丹參多酚酸對急性腦梗死患者血清 GFAP、PGP9.5IL-5、IL-6、IL-8、IL-10表達水平和預(yù)后的影響

何地芹，方明昊，俞明明，劉紅娟，王 雯，王天任，汪青松

腦卒中是世界第二大死亡原因，估計治療成本占全球GDP的0.66%,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)[1]。每年我國腦卒中致死率為149/10萬人，其高居我國第一致死率[2]。成功再灌注治療為急性腦梗死患者提供了最有效的療法[3]。但由于溶栓和介入取栓時間窗窄,并且有一定的技術(shù)要求,限制了臨床使用,因此尋找新的治療方法顯得尤為重要。蛋白基因產(chǎn)物(serum protein gene products,PGP9.5)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)分別主要來源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,為重要腦損傷因子[4]。血栓形成和栓塞導(dǎo)致腦動脈堵塞,造成神經(jīng)元及神經(jīng)細(xì)胞損傷,分泌GFAP及PGP9.5。急性腦梗死患者血清PGP9.5和GFAP表達水平,在一定程度上反映了病情嚴(yán)重程度和預(yù)后情況[5]。

有研究表明IL-10、IL-5、IL-6、IL-8與急性缺血性卒中患者的梗死體積、病情嚴(yán)重程度和短期預(yù)后有關(guān)[6]。近年來,運用血清生物標(biāo)志物方法判斷急性腦梗死病情的研究越來越多,其中蛋白、炎性細(xì)胞因子等在急性腦梗死患者中均有異常表達,目前具體相關(guān)性尚不明確[7]。丹參多酚酸是從丹參中提取的一種中藥注射劑,研究表明其具有抗血栓形成、改善循環(huán)、保護神經(jīng)等作用[8]。我們既往的研究表明丹參多酚酸可減少大鼠腦梗死模型下游通路炎癥因子的釋放，抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡,從而減輕大鼠腦缺血/再灌注損傷[9]。有關(guān)丹參多酚酸通過調(diào)節(jié)炎性因子改善急性腦梗死患者臨床結(jié)局的研究,少見報道?；诖?本研究擬采用丹參多酚酸治療急性腦梗死患者,觀察丹參多酚酸對其血清 GFAP、PGP9.5、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10表達水平和治療3 m后mRS的影響,探索丹參多酚酸改善其損傷之可能機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2021年1月-2022年2月期間急性前循環(huán)腦梗死住院患者84例。按隨機數(shù)字表分為丹參組42例和對照組42例，同時期選取體檢中心健康人40例為基線組。丹參組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上聯(lián)合丹參多酚酸治療，對照組僅給予常規(guī)治療。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者行頭部磁共振證實，符合2018年中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會急性腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]；(2)年齡≥18歲；(3)發(fā)病在48 h以內(nèi)；(4)患者首次患急性腦梗死，或曾有急性腦梗死病史，但未留后遺癥，且不影響本次NIHSS及Barthel指數(shù)評分，卒中發(fā)病前 mRS 評分≤1分；(5)患者或家屬知情同意；(6)倫理委員會審核通過。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)丹參過敏者；(2)昏迷或嚴(yán)重失語者；(3)排除后循環(huán)梗死；(4)合并嚴(yán)重肝腎、腫瘤疾病；(5)排除近期有腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦腫瘤等其它腦部疾??；(6)合并肺部感染等有其它部位嚴(yán)重感染者；(7)檢查資料收集不完善者。

1.2 治療 對照組予以控制血糖、血壓、調(diào)脂、抗血小板聚集等處理,實時監(jiān)測患者生命體征。丹參組除上述基礎(chǔ)治療,采用1支(0.13 g)注射用丹參多酚酸(天津天士力之驕藥業(yè)有限公司)+250 ml 0.9%氯化鈉溶液,靜滴,每天一次。兩組均治療14 d。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 血清生物標(biāo)志物水平的檢測 (1)炎癥因子：丹參組、對照組治療前后 IL-5、IL-6、IL-8、IL-10水平和基線組水平;(2)腦損傷因子:丹參組、對照組治療前后GFAP、PGP9.5水平和基線組水平。所有入組的急性腦梗死患者在入院當(dāng)天及14 d分別采集靜脈血液標(biāo)本5 ml,將其置于正常室溫下自然凝固30 min，使用低溫高速離心機(4000 rpm，離心5 min)，提取血清于-80 ℃冰箱低溫保存。采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法分別測定血清PGP9.5、GFAP、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10(試劑盒由美聯(lián)泰科股份有限公司提供)水平，集中檢測。所有操作均嚴(yán)格按照操作說明書。

