淺談食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制

陳 輝

（巴東縣公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖北巴東 444300）

1 微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行質(zhì)量控制的必要性

我國國家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測(cè)》（GB/T 27405—2008）[1]中明確食品微生物檢測(cè)是指按照一定的檢驗(yàn)程序和質(zhì)量控制措施，確定單位樣品中某種或某類微生物的數(shù)量或存在狀況。另外《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》（CNAS—CL01—A001：2018）[2]中也明確指出為確保結(jié)果的有效性，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂質(zhì)量控制計(jì)劃，依照計(jì)劃開展實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制活動(dòng)。各類食品產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)微生物方面參數(shù)都有明確的質(zhì)量要求，無論是致病菌還是有害指示菌出現(xiàn)或者含量超標(biāo)都對(duì)人體會(huì)產(chǎn)生即時(shí)或者長遠(yuǎn)的傷害。微生物引起的食源性疾病在食源性疾病中占比較高，良好的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制才能保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)要加強(qiáng)對(duì)微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的重視程度，保障結(jié)果準(zhǔn)確可信，為監(jiān)管保駕護(hù)航。

2 食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的內(nèi)容

國家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測(cè)》（GB/T 27405—2008）中明確食品微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制包括人員，設(shè)施和環(huán)境條件，設(shè)備，試劑和培養(yǎng)基，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物5個(gè)方面，且應(yīng)分別從內(nèi)部質(zhì)量控制和外部質(zhì)量評(píng)估兩個(gè)方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。內(nèi)部質(zhì)量控制形式主要有使用添加已知水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的樣品；使用包括但不僅限于能力驗(yàn)證樣品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，檢測(cè)結(jié)果的平行評(píng)估和平行實(shí)驗(yàn)。外部質(zhì)量評(píng)估實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該定期參加與從事檢測(cè)項(xiàng)目相關(guān)的能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室比對(duì)、盲樣考核等外部質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃。外部質(zhì)量控制計(jì)劃對(duì)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制效果更好，其不僅可以在技術(shù)層面考核實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的偏差，對(duì)檢測(cè)技術(shù)人員的技術(shù)提升有很大幫助，還可以綜合考核整個(gè)單位質(zhì)量控制體系的有效性。

《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》（CNAS—CL01—A001：2018）中指出對(duì)于定量檢測(cè)項(xiàng)目，應(yīng)定期使用質(zhì)控樣品或者有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)控；對(duì)于定性檢測(cè)的項(xiàng)目，或用標(biāo)準(zhǔn)菌種污染樣品開展質(zhì)量控制；正常樣品采用留樣復(fù)測(cè)的方式開展內(nèi)部質(zhì)量控制，質(zhì)量控制活動(dòng)不限于人員比對(duì)、設(shè)備比對(duì)和方法比對(duì)等形式。質(zhì)量控制的頻率要滿足CMA對(duì)微生物項(xiàng)目每兩年一次的要求[3-4]。

在日常實(shí)際工作中實(shí)驗(yàn)室要針對(duì)檢驗(yàn)任務(wù)的具體情況，制定適合自己實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)部質(zhì)控計(jì)劃，并結(jié)合檢驗(yàn)任務(wù)和實(shí)驗(yàn)室考核實(shí)際有效地開展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制活動(dòng)。相關(guān)檢測(cè)機(jī)構(gòu)可以報(bào)名參加能力驗(yàn)證計(jì)劃（中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院等有能力驗(yàn)證組織能力和資質(zhì)的機(jī)構(gòu)），注意范圍要涵蓋自己?jiǎn)挝坏馁Y質(zhì)項(xiàng)目，也可以組織或者和參加實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)；對(duì)于內(nèi)部質(zhì)量控制計(jì)劃一定要與實(shí)驗(yàn)室實(shí)際結(jié)合，統(tǒng)籌考慮檢驗(yàn)任務(wù)量，在實(shí)際檢驗(yàn)過程中引入質(zhì)控，可以是每10批次或者20批次加入一個(gè)人員比對(duì)、方法比對(duì)。但最好不要做標(biāo)準(zhǔn)菌株污染菌的加標(biāo)回收，存在污染正常樣品的可能性。此外，對(duì)于人員比對(duì)的結(jié)果評(píng)價(jià)不能生硬照搬化學(xué)領(lǐng)域的原則，要結(jié)合微生物檢測(cè)的特殊性，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室不確定度合理設(shè)置可接受區(qū)間，應(yīng)根據(jù)實(shí)際檢驗(yàn)任務(wù)增加或者減少。相應(yīng)的質(zhì)控項(xiàng)目涉及陽性菌的指控項(xiàng)目最好單獨(dú)開展，以免影響實(shí)驗(yàn)環(huán)境。

