阿米替林與自閉癥譜系障礙潛在關(guān)系挖掘

呂艷華，武 莉，原雨陽，賀培風(fēng)，盧學(xué)春，于 琦

自閉癥譜系障礙（autism spectrum disorders，ASD）是一種廣泛性的發(fā)展障礙，主要表現(xiàn)為社會(huì)交往障礙、言語和非言語發(fā)育遲緩、興趣范圍有局限性和行為僵化刻板［1］。亞洲ASD 平均患病率為1%～2%，男性兒童的患病率大約是女性兒童的5 倍。由于對(duì)ASD 的發(fā)病機(jī)制和病因尚無共識(shí)，目前ASD 的治療通常是對(duì)癥治療［2］。研究結(jié)果顯示，阿米替林對(duì)兒童、青少年和成人的易怒、攻擊性、胃腸道問題和失眠有效［3］，且根據(jù)所構(gòu)建的“藥物-靶點(diǎn)”關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)對(duì)自閉癥相關(guān)藥物及靶點(diǎn)進(jìn)行關(guān)系預(yù)測研究，發(fā)現(xiàn)阿米替林在治療 ASD 方面表現(xiàn)出良好的藥物價(jià)值屬性［4］。通過文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，阿米替林也常被用來和其他藥物（如米氮平、多奈哌齊、帕羅西汀、西酞普蘭等）進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，來驗(yàn)證其他藥物對(duì)ASD 的療效。為進(jìn)一步探明阿米替林在體內(nèi)作用的分子機(jī)制，本文利用臨床生物信息學(xué)方法，借助臨床生物信息學(xué)表觀精準(zhǔn)治療預(yù)測平臺(tái)EpiMed，分析阿米替林對(duì)全基因組表達(dá)譜的影響，并結(jié)合 EpiMed 平臺(tái)的預(yù)測結(jié)果，探討阿米替林抗ASD 的潛在分子機(jī)制，為阿米替林治療ASD 的方案及后續(xù)優(yōu)化提供理論依據(jù)。

1 數(shù)據(jù)與方法

1.1 數(shù)據(jù)來源

Gene Expression Omnibus（GEO）數(shù)據(jù)庫是由美國國立生物技術(shù)信息中心創(chuàng)建和維護(hù)的基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫，它收錄了世界各地研究機(jī)構(gòu)提交的大量高通量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，也是當(dāng)今最大、最全面的基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫［5］。本文分別以“amitriptyline”和“autism”為檢索詞在GEO 數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行檢索，在條目類型中選擇“series”，分別得到17 條和468 條檢索結(jié)果，為進(jìn)一步提高基因數(shù)據(jù)檢索的準(zhǔn)確性和可靠性，根據(jù)以下篩選條件對(duì)檢索結(jié)果進(jìn)行二次篩選。物種：與人類基因高度同源的人類或物種（小鼠、大鼠等）；實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：3 組或更多組的重復(fù)實(shí)驗(yàn)；數(shù)據(jù)類型：轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)或全基因組表達(dá)譜數(shù)據(jù)；數(shù)據(jù)質(zhì)量：數(shù)據(jù)具有完整性且有對(duì)應(yīng)的平臺(tái)注釋文件標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范。經(jīng)過篩選后，選出符合條件的數(shù)據(jù)集GSE59927和GSE28521。其中，GSE59927 數(shù)據(jù)集以大鼠為研究對(duì)象，包含了600 多種不同藥物或化合物樣本的表達(dá)矩陣，涵蓋有阿米替林作用于大鼠腎臟的全基因組表達(dá)譜數(shù)據(jù)；GSE28521 數(shù)據(jù)集的作用對(duì)象均為人類，其實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)源自于從ASD 患者和對(duì)照組個(gè)體死后所提取的小腦、額葉皮質(zhì)和顳葉皮質(zhì)的腦組織，共包含79 條樣本數(shù)據(jù)。本文的分析流程如圖1 所示。