1.3.2 腦梗死體積的計算[6]選擇磁共振彌散加權(quán)成像(DWI)，采用多田公式:梗死體積等于最大長徑乘以同一平面最大寬徑乘以磁共振掃描陽性層數(shù)乘以1/2。入組所有患者在入院當(dāng)天及第14天行頭部磁共振掃描。

1.3.3 病情嚴(yán)重程度評估 分別在入院當(dāng)天和第14天行NIHSS、Barthel指數(shù)評估神經(jīng)功能缺損和日常生活能力。

1.3.4 預(yù)后評估 采用患者梗死后90 d改良Rankin評分(mRS)評估神經(jīng)功能恢復(fù)情況。根據(jù)mRS評分，將患者分為預(yù)后不良組(mRS>2)和預(yù)后良好組(mRS≤2)。

2 結(jié) 果

2.1 腦梗死組間臨床資料比較 腦梗死組組間臨床資料比較，無顯著差異性(P>0.05)(見表1)。

表1 腦梗死組間一般臨床資料比較

2.2 腦梗死組組間治療前后NIHSS評分、Barthel評分比較 兩組治療前比較無明顯差異(z=-0.907、0.126,P>0.05)。與對照組比較,治療14 d后丹參組NIHSS評分明顯降低(z=-2.796,P<0.05),而Barthel評分明顯升高(z=2.367,P<0.05)(見圖1)。

圖1 腦梗死組組間治療前后Barthel評分、NIHSS評分比較 (n=42)

2.3 腦梗死組組間梗死體積治療前后比較 治療前丹參組、對照組梗死體積分別為[4.22(0.7，8.1)]cm3、[4.9(1.3，13.7)]cm3，治療后兩組體積分別為[1.12(0.31，3.46)]cm3、[2.7(1.39，10)]cm3；兩組治療前比較，梗死體積無明顯差異(z=-0.966,P>0.05)。治療14 d后丹參組梗死體積較對照組顯著縮小(z=-2.756,P<0.05)。

2.4 兩組患者治療前后血清標(biāo)志物水平比較 與年齡、性別相匹配健康對照組(基線組n=40)相比,治療前梗死組血清GFAP、IL-6、IL-8、IL-10表達水平升高(z=7.270、2.587、6.778、6.564，均P<0.05);而血清PGP9.5、IL-5表達水平無明顯差異(z=1.429、1.203，均P>0.05)。兩組治療前GFAP、PGP9.5、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10比較，均無明顯差異(P>0.05)。丹參組治療后GFAP、IL-6、IL-8降低水平較對照組更顯著(z=-3.168、3.042、-2.38，均P<0.05)；而IL-10表達水平較對照組升高更明顯(z=2.13，P<0.05)；丹參組治療后PGP9.5、IL-5水平較對照組無明顯差異(z=-1.721、-0.125,P>0.05)(見表2)。

表2 兩組血清GFAP、PGP9.5、IL-5、IL-6、 IL-8 、IL-10治療前后比較

2.5 腦梗死組組間治療后90 d mRS比較 采用90 d改良Rankin評分(mRS)評估患者神經(jīng)功能恢復(fù)預(yù)后情況，丹參組中預(yù)后良好36例(85.71%)，預(yù)后不良6例(14.29%)。對照組中預(yù)后良好24例(57.14%)，預(yù)后不良18例(42.86%)。組間患者90 d預(yù)后差異有明顯差異(P<0.05)(見表3)。

