炎性因子及CD4+T細(xì)胞濃度差異對(duì)穿支動(dòng)脈腦梗的影響

戚 游, 王 玉

腦梗死目前分型主要有五型,穿支動(dòng)脈腦梗死是其中重要的一種類型[1]。研究顯示[2]約30%～35%的腦梗死為穿支動(dòng)脈病變所致。穿支動(dòng)脈腦梗死指主干動(dòng)脈粥樣硬化性病變致穿支動(dòng)脈口狹窄閉塞和或遠(yuǎn)端小動(dòng)脈璃樣變,導(dǎo)致腦深部結(jié)構(gòu)如：內(nèi)囊前后支膝部、基底節(jié)區(qū)(包括尾狀核、竇狀核等結(jié)構(gòu))、丘腦核團(tuán)、中腦、橋腦、延髓等部位的孤立梗死[3]。約17%～75%的穿支動(dòng)脈閉塞型腦梗死患者在發(fā)病6 h～7 d內(nèi)雖經(jīng)過(guò)規(guī)律治療,但病情仍進(jìn)行性加重,且此類患者預(yù)后多不良[4]。目前眾多報(bào)道提示[5～10]多種疾病的發(fā)生進(jìn)展受到炎癥免疫反應(yīng)的影響。炎癥免疫反應(yīng)引發(fā)的動(dòng)脈粥樣硬化是穿支動(dòng)脈腦梗死發(fā)生進(jìn)展的病理學(xué)基礎(chǔ)之一[11,12]。目前也有炎癥免疫因子與腦梗死發(fā)生進(jìn)展的相關(guān)性報(bào)道[13,14],如有報(bào)道認(rèn)為：炎性因子可調(diào)節(jié)靜息T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞活性,激活的CD4+T細(xì)胞也可進(jìn)一步增強(qiáng)炎癥反應(yīng),此正反作用可對(duì)腦梗死患者的愈后造成不良影響[15,16]。穿支動(dòng)脈腦梗死發(fā)生進(jìn)展的機(jī)理機(jī)制復(fù)雜。目前,炎性因子免疫細(xì)胞與穿支動(dòng)脈腦梗死發(fā)生進(jìn)展的相關(guān)性研究較少。因此本研究探討血漿hs-CRP、IL-6、TNF-α及血液中CD4+T細(xì)胞對(duì)穿支動(dòng)脈腦梗死患者的病程影響,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2020年3月-2022年3月皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的134例穿支動(dòng)脈腦梗死患者資料。根據(jù)患者疾病進(jìn)程分為：進(jìn)展性穿支動(dòng)脈腦梗死患者(n=68)例(實(shí)驗(yàn)組)和非進(jìn)展性穿支動(dòng)脈腦梗死患者(n=66)例(對(duì)照組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)參照《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018》診斷[17]：①病情在6 h～7 d達(dá)峰；②均有符合血管分布的神經(jīng)功能缺損癥狀體征；③經(jīng)過(guò)影像檢查確診；④患者入院后均接受急性期腦梗死的規(guī)律規(guī)范治療；⑤腦梗死進(jìn)展診斷參考?xì)W洲進(jìn)展性卒中研究(EDSS)提出的診斷標(biāo)準(zhǔn)[18]；⑥神經(jīng)系統(tǒng)缺損嚴(yán)重程度根據(jù)MESSS評(píng)分評(píng)估[19]。(2)經(jīng)過(guò)患者自己或患者授權(quán)家屬簽字同意加入本研究。(3)發(fā)病前未使用對(duì)hs-CRP、IL-6、TNF-α 表達(dá)及血液中CD4+T細(xì)胞濃度具有影響的藥物。(4)經(jīng)頭頸部血管超聲、CTA或MRA檢查排除大血管病變,并對(duì)頸椎動(dòng)脈顱內(nèi)外段血管進(jìn)行斑塊數(shù)目超聲檢查及動(dòng)脈硬化程度評(píng)分。(5)經(jīng)心電圖檢查排除心律失常疾病。(6)部分病例經(jīng)過(guò)心臟發(fā)泡實(shí)驗(yàn)排除卵圓孔未閉等情況。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)各種類型腦出血；(2)腦損傷、腫瘤、寄生蟲(chóng)病等；(3)患者感染；(4)嚴(yán)重臟器功能不全；(5)免疫導(dǎo)致的血管炎性疾?。?6)對(duì)hs-CRP、IL-6、TNF-α 表達(dá)及血液CD4+T細(xì)胞濃度具有影響的藥物使用史；(7)中途脫落或退出者。實(shí)驗(yàn)組按照EDSS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[18]診斷為進(jìn)展性腦梗死。