圖1 分析流程圖

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)阿米替林的作用部位、作用時(shí)間及藥物劑量，將篩選后的數(shù)據(jù)分為3 組（表1）。以正常大鼠腎臟為對(duì)照組，阿米替林處理的大鼠腎臟為實(shí)驗(yàn)組，分析基因表達(dá)豐度的差異。阿米替林作用部位、作用時(shí)間及藥物劑量皆為GSE59927 數(shù)據(jù)集中的原始信息，考慮藥物在不同細(xì)胞系、劑量和時(shí)間的不同效果，去除3 組差異基因中調(diào)控作用相同的非交集基因，將得到的結(jié)果用于后續(xù)分析。

表1 數(shù)據(jù)具體樣本基本描述

1.3 方法

在Bioconductor 網(wǎng)站（http：//www.bioconductor.org/）下載R 語言程序包，用于數(shù)據(jù)處理和差異分析［6］。首先使用Impute 包估算矩陣中的缺失值［7］，然后使用biomaRt 包將基因轉(zhuǎn)化為同源［8］，再使用limma 程序包規(guī)范數(shù)據(jù)，篩選差異基因［9］，使用R 語言clusterprofiler 程序包對(duì)差異基因進(jìn)行基因本體分析與通路富集分析，分析其中的Gene ontology（GO）生物進(jìn)程和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）通路富集結(jié)果，以FDR＜0.05 表示具有顯著性，聚類結(jié)果將使用R語言進(jìn)行可視化展示。使用Venny2.1 在線工具（https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）［10］去除3組具有相同調(diào)控功能的非交集基因，通過R 語言程序獲得3 組具有不同調(diào)控效果的基因的平均表達(dá)量。

把差異基因上傳至在線分析網(wǎng)站 STRING v11.0（https://string-db.org/），進(jìn)行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)分析［11］。PPI 網(wǎng)絡(luò)可用于確定阿米替林調(diào)控的重要基因編碼的蛋白質(zhì)之間的相互作用和通路關(guān)系。關(guān)鍵基因是指PPI 網(wǎng)絡(luò)中具有高度相關(guān)性的基因。核心節(jié)點(diǎn)是具有重要生物功能的蛋白質(zhì)，通過計(jì)算蛋白質(zhì)之間的連接數(shù)量及每個(gè)節(jié)點(diǎn)是否與特定節(jié)點(diǎn)直接連接來確定。文中關(guān)鍵基因?yàn)樵赑PI 網(wǎng)絡(luò)關(guān)系中出現(xiàn)頻次最高的前10 個(gè)基因，使用Cytoscape 軟件中的CytoHubba 插件篩選核心節(jié)點(diǎn)，通過Degree 算法計(jì)算出關(guān)鍵基因，計(jì)算出前10 個(gè)基因。

本文采用領(lǐng)域知識(shí)得分方法，在中英文數(shù)據(jù)庫中對(duì)阿米替林作用靶點(diǎn)的有效性進(jìn)行文本驗(yàn)證。將8個(gè)關(guān)鍵基因作為關(guān)鍵靶點(diǎn)，以“‘關(guān)鍵靶點(diǎn)’AND‘a(chǎn)utism’”為檢索詞，在PubMed 中進(jìn)行檢索；以“‘關(guān)鍵靶點(diǎn)’AND‘自閉癥譜系障礙’”為檢索詞在CNKI 中進(jìn)行檢索，記錄相關(guān)檢索結(jié)果并計(jì)算其累計(jì)得分值。

2 結(jié)果與分析

2.1 差異基因表達(dá)分析

將3 組阿米替林?jǐn)?shù)據(jù)利用limma 程序包進(jìn)行差異分析，以|log2Fc|＞2，F(xiàn)DR＜0.05 為閾值，共得到3 組差異結(jié)果，差異基因的個(gè)數(shù)分別為第一組411 個(gè)（圖2-a）、第二組852 個(gè)（圖2-b）、第三組907 個(gè)（圖2-c），其中上調(diào)表達(dá)的差異基因個(gè)數(shù)分別為226 個(gè)、481 個(gè)、508 個(gè)，下調(diào)表達(dá)的差異基因個(gè)數(shù)分別為185 個(gè)、371 個(gè)、399 個(gè)。在上述差異基因基礎(chǔ)上，使用Venny2.1工具和R 語言腳本，匯總3 組差異基因結(jié)果，去除非交集基因后，共得到差異基因331 個(gè)，其中上調(diào)179 個(gè)、下調(diào)152 個(gè)。