表3 組間患者90 d mRS比較

3 討 論

GFAP是一種腦特異性星形膠質(zhì)細(xì)胞中間絲蛋白，Amalia的臨床實驗表明,在急性腦梗死患者中,血清GFAP水平越高,病情越重[11]。Williamson[12]研究表明,星形膠質(zhì)細(xì)胞對小鼠缺血再灌注后的血管修復(fù)和重塑至關(guān)重要。PGP9.5又稱UCH-L1(泛素羧基末端水解酶)，是大量集聚中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的細(xì)胞質(zhì)去泛素化酶[13]?？赡芘c其半胱氨酸152位點促進腦損傷后神經(jīng)元的恢復(fù)有關(guān)[14]。本研究分析可知,84例急性腦梗死患者血清GFAP表達水平明顯高于健康人，說明血清GFAP參與急性腦梗死發(fā)生過程,可作為腦梗死早期診斷的預(yù)測指標(biāo),與既往報道一致。而血清PGP9.5在急性腦梗死中與健康人卻無明顯升高,與許多學(xué)者報道不同[5],可能與PGP9.5敏感度與特異度較低、樣本量小、PGP9.5在血清中表達時間點不同有關(guān)。本研究只選取了治療前及治療后14 d兩個時間點,未來需選取多個時間點，擴大樣本量來觀察腦損傷因子與急性腦梗死關(guān)系。

據(jù)相關(guān)文獻報道，IL-10、IL-5是抗炎細(xì)胞因子,起著減輕或者抑制炎癥的作用;IL-6、IL-8是促炎細(xì)胞因子,起著促進炎癥作用[15]。IL-6同時激活 PI3K/AKT和JAK-STAT通路,其在急性腦梗死后恢復(fù)具有關(guān)鍵性作用[16]。總之，IL-6具有雙重效應(yīng)，在急性期作為炎癥因子,在非急性期作為神經(jīng)營養(yǎng)介質(zhì)。IL-8是一種可促進炎癥細(xì)胞趨化并且誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的細(xì)胞因子。Shaheen等研究表明[17],與正常組比較，急性腦梗死組血清IL-8水平明顯升高，同時和神經(jīng)功能缺損程度具有正相關(guān)性。IL-10主要是通過抑制炎癥反應(yīng)來實現(xiàn)腦保護作用。對 Th1淋巴細(xì)胞具有抑制效應(yīng)[18]。本研究結(jié)果顯示,急性腦梗死患者IL-6、IL-8、IL-10表達水平較健康人顯著升高,而IL-5表達水平與健康人無明顯差異。以上說明腦缺血后,IL-6、IL-8、IL-10細(xì)胞因子釋放,與腦缺血再灌注后炎癥的發(fā)生發(fā)展有關(guān),具體相關(guān)性需要進一步研究。減輕炎性因子所致的缺血半暗帶損傷可能是治療腦梗死后缺血再灌注的關(guān)鍵點。

Zhang等研究發(fā)現(xiàn)[19],丹參多酚酸可能是通過Sonic hedgehog信號通路，發(fā)揮神經(jīng)保護功能，其對神經(jīng)元內(nèi)在結(jié)構(gòu)具有積極效應(yīng)。李蒙等[20]研究發(fā)現(xiàn),丹參多酚酸改善大鼠腦缺血再灌注損傷可能與抑制PIDD信號通路、調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白、發(fā)揮其神經(jīng)保護作用。有研究表明[21,22],在大鼠MCAO缺血再灌注模型中，丹酚酸可以降低炎癥因子IL-6表達水平，上調(diào) IL-10，達到抗炎作用,減輕缺血再灌注損傷。在本研究中,腦梗死后在血清中的GFAP、IL-6、IL-8、IL-10表達較健康人顯著增加,同時丹參組、對照組在治療14 d后血清GFAP、IL-6、IL-8水平均下降且丹參組較對照組下降更明顯,IL-10表達水平在丹參治療后上升且丹參組較對照組上升更明顯，表明丹參多酚酸可有效抑制炎性反應(yīng)，減輕腦損傷。

本研究中丹參組和對照組NIHSS評分及梗死體積均在治療14 d后較對照組下降且丹參組較對照組下降更明顯。丹參組和對照組Barthel指數(shù)均在治療14 d后較對照組上升且丹參組較對照組上升更明顯。與Xin[23]的分析58項隨機對照實驗一致，證明丹參多酚酸可改善神經(jīng)功能缺損，提高日常生活活動能力。通過90 d mRS電話及門診隨訪，丹參組梗死后90 d較對照組有較好預(yù)后，提示丹參多酚酸可有效改善預(yù)后。

綜上所述，丹參多酚酸治療急性腦梗死可有效抑制炎性反應(yīng)，減輕腦損傷、提高日常行為能力、改善神經(jīng)功能及預(yù)后。由于本樣本量較少,臨床因素復(fù)雜性,存在一定的局限性，在未來需采用多中心、隨機雙盲的臨床研究予以證實。