3 微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要求及開展

除了在檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)過程中具體的實(shí)施質(zhì)量控制外，整體微生物實(shí)驗(yàn)室及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境設(shè)備試劑等方面的質(zhì)量控制也非常重要。

3.1 人員方面的要求及具體開展形式

生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)及管理人員需要有專業(yè)的微生物背景，有無菌操作、生物防護(hù)以及生物安全等方面的專業(yè)知識(shí)和技能，因生化鑒定涉及辨色實(shí)驗(yàn)，無色盲色弱也是基本要求。

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的管理者需要具備生物學(xué)專業(yè)背景，擁有微生物檢驗(yàn)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室管理能力的高素質(zhì)人員，還需要配備一名質(zhì)量監(jiān)督員，監(jiān)督員要了解微生物的檢驗(yàn)特點(diǎn)，熟悉微生物檢驗(yàn)流程。一般檢驗(yàn)人員需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法非常熟悉，要能夠敏銳識(shí)別檢驗(yàn)中的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)。微生物實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員必須經(jīng)過一定的考核并確認(rèn)能力后才能獲取相關(guān)資質(zhì)；微生物實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員要定期體檢，以防自身身體或者疾病狀況對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成影響；實(shí)驗(yàn)室人員需要定期參加檢驗(yàn)技術(shù)、生物安全、標(biāo)準(zhǔn)解讀等方面的培訓(xùn)以提高其理論知識(shí)儲(chǔ)備量和檢驗(yàn)?zāi)芰Γ⑶颐磕昝總€(gè)檢驗(yàn)人員都要以參加內(nèi)外部質(zhì)量控制的形式來考核其相關(guān)能力是否得到提升。實(shí)驗(yàn)室人員因個(gè)人原因或者崗位變動(dòng)不從事相關(guān)工作6個(gè)月后，要重新考核確認(rèn)能力后才能繼續(xù)返回工作。

3.2 培養(yǎng)基試劑耗材方面的要求及具體質(zhì)量控制

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室試劑主要是檢測(cè)用培養(yǎng)基，培養(yǎng)基及相關(guān)試劑被送到實(shí)驗(yàn)室后要做驗(yàn)收。①初級(jí)驗(yàn)收，即察看培養(yǎng)基是否過期、包裝是否破損、外部色澤狀態(tài)是否正常以及是否結(jié)塊等，并向供應(yīng)商索要生產(chǎn)商的質(zhì)控報(bào)告，如果是有毒有害試劑要索要相關(guān)危害數(shù)據(jù)文件。②在初級(jí)驗(yàn)收的基礎(chǔ)上要進(jìn)行培養(yǎng)基的技術(shù)性驗(yàn)收，技術(shù)性驗(yàn)收的對(duì)象是對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響的培養(yǎng)基試劑耗材。目前國家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)用培養(yǎng)基的作用原理主要是根據(jù)某種菌的特異性生化反應(yīng)來進(jìn)行檢測(cè)，所以培養(yǎng)基的關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)就是選擇性和生長率，不同性質(zhì)不同種類的培養(yǎng)基具體的驗(yàn)收方法也不相同，具體實(shí)驗(yàn)不在此處做詳細(xì)敘述，可以參考ISO/TS 11133或SN/T 1538.2—2016培養(yǎng)基制備指南，也可以依照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》 （GB 4789.28—2013）[5]中的具體方法開展驗(yàn)收。目前，隨著不斷地創(chuàng)新，許多知名廠家研發(fā)生產(chǎn)了一些便捷的快速檢測(cè)培養(yǎng)基和試劑，筆者認(rèn)為對(duì)這類試劑不能持排斥態(tài)度，應(yīng)本著驗(yàn)收測(cè)試有效性的原則做一部分應(yīng)用研究，并在此基礎(chǔ)上研究技術(shù)性驗(yàn)收方法，制定相關(guān)試劑驗(yàn)收程序。在能力允許的情況下，和現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)方法同步開展相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用研究工作，為加快微生物領(lǐng)域檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步起到積極推動(dòng) 作用。