再隨機(jī)抽取數(shù)據(jù)集 GSE28521 的部分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行差異基因篩選，差異基因篩選設(shè)定閾值為log2（Fold change）＞0.5，P＜0.01，共篩選出差異基因393 個(gè)，其中上調(diào)165 個(gè)、下調(diào)228個(gè)（圖2-d）。

圖2 阿米替林與ASD 差異基因篩選結(jié)果

2.2 蛋白質(zhì)相互作用調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將阿米替林差異表達(dá)基因?qū)隨TRING v11.0在線分析網(wǎng)站進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析，圖3為該差異基因的蛋白質(zhì)相互作用調(diào)控網(wǎng)絡(luò)（PPI），圖中紅色表示上調(diào)差異表達(dá)基因，綠色表示下調(diào)差異表達(dá)基因，共得到241 個(gè)蛋白，530 條相互關(guān)系，平均點(diǎn)度為4.4，蛋白質(zhì)之間具有較強(qiáng)的相互關(guān)聯(lián)性。

圖3 差異表達(dá)基因蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)結(jié)果

利用Degree 插件根據(jù)蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)計(jì)算出PPI 網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)的得分，其中，IL6（35 分）、SRC（33 分）、CYCS（24 分）、CD44（19 分）、TLR4（17 分）、GRM1（17 分）、SNAP25（16 分）、CCR2（15 分）、RYR1（12 分）、TFRC（12 分）等10 個(gè)關(guān)鍵基因在PPI 網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)重要地位。

2.3 阿米替林與ASD 的富集分析

2.3.1 阿米替林的差異基因富集分析

使用R 語言程序clusterprofiler 包對(duì)PPI 網(wǎng)絡(luò)中的基因進(jìn)行GO 功能富集和KEGG 通路富集分析［12］。GO 富集分析共得到319 條結(jié)果，其中包括生物學(xué)過程（biological process，BP）213 條、細(xì)胞組分（cellular components，CC）48 條、分子功能（molecular function，MF）58 條。在生物學(xué)過程方面，富集的反應(yīng)大多與蛋白質(zhì)磷酸化、炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)，如BMP2K、CCL2、GRK1、CD40、CXCL8、TNF、IL1B 等。在細(xì)胞組分方面，富集的反應(yīng)大多影響細(xì)胞膜的功能，如AP2B1、SYNJ2、HMOX1、ACP2 等。在分子功能方面，富集的反應(yīng)大多與免疫反應(yīng)、蛋白結(jié)合、蛋白激酶的活性有關(guān)，如BRAP、CD44、HOPX、AP2B1、SF1、EHD1、TGFB1 等。KEGG 通路富集結(jié)果中，331個(gè)顯著性基因多富集在氧化磷酸化反應(yīng)、代謝反應(yīng)、神經(jīng)受體相互作用、MAPK 信號(hào)通路、Hippo信號(hào)通路、碳代謝等通路。

2.3.2 阿米替林與ASD 共同富集分析

使用clusterProfiler 程序包分別對(duì)阿米替林上調(diào)表達(dá)差異基因和ASD 下調(diào)表達(dá)差異基因進(jìn)行KEGG 通路富集分析，并借助R 語言對(duì)聚類結(jié)果進(jìn)行可視化處理，圖4 是二者共同富集通路的部分結(jié)果，其中圖4-a 為阿米替林上調(diào)差異基因的KEGG通路富集分析，圖4-b 為ASD 下調(diào)差異基因的KEGG 通路富集分析。對(duì)比兩圖可知，阿米替林上調(diào)差異基因與ASD 下調(diào)差異基因所共同富集到的通路有“Oxidative phosphorylation”“GABAergic synapse”“Glycolysis/Gluconeogenesis”“Vascular smooth muscle contraction”等。

圖4 KEGG 通路富集分析部分結(jié)果

阿米替林與ASD 共同富集到的信號(hào)通路如圖5所示，可以看到阿米替林藥物上調(diào)差異基因和ASD患者下調(diào)差異基因分別在氧化磷酸化通路、γ-氨基丁酸能突觸通路、糖酵解糖異生通路和血管平滑肌收縮通路的富集。由此可見，阿米替林與ASD 具有共同的生物信息學(xué)基礎(chǔ)，因而具有較好的關(guān)聯(lián)性。