1.2 標(biāo)本收集與準(zhǔn)備 收集患者入院時(shí)一般資料。晨起空腹抽5 ml血液,1000 rpm離心10 min,取上清液進(jìn)行固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法,對(duì)兩組患者血清中hs-CRP、IL-6、TNF-α進(jìn)行檢測(cè),試劑盒由煙臺(tái)酶聯(lián)生物有限公司提供,均在使用期內(nèi),按照說(shuō)明書進(jìn)行使用。CD4+T細(xì)胞檢測(cè)采用寧波久瑞生物工程有限公司的流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)。阿司匹林抵抗基因及氯吡格雷抵抗基因檢測(cè)由廣州歐蒙未一醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。頸部血管超聲檢查采用西門子Acusonx300進(jìn)口彩色多普勒超聲機(jī)器；CT及CTA成像采用64排螺旋CT；MRI檢查采用場(chǎng)強(qiáng)為1.5T磁共振機(jī)器。CT、彩超、MRI檢查操作均由相應(yīng)科室經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的同一影像技師完成,報(bào)告審閱由相應(yīng)科室的同一影像醫(yī)師審閱并報(bào)告。同時(shí)常規(guī)檢測(cè)所有入組對(duì)象血相關(guān)指標(biāo)。

1.3 觀察及判定指標(biāo) 比較兩組對(duì)象入院時(shí)基線數(shù)據(jù)和血漿hs-CRP、IL-6、TNF-α 及血液中CD4+T細(xì)胞濃度差異。實(shí)驗(yàn)組中進(jìn)展程度分組按照MESSS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[19]：0～15分；16～30分；31～45分,分別代表輕、中、重度。其中輕度進(jìn)展組42例(61.76%)；中度進(jìn)展組16例(23.53%)；重度進(jìn)展組10例(14.71%),比較不同疾病進(jìn)展程度患者上述炎性因子及血液中CD4+T細(xì)胞濃度。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者基線數(shù)據(jù)特征 實(shí)驗(yàn)組：男性33例,女性 35例；平均年齡(65.3±9.8)歲；吸煙者23例；酗酒者(飲酒后血液中的酒精含量達(dá)到或高于0.08 mg/100 ml)18例；LDL-C(4.87±2.38)mmol/L；HCY(14.1±8.7)μmol/L；體重指數(shù)超標(biāo)者[(實(shí)際體重-標(biāo)準(zhǔn)體重)÷標(biāo)準(zhǔn)體重×100%>20%]12例；高血壓變異性者[24 h舒張壓變異>15.1 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)24 h收縮壓變異>13.6mmHg)]24例；高血糖變異性者(24 h血糖波動(dòng)幅度>3.9 mmol/L)17例；阿司匹林抵抗基因攜帶者10例；氯吡格雷抵抗基因攜帶者29例。對(duì)照組：男性34例,女性 32例；年齡(64.9±9.7)歲；吸煙者22例；酗酒者14例；LDL-C(4.45±2.32)mmol/L；HCY(14.2±7.6)μmol/L；體重指數(shù)超標(biāo)者10例；高血壓變異性者22例；高血糖變異性者16例；阿司匹林抵抗基因攜帶者10例；氯吡格雷抵抗基因攜帶者27例。分析顯示兩組對(duì)象基線數(shù)據(jù)特征相比無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),具有可比性(見(jiàn)表1)。

表1 兩組患者基線數(shù)據(jù)特征

2.2 影響穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病進(jìn)展的因素行單因素分析 對(duì)兩組患者的hs-CRP、IL-6、TNF-α、CD4+T細(xì)胞行單因素分析,分析顯示實(shí)驗(yàn)組患者h(yuǎn)s-CRP、IL-6、TNF-α、CD4+T細(xì)胞值均高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 影響穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病進(jìn)展的因素行單因素分析

2.3 對(duì)影響穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病進(jìn)展的因素采用多因素Logistic回歸分析 將單因素分析中有差異的hs-CRP、IL-6、TNF-α 及血液中CD4+T細(xì)胞濃度作為自變量,將穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病進(jìn)展作為因變量進(jìn)行多因素Logistic分析,結(jié)果顯示CD4+T細(xì)胞濃度升高是穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)；hs-CRP、IL-6和TNF-α 表達(dá)升高同樣是穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)(見(jiàn)表3)。

表3 對(duì)影響穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病進(jìn)展的因素進(jìn)行多因素Logistic回歸分析

2.4 實(shí)驗(yàn)組不同嚴(yán)重程度組患者血漿炎性因子及CD4+T細(xì)胞濃度比較 實(shí)驗(yàn)組患者輕度42例,中度16例,重度10例。不同嚴(yán)重程度進(jìn)展性穿支動(dòng)脈腦梗死組患者炎性因子及CD4+T細(xì)胞濃度比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；且兩兩比較顯示隨著疾病程度進(jìn)展,血漿炎性因子及血液中CD4+T細(xì)胞濃度表達(dá)升高(P<0.05)(見(jiàn)表4)。