另外培養(yǎng)基的使用、檢驗(yàn)用水的相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)、培養(yǎng)基的銷毀、相應(yīng)的一次性檢測(cè)用培養(yǎng)皿以及無菌拭子也需要做無菌測(cè)試實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)收。

3.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備方面的具體要求及質(zhì)量控制

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室需要配備開展檢驗(yàn)及相關(guān)活動(dòng)所需要的全部儀器設(shè)備，主要依照檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)來配置，包括生化培養(yǎng)箱、烘箱、pH計(jì)、冰箱、天平、滅菌鍋、超凈工作臺(tái)和紫外燈等。對(duì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的設(shè)備如生化培養(yǎng)箱需要定期進(jìn)行檢定，滅菌鍋屬于特殊壓力容器也需要定期檢定校準(zhǔn)，并且操作人員需要根據(jù)滅菌鍋的容量獲取壓力容器操作資格證。實(shí)驗(yàn)室需要制定設(shè)備操作規(guī)程以確保規(guī)范化使用，使用時(shí)要填寫使用記錄和檢驗(yàn)的樣品信息以保證檢測(cè)結(jié)果的可溯源性。相關(guān)設(shè)備需要根據(jù)使用頻次開展維護(hù)，若發(fā)生故障應(yīng)及時(shí)維修，維護(hù)維修時(shí)要張貼暫停使用標(biāo)簽，此外還需要定期對(duì)設(shè)備的性能進(jìn)行有效評(píng)估，避免影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。長時(shí)間不用的設(shè)備重新啟用時(shí)需要重新校準(zhǔn)或者做性能測(cè)試。

3.4 微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的環(huán)境要求及具體質(zhì)量控制

微生物實(shí)驗(yàn)室根據(jù)實(shí)際情況及實(shí)驗(yàn)要求安排培養(yǎng)基配置區(qū)域、潔凈操作區(qū)、培養(yǎng)區(qū)以及廢棄物處理區(qū)等，每個(gè)房間需要有紫外燈，各區(qū)域最好有硬隔離，并且各個(gè)工作區(qū)域的設(shè)置要符合單行工作流程的要求。另外微生物實(shí)驗(yàn)室的潔凈度、照度、壓力等方面都有具體要求，可以通過定期打掃衛(wèi)生，測(cè)試實(shí)驗(yàn)室的懸浮粒子數(shù)，測(cè)試實(shí)驗(yàn)室的浮游菌沉降菌，定期測(cè)試白光照度，紫外光照度，測(cè)試室內(nèi)壓力的方式開展實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制。

除以上方面的質(zhì)量控制外，微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室還需要做好樣品的處理、廢棄物的處理、實(shí)驗(yàn)室的管理等方面，才能全面保障微生物檢測(cè)結(jié)果的有效性。

4 微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的問題及建議

目前食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制主要存在以下幾方面問題：①在具體做哪些方面的質(zhì)量控制方面還沒有相關(guān)政策、文件或者標(biāo)準(zhǔn)可供參考，各級(jí)各類微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室沒有統(tǒng)一的參考標(biāo)準(zhǔn)；②目前很多機(jī)構(gòu)的檢驗(yàn)人員依照化學(xué)領(lǐng)域的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)要求微生物領(lǐng)域，但沒有規(guī)范的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，檢驗(yàn)效果差強(qiáng)人意；③大多實(shí)驗(yàn)室是重檢驗(yàn)任務(wù)量，輕質(zhì)量控制，沒有或者流于形式的質(zhì)量控制無法保障結(jié)果的準(zhǔn)確性與科學(xué)性；④現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)基本是基于微生物的生化反應(yīng)進(jìn)行定性定量，由于生物活性物質(zhì)的特點(diǎn)，微生物實(shí)驗(yàn)不需要復(fù)檢，這也使得很多檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室鉆空子，相關(guān)部門需要加大對(duì)微生物檢測(cè)技術(shù)的研究開發(fā)力度，使微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)控可以有章可循。

5 結(jié)語

微生物項(xiàng)目檢測(cè)是食品質(zhì)量安全檢測(cè)不容忽視的重要組成，本文從食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際工作出發(fā)提出了具體可行的質(zhì)量控制方法，以保障食品微生物檢測(cè)工作的順利開展。食品微生物檢驗(yàn)除了做好質(zhì)量控制外，還應(yīng)有科學(xué)精細(xì)的管理模式，才能多方面、全流程保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。