圖5 阿米替林與ASD 共同富集通路展示

2.4 “ASD-阿米替林”關(guān)聯(lián)的文本驗(yàn)證及預(yù)測

2.4.1 基于領(lǐng)域知識(shí)得分的“ASD-阿米替林”文本驗(yàn)證

為了驗(yàn)證阿米替林相關(guān)作用靶點(diǎn)的有效性，本文采用領(lǐng)域知識(shí)得分方法對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)在中英文數(shù)據(jù)庫中的案例進(jìn)行整理，并對(duì)其數(shù)量進(jìn)行累計(jì)求和。選取了PPI 網(wǎng)絡(luò)中的8 個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，包括CCR2、SNAP25、GRM1、TLR4、CD44、SRC、IL6、RYR1，分別在CNKI 和PubMed 中檢索ASD 與上述靶點(diǎn)作用相關(guān)的已有文獻(xiàn)，領(lǐng)域知識(shí)得分統(tǒng)計(jì)結(jié)果中除靶點(diǎn)SNAP25 得分為3 分外，其余靶點(diǎn)得分均為1 分。

文本檢索結(jié)果顯示，關(guān)鍵靶點(diǎn)CCR2［13］主要參與調(diào)節(jié)體內(nèi)T 細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的表達(dá)和T 細(xì)胞分化，在炎癥過程中促進(jìn)T 細(xì)胞分化為Th17，并通過JAK-STAT 通路調(diào)節(jié)FOXO1 活性，在介導(dǎo)周圍神經(jīng)損傷引起的神經(jīng)病理性疼痛中起著重要作用；靶點(diǎn)SNAP25［14-16］主要位于囊泡和質(zhì)膜中，參與神經(jīng)遞質(zhì)釋放的分子調(diào)節(jié)，這與智力低下和先天性肌無力綜合征有關(guān)；靶點(diǎn)GRM1［17］參與谷氨酸在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的中樞作用，如海馬體的長期增強(qiáng)和小腦的長期抑制，該基因可能與許多疾病有關(guān)，包括精神分裂癥、雙向情感障礙、抑郁癥和乳腺癌；靶點(diǎn)TLR4［18］通常作為水解酶或受體，主要參與免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)；靶點(diǎn)CD44［19］參與多種細(xì)胞功能，包括T 淋巴細(xì)胞刺激、循環(huán)、造血、炎癥和對(duì)細(xì)菌感染的反應(yīng)；靶點(diǎn)IL6［20］在免疫、組織再生和代謝方面具有多種生物學(xué)功能。

2.4.2 基于EpiMed 平臺(tái)的“ASD-阿米替林”關(guān)聯(lián)預(yù)測

表觀精準(zhǔn)治療預(yù)測平臺(tái)EpiMed 是研究團(tuán)隊(duì)在近20 年的臨床生物信息學(xué)研究過程中，基于系統(tǒng)生物學(xué)和以比較功能基因組學(xué)理論為基礎(chǔ)的邏輯組學(xué)算法而建立的，它包含有疾病轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和臨床常用藥物、中藥和多種化合物的功能基因組學(xué)數(shù)據(jù)。平臺(tái)可自動(dòng)匹配差異基因，從而篩選出所需關(guān)聯(lián)的藥物與疾病［21］。

本文借助EpiMed 平臺(tái)對(duì)疾病與藥物進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，將篩選出的差異基因?qū)肫脚_(tái)后，平臺(tái)利用自動(dòng)匹配功能，依據(jù)基因名、logFC 及FDR 值匹配與差異基因相關(guān)聯(lián)（正負(fù)相關(guān)）的疾病或藥物。以關(guān)聯(lián)系數(shù)＜-0.1，F(xiàn)DR＜0.05 作為閾值，經(jīng)過計(jì)算得出與阿米替林呈負(fù)相關(guān)的疾病，即阿米替林對(duì)該疾病具有治療作用，預(yù)測結(jié)果見表2。

