C-C 基序趨化因子樣受體2、胰島素樣生長因子2在前列腺癌中的表達及與患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系

羅斌，王博，陳立華，周恒毅

洛陽市第一人民醫(yī)院泌尿外科，河南 洛陽 471000

前列腺癌是發(fā)生在前列腺的上皮性惡性腫瘤，臨床主要表現(xiàn)為腰痛、尿急、尿頻、尿痛、排尿困難等癥狀。據(jù)統(tǒng)計，前列腺癌已成為影響男性生命健康的惡性腫瘤之一，且該病的發(fā)病率隨著患者年齡增長而逐漸上升。近年來前列腺癌發(fā)病率和病死率均逐年上升[1]。臨床主要采用前列腺癌根治術(shù)或放療治療前列腺癌，療效較佳，早期前列腺癌可得到治愈，但晚期前列腺癌無法治愈，多以保守治療為主，以延長患者的生存期，改善生活質(zhì)量[2]。早期前列腺癌進展緩慢，但早期不易發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致無法及時治療，確診時多已進展至晚期，失去了最佳的治療時機。因此，臨床亟需找到一種有效的診斷前列腺癌的方法[3]。本研究探討C-C基序趨化因子樣受體2（C-C motif chemokine receptor like 2，CCRL2）、胰島素樣生長因子2（insulin like growth factor 2，IGF2）在前列腺癌中的表達及與患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年3月至2020年6月洛陽市第一人民醫(yī)院收治的前列腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國前列腺癌早期診斷專家共識》[4]中前列腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理學(xué)檢查確診；②臨床資料完整；③既往均未接受過內(nèi)分泌治療或放療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并精神障礙，無法配合研究；③合并嚴(yán)重自身免疫性疾病及心功能不全。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入101例前列腺癌患者，年齡53～83歲，平均（67.51±8.41）；Gleason評分評估分化程度：中高分化43例，低分化58例；Whitmore-Jewett法進行臨床分期：A～B期66例，C～D期35例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測CCRL2、IGF2的表達情況

取101例前列腺癌患者的前列腺癌組織及距腫瘤組織3 cm處的癌旁組織，石蠟包埋和切片處理待檢，檢測前于65℃火中放置標(biāo)本焙燒60 min，使用二甲苯、乙醇進行脫蠟、脫水處理后，將標(biāo)本浸泡于3%過氧化氫中20 min，封閉其內(nèi)源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復(fù)，溫水清洗后使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，每次5 min，同時在其中滴加10%血清以阻斷非特異性結(jié)合，37℃孵育箱10 min。添加一抗羊抗人IGF2多克隆抗體、一抗兔抗人CCRL2多克隆抗體（稀釋濃度為1∶100），4℃孵育過夜，PBS再次清洗，滴加生物素二抗兔抗羊免疫球蛋白G及兔抗人CCRL2多克隆抗體，37℃孵育10 min，PBS清洗3次后，滴加過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液孵育10 min，使用二氨基聯(lián)苯胺進行熒光顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、干燥后使用中性樹脂封片，用PBS代替一抗作為陰性對照。

結(jié)果判定：觀察細(xì)胞的染色情況，細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色，或其他染色明顯強于背景色為陽性細(xì)胞，選取5個不同視野進行全面觀察，每個視野中細(xì)胞應(yīng)不低于200個，觀察完成后計算每個視野中陽性細(xì)胞所占比例。陽性細(xì)胞所占比例﹤5%為陰性，陽性細(xì)胞所占比例為5%～50%為弱陽性，陽性細(xì)胞所占比例﹥50%為強陽性，其中弱陽性、強陽性均判定為陽性。

1.3 隨訪

采用門診復(fù)查、微信或電話的方法對所有患者進行為期1年的隨訪，隨訪時間截至2021年6月，記錄患者的復(fù)發(fā)情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；前列腺癌患者預(yù)后復(fù)發(fā)的影響因素采用多元Logistic回歸分析；以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CCRL2、IGF2表達情況的比較

前列腺癌組織中CCRL2、IGF2的陽性表達率均明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。（表1）

表1 前列腺癌組織和癌旁組織中CCRL2、IGF2表達情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織中CCRL2、IGF2表達情況的比較

