn)，食用葉黃素軟膠囊對(duì)眼部明視持久度有明顯的提高。

表8 試驗(yàn)前后明視持久度變化情況（x—±SD）

3 結(jié)論

本次人體試食試驗(yàn)結(jié)果顯示，葉黃素軟膠囊試食期間受試人員的睡眠、飲食、血常規(guī)、尿常規(guī)等各項(xiàng)臨床指標(biāo)均無(wú)明顯異常，也未見(jiàn)其他不良癥狀，表明人體服用葉黃素軟膠囊的安全性可以滿足。試驗(yàn)組食用60 d后，癥狀總積分、明視持久度有明顯改善，平均明視持久度提高11.32%，試驗(yàn)組及對(duì)照組兩組間比較，癥狀總積分、癥狀改善有效率、左眼視力改善率有顯著差異（P＜0.05），明視持久度有顯著差異（P＜0.01），平均明視持久度提高13.46%?；谑乘幈O(jiān)局發(fā)布文件中緩解視疲勞功能判定方法及標(biāo)準(zhǔn)，葉黃素軟膠囊具有緩解視疲勞的功能。

目前，越來(lái)越多的人面臨視疲勞的問(wèn)題，因此緩解視疲勞的功能營(yíng)養(yǎng)保健品需求量極大。利用天然原料制備功效明顯的保健食品是食品營(yíng)養(yǎng)與科學(xué)研究的熱點(diǎn)。本研究所用原料均為天然植物原料，且被大量動(dòng)物及人體試驗(yàn)證明具有功效性及安全性。葉黃素對(duì)視疲勞的改善作用主要體現(xiàn)在兩方面，分別為光屏障作用和抗氧化作用，葉黃素可吸收大量藍(lán)光，使其無(wú)法到達(dá)視網(wǎng)膜。另外，通過(guò)抗氧化作用使視神經(jīng)細(xì)胞、晶狀體、黃斑等免受氧化損傷，藍(lán)莓提取物中大量的花青素可增加視網(wǎng)膜中色覺(jué)感光色素視紫質(zhì)的重生，從而保護(hù)視力，β-胡蘿卜素提供維生素A增強(qiáng)眼部暗視力能力，幾種主要原料的組合可協(xié)同保護(hù)眼部健康，緩解視疲勞。本研究通過(guò)分析各原料特性嚴(yán)謹(jǐn)搭配，制得軟膠囊成品具有良好的緩解視疲勞功能，為今后緩解視疲勞功能產(chǎn)品的研發(fā)提供了參考依據(jù)。