表2 與阿米替林負(fù)相關(guān)的疾病（部分結(jié)果）

根據(jù)2020 版《精神障礙診療規(guī)范》［28］：阿米替林作為一種三環(huán)類抗抑郁藥，常與其他藥物聯(lián)用于治療抑郁癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙等精神衛(wèi)生類疾病。在Drugbank 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索得知，阿米替林的適應(yīng)證有成人重度抑郁癥、成人神經(jīng)病理性疼痛、成人慢性緊張型頭痛、成人偏頭痛的預(yù)防性治療、腸易激綜合征、睡眠障礙、糖尿病精神病變、激動(dòng)、纖維肌痛和失眠等。表3 中阿米替林與疾病關(guān)聯(lián)實(shí)驗(yàn)的檢索結(jié)果顯示，阿米替林可能對(duì)精神分裂癥、高血壓、哮喘等起到治療作用，有實(shí)驗(yàn)證明確有療效［23-28］，故本文認(rèn)為EpiMed 平臺(tái)的預(yù)測結(jié)果具有一定的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。因此，表3 中阿米替林對(duì)特發(fā)性肺纖維化、亨廷頓病、神經(jīng)纖維瘤病等疾病的潛在治療效果也值得關(guān)注。

表3 與阿米替林正相關(guān)的藥物（部分結(jié)果）

通過EpiMed 平臺(tái)自動(dòng)匹配功能可得與阿米替林正相關(guān)的藥物，其中氟哌啶醇、奧氮平、阿立哌唑、艾司西酞普蘭、可樂定、文拉法辛等西藥，以及人參、黃芪等中藥已被實(shí)驗(yàn)證明［29-43］與阿米替林聯(lián)用針對(duì)精神障礙類疾病所取得的療效均優(yōu)于單獨(dú)使用其中任何一種藥物，說明這些藥物與阿米替林確實(shí)呈正相關(guān)關(guān)系。

Goodwin Guy M 通過臨床證明，在使用來曲唑時(shí)需要謹(jǐn)慎［44］，尤其是針對(duì)有產(chǎn)后情感障礙或雙向情感障礙的女性，使用不當(dāng)（在患者聯(lián)合使用處方阿米替林期間）可能會(huì)導(dǎo)致患者體內(nèi)雌激素水平急劇下降。結(jié)合表4 中EpiMed 平臺(tái)計(jì)算結(jié)果，同樣呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)的藥物如鏈唑霉素、白頭翁、細(xì)辛等也被證明與阿米替林聯(lián)用具有削弱藥物療效的結(jié)果，需要臨床進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

表4 與阿米替林負(fù)相關(guān)的藥物（部分結(jié)果）

3 討論

3.1 關(guān)鍵靶點(diǎn)分析

本文以阿米替林的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)為研究對(duì)象，對(duì)GEO 中阿米替林相關(guān)數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)阿米替林對(duì)ASD 的治療作用是一個(gè)多靶點(diǎn)組學(xué)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控，通過PPI 網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)，關(guān)鍵的基因如CCR2、SNAP25、GRM1、TLR4、CD44、CYCS、SRC、IL6 等，與以往研究結(jié)果一致［13-20］，這些基因主要參與跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、炎癥反應(yīng)、釋放神經(jīng)遞質(zhì)、蛋白質(zhì)磷酸化、免疫反應(yīng)、蛋白質(zhì)受體編碼、調(diào)控細(xì)胞周期等過程。有研究發(fā)現(xiàn)，CCR2 在神經(jīng)系統(tǒng)中主要表達(dá)于大腦皮質(zhì)、海馬、黑質(zhì)、蒼白球、腦室旁丘腦、下丘腦視上核和小腦［45］，由此參與跨膜信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。有學(xué)者認(rèn)為，SNAP25 在神經(jīng)元和內(nèi)分泌細(xì)胞高度表達(dá)，并分布在多個(gè)區(qū)域，如哺乳動(dòng)物大腦皮層、中腦、丘腦、海馬和基底節(jié)，其中SNAP25 在大腦皮層、海馬和基底節(jié)的表達(dá)與精神分裂癥有關(guān)，SNAP25 分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突和突觸終末，在軸突生長和突觸可塑性中起到重要作用［46］，因此認(rèn)為SNAP25 在神經(jīng)遞質(zhì)的釋放和軸突生長過程中起著重要作用。還有學(xué)者認(rèn)為，白細(xì)胞介素6（IL-6）參與的自身免疫反應(yīng)作用于中樞神經(jīng)細(xì)胞，可導(dǎo)致腦功能障礙，并可改善額葉、海馬等腦區(qū)的多巴胺和5-羥色胺的活性［47］，因此它與精神分裂癥的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。此外，在促炎性細(xì)胞因子中，IL-6 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能中起著重要作用。

