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    瓊脂覆蓋法防止菌落蔓延生長(zhǎng)的可行性探究

    2022-11-19 07:30:24王春林劉琪雯
    食品安全導(dǎo)刊 2022年31期
    關(guān)鍵詞:瓊脂月餅總數(shù)

    田 霞,王春林,余 為,劉琪雯

    (重慶市黔江食品藥品檢驗(yàn)所,重慶 409003)

    菌數(shù)總數(shù)作為食品微生物學(xué)檢測(cè)的基礎(chǔ)項(xiàng)目,對(duì)食品安全起著至關(guān)重要的作用。菌落總數(shù)可以用來(lái)判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量,反映食品在生產(chǎn)過(guò)程中是否符合衛(wèi)生要求,以便對(duì)被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)[1]。如果食品菌落總數(shù)超標(biāo),說(shuō)明該食品的衛(wèi)生質(zhì)量達(dá)不到基本的衛(wèi)生要求,因?yàn)榇罅康募?xì)菌能夠破壞食品中的營(yíng)養(yǎng)成分,加速食品的腐敗變質(zhì)。隨著食品工業(yè)的發(fā)展,食品種類更加豐富,生產(chǎn)原料品種來(lái)源更廣泛,加工工藝也更復(fù)雜,但微生物的污染仍然無(wú)法避免,尤其是糕點(diǎn)、面點(diǎn)等含高淀粉類食品受芽孢桿菌污染的概率大[2-5],產(chǎn)品加工過(guò)程中滅菌不徹底,菌落計(jì)數(shù)時(shí)平板上容易出現(xiàn)菌落彌漫生長(zhǎng)的現(xiàn)象,導(dǎo)致菌落無(wú)法計(jì)數(shù),對(duì)菌落總數(shù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的準(zhǔn)確性造成嚴(yán)重的影響[6]。本文采用瓊脂覆蓋法,即在樣品和培養(yǎng)基混勻凝固后,再在其表面加蓋一薄層(約4 mL)平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基,通過(guò)對(duì)比不覆蓋檢驗(yàn)方法,對(duì)覆蓋法的有效性進(jìn)行探究。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    月餅:重慶渝東南片區(qū)(黔江、彭水、酉陽(yáng)、秀山)市售月餅50批,其中廣式月餅47批,滇式月餅2批,臺(tái)式月餅1批。

    培養(yǎng)基:磷酸鹽緩沖液(201108),購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(211201),購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    DHP-9162電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海和呈儀器制造有限公司;HH.B11-500-BS-Ⅱ 電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司;LDZM-80KCS-III立式高壓蒸汽滅菌器,上海申安醫(yī)療器械廠;SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái),蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 培養(yǎng)基及樣品制備

    按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》(GB 4789.2—2016)進(jìn)行檢測(cè),無(wú)菌稱取樣品25 g加入225 mL的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液中,即得到1∶10的稀釋樣品勻液,再無(wú)菌吸取1∶10樣品勻液1 mL加入9 mL無(wú)菌磷酸鹽緩沖液中,即得到1∶100的稀釋樣品勻液,依次制備10倍系列稀釋樣品勻液1∶1 000、1∶10 000。每次遞增一個(gè)稀釋度,更換1 mL無(wú)菌的刻度吸管,估計(jì)樣品的污染狀況程度,選擇3個(gè)連續(xù)的稀釋度,每個(gè)稀釋度覆蓋組做2個(gè)平板,不覆蓋組做2個(gè)平板。同時(shí)做空白對(duì)照組,即吸取無(wú)菌稀釋液1 mL至無(wú)菌平皿內(nèi),做兩個(gè)平板。提前制備好平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基,放置于48℃±2℃恒溫箱中保溫,及時(shí)傾注轉(zhuǎn)動(dòng)平皿,使樣品勻液與培養(yǎng)基充分混勻,覆蓋組在培養(yǎng)基凝固后再均勻傾蓋約4 mL培養(yǎng)基。在短時(shí)間內(nèi)完成樣品的取樣、稀釋以及平板制備。

    1.3.2 菌落培養(yǎng)及結(jié)果觀察

    所有平板均倒置放于電熱恒溫培養(yǎng)箱中36 ℃培養(yǎng)48 h,觀察結(jié)果并進(jìn)行計(jì)數(shù),記錄對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)與菌落數(shù)量。菌落結(jié)果選取個(gè)數(shù)在30~300 CFU、無(wú)蔓延生長(zhǎng)情況的平板計(jì)數(shù),個(gè)數(shù)小于30的平板則記下具體菌落個(gè)數(shù),個(gè)數(shù)大于300的平板記結(jié)果為多不可計(jì);若出現(xiàn)較大片狀菌落生長(zhǎng)的平板時(shí),則不能采用,以另一個(gè)無(wú)片狀生長(zhǎng)的平板的菌落個(gè)數(shù)作為此稀釋度的菌落數(shù);若菌落蔓延的生長(zhǎng)未占到一半的平板,而剩下的一半平板菌落又很均勻地分布,則可以用均勻分布的半個(gè)平板的菌落數(shù)乘以2,作為這一個(gè)平板的菌落總個(gè)數(shù)。菌落總數(shù)結(jié)果以稀釋度平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)表示,即每克中菌落總數(shù)個(gè)數(shù)(CFU·g-1)。

    1.3.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)置

    (1)不加覆蓋組。按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè),制成檢驗(yàn)培養(yǎng)基平板后培養(yǎng)基不加覆蓋。