表4 實(shí)驗(yàn)組不同嚴(yán)重程度組患者血漿炎性因子及CD4+T細(xì)胞濃度比較

3 討 論

進(jìn)展性穿支動(dòng)脈腦梗死往往治療效果不佳,預(yù)后差,與其自身病理特點(diǎn)關(guān)系密切[20]：(1)腦穿支動(dòng)脈為終末動(dòng)脈，管徑小，血流快,與前后循環(huán)動(dòng)脈及軟膜動(dòng)脈吻合差,代償能力差；(2)栓子清除障礙,穿支動(dòng)脈血流少,栓子清除能力差,栓子形成后難以及時(shí)清除；(3)穿支動(dòng)脈血管病變后發(fā)生管腔延長(zhǎng)、迂曲、硬化、狹窄、閉塞等改變。穿支動(dòng)脈腦梗死發(fā)生進(jìn)展病理機(jī)制復(fù)雜[21～25]：(1)缺血損傷引起相應(yīng)區(qū)域血管神經(jīng)單元發(fā)生損傷,血管對(duì)神經(jīng)元興奮性變化無(wú)法快速反應(yīng),導(dǎo)致其無(wú)法保證區(qū)域性血流,血流中斷或受限使血腦屏障發(fā)生破壞,離子和其他可溶性物質(zhì)進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)破壞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)；(2)缺血損傷引發(fā)炎癥免疫級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致細(xì)胞蛋白內(nèi)穩(wěn)態(tài)失調(diào)、RNA結(jié)合蛋白功能失調(diào)及細(xì)胞蛋白骨架塌陷,最終造成細(xì)胞凋亡壞死;(3)缺血事件引發(fā)血小板異常聚集、炎癥免疫反應(yīng),可導(dǎo)致血管生態(tài)與穩(wěn)態(tài)破壞,本構(gòu)與重構(gòu)失調(diào),斑塊穩(wěn)定性減退,容易破裂與血栓形成,導(dǎo)致梗死進(jìn)展及不良預(yù)后。研究證明[26～30]炎性因子可活化多種信號(hào)通路,絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)就是重要信號(hào)通路之一,該信號(hào)通路活化后多種炎性因子表達(dá)上調(diào),導(dǎo)致細(xì)胞凋亡壞死加劇。IL-6是一種炎癥增強(qiáng)因子及調(diào)節(jié)因子,在炎癥免疫反應(yīng)中扮演重要角色[31]。腦梗死患者血漿中IL-6等多種炎性因子表達(dá)升高,升高的炎性因子可反饋調(diào)節(jié)活化CD4+T、CD8+T等多種免疫細(xì)胞,從而引發(fā)下游的一系列免疫炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)[32～33]。CD4+T細(xì)胞也可通過(guò)調(diào)控腦卒中后免疫損傷分子通路活性,直接或間接作用于神經(jīng)細(xì)胞,從而造成神經(jīng)損傷[34]。本研究顯示兩組對(duì)象血液CD4+T細(xì)胞濃度升高與穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病發(fā)生進(jìn)展關(guān)系密切；血漿hs-CRP、IL-6和TNF-α 表達(dá)升高與穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病發(fā)生進(jìn)展有相關(guān)性；疾病進(jìn)展程度越重，血漿hs-CRP、IL-6、TNF-α 及血液中CD4+T細(xì)胞表達(dá)越高。

綜上所述,進(jìn)展性穿支動(dòng)脈腦梗死患者血漿hs-CRP、IL-6、TNF-α 及血液中CD4+T細(xì)胞濃度明顯升高；隨著進(jìn)展性穿支動(dòng)脈腦梗死患者疾病嚴(yán)重程度升高其表達(dá)水平進(jìn)一步升高。監(jiān)測(cè)血漿中上述指標(biāo)對(duì)預(yù)測(cè)穿支動(dòng)脈腦梗死發(fā)生、進(jìn)展及進(jìn)展程度有極其重要的意義。通過(guò)對(duì)本研究中有意義指標(biāo)的監(jiān)測(cè)可為早期預(yù)測(cè)穿支動(dòng)脈腦梗死發(fā)展方向及愈后提供依據(jù)；指導(dǎo)盡早采取治療措施阻止此類腦梗死進(jìn)展；也可為尋找預(yù)測(cè)穿支動(dòng)脈梗死進(jìn)展的標(biāo)志物提供方向。本研究也存在一定不足：(1)樣本數(shù)目相對(duì)較少；(2)為單中心研究；(3)炎性因子免疫細(xì)胞在卒中后調(diào)控的具體機(jī)制尚不明確；(4)目前研究結(jié)論只能為尋找預(yù)測(cè)穿支動(dòng)脈梗死進(jìn)展標(biāo)志物提供方向。