3.2 富集分析

在GO 富集分析結(jié)果中，阿米替林在生物學(xué)過程中主要參與蛋白質(zhì)磷酸化、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡過程的負(fù)調(diào)控，正向調(diào)節(jié)GTP 酶活性及RNA 聚合酶啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄；在分子功能方面，阿米替林主要與多種轉(zhuǎn)錄因子活性、蛋白的特異性結(jié)合、鋅離子結(jié)合等功能相關(guān)；在細(xì)胞組分方面，阿米替林主要影響跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合物、細(xì)胞質(zhì)膜、胞漿、等離子膜等多種膜的構(gòu)成。

在KEGG 通路富集方面，阿米替林主要作用于神經(jīng)受體間的相互作用、碳代謝、機(jī)體蛋白質(zhì)的氧化磷酸化反應(yīng)，還參與MAPK 信號(hào)通路和Hippo信號(hào)通路。有學(xué)者認(rèn)為MAPK 通路是調(diào)節(jié)包括神經(jīng)發(fā)育在內(nèi)的多種生理過程所必需的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路［48］，MAPK 通路的干擾會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)發(fā)育障礙，包括ASD，因此阿米替林在體內(nèi)的作用通路與ASD具有關(guān)聯(lián)性。另有學(xué)者通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阿米替林可顯著降低脊髓神經(jīng)結(jié)扎產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子的蛋白水平［49］，而Hippo 信號(hào)通路在氧化應(yīng)激（腦卒中、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化及帕金森等疾病均與氧化應(yīng)激密切相關(guān)）介導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞中起到重要作用，并且Hippo 信號(hào)通路除重要組分NF2 參與調(diào)控神經(jīng)前體細(xì)胞NPC 的數(shù)目和胼胝體的發(fā)育外，Hippo 信號(hào)通路還參與神經(jīng)發(fā)育的主要過程［50］，而阿米替林也會(huì)作用于此信號(hào)通路，因此阿米替林在治療神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)所導(dǎo)致的發(fā)育障礙（包括ASD）方面所發(fā)揮的作用不容小覷。

4 結(jié)語

本文采用生物信息學(xué)方法對(duì)阿米替林基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析、基因本體學(xué)（GO）富集分析和京都基因與基因組百科全書（KEGG）富集分析等，并借助領(lǐng)域知識(shí)得分法和EpiMed 進(jìn)行文本驗(yàn)證和預(yù)測，探討阿米替林是否對(duì)ASD 具有潛在治療作用。在疾病關(guān)聯(lián)分析方面，發(fā)現(xiàn)阿米替林與ASD、精神分裂癥、高血壓、哮喘、肝炎等疾病呈負(fù)相關(guān)，說明阿米替林對(duì)這些疾病具有潛在治療作用；在藥物關(guān)聯(lián)分析方面，發(fā)現(xiàn)氟西汀、文拉法辛、米氮平、艾司西酞普蘭、可樂定、氟哌啶醇等西藥，冬蟲夏草、鉤藤、景天、麝香、黃芪等中藥與阿米替林呈正相關(guān)，說明這些藥物與阿米替林可能具有潛在協(xié)同作用；發(fā)現(xiàn)氯尼達(dá)明、鏈唑霉素、來曲唑等西藥，白頭翁、皂刺、細(xì)辛等中藥與阿米替林呈負(fù)相關(guān)，說明這些藥物與阿米替林可能具有潛在拮抗作用。總之，阿米替林對(duì)ASD 具有潛在治療作用，建議科研人員關(guān)注阿米替林在治療ASD 中的應(yīng)用，并可嘗試與其他相關(guān)藥物進(jìn)行聯(lián)用，以求得最佳治療效果。