    (2)加覆蓋組。按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè),制成檢驗(yàn)培養(yǎng)基平板后,再在其表面加入一薄層平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(約4 mL),即加覆蓋。

    (3)空白對(duì)照組。按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè),覆蓋和不覆蓋均做兩個(gè)平板。覆蓋組和不覆蓋組生長(zhǎng)結(jié)果均為無(wú)菌生長(zhǎng),則此次試驗(yàn)有效。

    2 結(jié)果與分析

    計(jì)數(shù)每個(gè)樣品各個(gè)稀釋度、兩個(gè)組的檢驗(yàn)平板的菌落蔓延情況,再計(jì)數(shù)不蔓延檢驗(yàn)平板的菌落數(shù)量。空白對(duì)照組平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)。50批月餅樣品均為熱加工工藝,兩組均有5批月餅菌落總數(shù)小于10 CFU·g-1,1批月餅菌落總數(shù)值110 000,大于《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 糕點(diǎn)、面包》最高安全限量(M=100 000 CFU·g-1),產(chǎn)品菌落總數(shù)項(xiàng)目不符合國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn),即不合格。檢驗(yàn)平板蔓延均出現(xiàn)在1∶10稀釋度,蔓延生長(zhǎng)的月餅樣品地方派式有廣式和滇式,此次覆蓋組與不覆蓋組的菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果中位值均為150,50批樣品基本信息及菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果情況見(jiàn)表1。統(tǒng)計(jì)50批月餅樣品覆蓋與不覆蓋組菌落蔓延情況,見(jiàn)表2。

    表1 50批樣品基本信息及菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果情況表

    表2 50批月餅樣品覆蓋與不覆蓋組菌落蔓延情況統(tǒng)計(jì)表

    從表2中可以看出覆蓋組和不覆蓋組兩種檢驗(yàn)方法有顯著性差異,不覆蓋組出現(xiàn)菌落蔓延情況比較嚴(yán)重,蔓延平板占比34%,覆蓋組能很大程度控制菌落蔓延生長(zhǎng),蔓延平板占比降低為12%。蔓延生長(zhǎng)的平板在菌落結(jié)果計(jì)數(shù)有時(shí)不宜采用,有時(shí)以平板的一半菌落數(shù)乘以2計(jì)數(shù),極大地影響了菌落總數(shù)的準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。雖然實(shí)際應(yīng)用中依然有個(gè)別平板蔓延生長(zhǎng)的情況出現(xiàn),但總體而言,覆蓋法能有效改善平菌落蔓延生長(zhǎng)問(wèn)題,研究人員在實(shí)際工作中可以適當(dāng)采用。

    3 結(jié)論與討論

    月餅作為我國(guó)特有的傳統(tǒng)焙烤食品,其因含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在生產(chǎn)和儲(chǔ)存期間極易受微生物污染而腐敗變質(zhì)。菌落總數(shù)作為食品檢測(cè)基礎(chǔ)性指標(biāo),一定程度上能反映月餅的食品衛(wèi)生質(zhì)量情況。從近年來(lái)市售月餅質(zhì)量抽查結(jié)果中可以看出,菌落總數(shù)是月餅質(zhì)量的主要安全問(wèn)題之一[7],且市售月餅的菌落總數(shù)項(xiàng)目合格率很難大幅度提高[8]。市場(chǎng)上消費(fèi)較多的廣式月餅含有的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌是芽孢桿菌和球菌[9],而芽孢桿菌極易引起菌落總數(shù)測(cè)定時(shí)蔓延生長(zhǎng),影響菌落總數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。有研究指出可以在瓊脂中加入0.2%~0.3%的TTC防止菌落出現(xiàn)彌漫現(xiàn)象[10]。也有研究發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)平板做好后再在其表面覆蓋5 mL瓊脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.0%的培養(yǎng)基(配方:瓊脂20 g,水980 g),比在培養(yǎng)皿皿蓋中放置兩層濾紙的方法和每100 mLPCA培養(yǎng)基中加入2.5 mL 0.1%TTC溶液混勻的方法更能降低菌落蔓延對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響[11]。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》(GB 4789.2—2022)即將實(shí)施,相較于2016年版,其菌落總數(shù)結(jié)果報(bào)告中刪除了“若所有平板上為蔓延菌落而無(wú)法計(jì)數(shù),則報(bào)告菌落蔓延”這一項(xiàng)情況,這要求檢驗(yàn)員更為準(zhǔn)確地預(yù)判樣品中是否含有在培養(yǎng)基表面蔓延生長(zhǎng)的菌落,從而選擇適宜的菌落總數(shù)測(cè)定方法。培養(yǎng)基的菌落蔓延生長(zhǎng)是由于培養(yǎng)基表面游離水而助力細(xì)菌游動(dòng)所形成,各個(gè)文獻(xiàn)方法均是旨在減少其影響,從而降低菌落蔓延生長(zhǎng)情況。本次研究中的覆蓋法能大大減少平板菌落蔓延生長(zhǎng)的情況出現(xiàn),但此次研究食品種類較為單一,以后的研究可以擴(kuò)大食品類別。覆蓋法不失為一種簡(jiǎn)便有效降低菌落蔓延生長(zhǎng)的方法,但仍然有個(gè)別平板蔓延情況發(fā)生,導(dǎo)致菌落計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確,實(shí)驗(yàn)人員可依據(jù)檢驗(yàn)產(chǎn)品和目的選擇合適抑制菌落蔓延生長(zhǎng)的檢驗(yàn)方法。

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