不同年齡前列腺癌患者前列腺癌組織中CCRL2、IGF2陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；分化程度為低分化、臨床分期為C～D期、遠處轉(zhuǎn)移前列腺癌患者前列腺癌組織中CCRL2、IGF2陽性表達率分別高于分化程度為中高分化、臨床分期為A～B期、無遠處轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織中CCRL2、IGF2表達情況的比較（n=101）

2.3 前列腺癌患者預(yù)后復(fù)發(fā)的影響因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，年齡可能與前列腺癌患者的復(fù)發(fā)情況無關(guān)（P﹥0.05）；分化程度、臨床分期、遠處轉(zhuǎn)移情況、CCRL2表達情況和IGF2表達情況均可能與前列腺癌患者的復(fù)發(fā)情況有關(guān)（P﹤0.05）。多因素Logistic回歸模型分析結(jié)果顯示，分化程度為低分化、臨床分期為C～D期、遠處轉(zhuǎn)移、CCRL2陽性表達和IGF2陽性表達均為前列腺癌患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素（P﹤0.01）。（表3）

表3 前列腺癌患者預(yù)后復(fù)發(fā)影響因素的單因素和多因素分析

3 討論

前列腺癌患者早期無明顯癥狀，確診時多已進展至晚期且發(fā)生了遠處轉(zhuǎn)移，臨床治療難度較大，患者預(yù)后不良[5-8]。因此，尋找與前列腺癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)的治療靶點對早期前列腺癌的治療有積極意義[9-11]。

本研究結(jié)果顯示，前列腺癌組織中CCRL2、IGF2的陽性表達率均明顯高于癌旁組織，分化程度為低分化、臨床分期為C～D期、遠處轉(zhuǎn)移前列腺癌患者前列腺癌組織中CCRL2、IGF2的陽性表達率分別高于分化程度為中高分化、臨床分期為A～B期、無遠處轉(zhuǎn)移患者，與既往研究結(jié)果相似[12-13]。表明CCRL2和IGF2參與了前列腺癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲過程，表明CCRL2和IGF2的表達與患者臨床特征有關(guān)。這是因為IGF是一種多肽類蛋白質(zhì)，具有胰島素樣作用和促進生長等重要的生理作用，由肝臟、腎等器官或組織合成，存在于激素依賴的器官中。IGF2屬于IGF家族成員，同樣具有促胚胎細(xì)胞生長的作用，可促進細(xì)胞分裂形成胚胎，在生理條件下對胚胎的正常生長發(fā)育有重要作用。同時，IGF2作為自分泌生長因子，在病理條件下的過表達可促進細(xì)胞惡性增殖和轉(zhuǎn)化。有研究表明，IGF2在前列腺癌細(xì)胞中過表達[14]。有研究顯示，多種趨化因子誘餌受體[如Duffy抗原趨化因子受體（Dufffy antigen receptor for chemokine，DARC）、D6和ChemoCentryx趨化因子受體（ChemoCentryx chemokine receptor，CCX-CKR）]均可在前列腺癌細(xì)胞中表達，并在腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[15]。CCRL2的結(jié)構(gòu)與其他誘餌受體相似，因此其具有中斷配體受體結(jié)合后信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用。CCRL2的配體包括CCL2（MCP-1）和CCL5（RANTES）等，在腫瘤新生血管生成、腫瘤細(xì)胞遠處轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用。CCRL2是一種跨膜G蛋白偶聯(lián)受體，具有將樹突狀細(xì)胞運輸?shù)酵庵芰馨徒Y(jié)的關(guān)鍵作用，并廣泛分布于許多組織和器官中，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。研究表明，CCRL2陽性表達明顯促進了腫瘤的復(fù)發(fā)和侵襲，同時，分化程度為低分化、臨床分期為C～D期、遠處轉(zhuǎn)移、CCRL2陽性表達和IGF2陽性表達均為前列腺癌患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。

綜上所述，CCRL2、IGF2在前列腺癌組織中陽性表達率較高，且分化程度為低分化、臨床分期為C～D期、遠處轉(zhuǎn)移、CCRL2陽性表達和IGF2陽性表達均為前列腺癌患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。